牟旭鹏
- 作品数：19 被引量：32H指数：3
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划黑龙江省教育厅科学技术研究项目吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 甲型流感病毒M2e与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达被引量：1
- 2010年
- 目的将甲型流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)基因与人血清白蛋白(HSA)基因融合,以构建高效分泌表达的毕赤酵母菌株。方法通过RT-PCR扩增HSA基因,构建pPICZα-HSA质粒,将人工合成的M2e序列与pPICZα-HSA质粒分别经BstBI和KpnI酶切消化后连接,构建真核表达载体pPICZα-HSA/M2e,线性化后电转化毕赤酵母X-33。用PCR法筛选Zeocin抗性阳性的克隆,SDS-PAGE和Western印迹法筛选高表达HSA/M2e菌株。结果经RT-PCR法克隆的HSA基因序列与GenBank登录的cDNA序列一致,构建的pPICZα-HSA/M2e真核表达载体,经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆。SDS-PAGE和Western印迹分析证实了甲醇诱导的培养基上清中含有HSA/M2e,分子量约为68kD。结论成功构建了分泌表达重组HSA/M2e融合蛋白的毕赤酵母菌株,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。
- 牟旭鹏韦安慧申茉函孔宁颜炜群
- 关键词：甲型流感病毒血清白蛋白毕赤酵母
- 一种可降解PLK1和BRD4蛋白的化合物及其应用
- 本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种可以靶向泛素化降解PLK1和BRD4蛋白的化合物，及其药学上可接受的盐和以该化合物为活性成分的药物组合物，以及在制备PLK1和BRD4蛋白抑制和降解剂，及其用于作为治疗剂特别是作为治疗...
- 路海滨牟旭鹏白丽婷高卓林王莹赵麟萱
- 文献传递
- HER2/neu ECD毕赤酵母工程菌大规模发酵工艺研究被引量：1
- 2008年
- 采用补料分批培养方法,在80 L发酵罐中对HER2/neu ECD工程菌进行高密度发酵,发酵温度28℃,pH值为4.4,溶氧范围25%以上。在湿重值达到180 g/L时开始诱导,甲醇诱导体积分数为0.5%,发酵时间96 h。发酵液离心后,上清经阳离子交换层析,对其表达产物进行纯化。结果表明:在优化发酵条件下,发酵上清通过阳离子交换层析纯化,可获得纯度较高的重组HER2/neu ECD,产量为600 mg/L。
- 韩冬徐煌牟旭鹏孔宁颜炜群关铭
- 关键词：毕赤酵母发酵
- 水曲柳皮总香豆素提取工艺研究被引量：3
- 2008年
- 目的筛选水曲柳总香豆素的最佳提取工艺。方法采用正交实验设计L9(34)考察浸渍时间,乙醇浓度,水浴温度,提取时间4个因素对提取工艺的影响。结果水曲柳中总香豆素含量的最佳工艺为水曲柳粗粉加25倍量95%乙醇,室温超声提取45 min。结论优选的超声提取条件工艺简单,成本低,节能省时,可增加水曲柳的利用率。
- 陈玉娟张宏桂孙严彤王会堂贺丽鹏牟旭鹏
- 关键词：水曲柳正交实验总香豆素
- 禽流感病毒感染K-562和HL-60肿瘤细胞系的实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的选择代表不同骨髓细胞分化阶段的血液肿瘤细胞株K-562、HL-60作为研究对象,选取低致病性禽流感病毒H3N2/H4N6作为病原体,探讨禽流感病毒感染骨髓的机制。方法应用流式细胞术检测K562等细胞表面禽流感病毒受体;收集感染病毒的细胞培养上清,红细胞凝集实验检测染毒细胞释放的子代病毒;收集感染病毒的细胞免疫荧光检测病毒NP,判断病毒吸附、进入细胞并在细胞内增殖、复制情况。结果所检测细胞表面均有禽流感病毒SAα2,3-Gal和SAα2,6-Gal连接的唾液酸寡糖受体的表达。在H3N2感染的K-562细胞培养上清中检测到病毒HA,且随培养时间的延长,病毒的血凝滴度增大。在H4N6感染的K-562细胞的培养上清中病毒HA检测阳性,第三天,K-562细胞上清的病毒血凝滴度即达4,第四天达16;HL-60细胞,只在第三、四天达2;随后荧光显微镜下观察可见,染毒细胞培养0h时,胞膜、胞浆内即可见病毒分布,H4N6感染的细胞荧光强度大于H3N2感染的细胞;H3N2和H4N6感染的细胞中,K562细胞的荧光强度大于其他细胞。随着培养时间的延长,K562细胞表面的病毒增多,而HL-60细胞无明显变化。结论 K-562、HL-60细胞表面均表达禽流感病毒SA-α2,3Gal和SA-α2,6Gal连接的唾液酸寡糖受体。同一病毒H3N2或H4N6的吸附、繁殖和复制及释放情况存在较大差异。
- 张红梅赵丹吴玫牟旭鹏周伯平
- 关键词：禽流感病毒植物凝集素
- 流感病毒M2e蛋白的制备及其抗甲型流感病毒研究
- M2 (Matrix protein 2,M2)蛋白是流感病毒主要的膜蛋白之一。研究发现,针对M2蛋白的单克隆抗体在细胞培养中具有抑制流感病毒复制的功能。进一步证明,M2蛋白胞外功能区(Extracellular dom...
- 牟旭鹏
- 关键词：人血清白蛋白甲型流感病毒毕赤酵母
- 文献传递
- 毛状根在植物次生代谢产物生产方面应用的研究进展被引量：9
- 2010年
- 毛状根培养是生产植物次生代谢产物的新途径、新方法。对毛状根培养生产次生代谢产物的技术特点、毛状根诱导的分子机理以及利用毛状根生物反应器大规模生产植物次生代谢产物的研究进展进行阐述,为利用毛状根培养技术大规模生产有用药物提供参考。
- 陈伟莉牟旭鹏刘冬影
- 关键词：毛状根次生代谢产物生物反应器
- 人碱性成纤维细胞生长因子cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达
- 2008年
- 目的:克隆和表达人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF),以便进一步研究其功能。方法:从人神经胶质瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法,扩增出hbFGF cDNA片段,与pMD18-T载体连接后作DNA序列分析,并用亚克隆的方法构建pPICZα-hbfFGF,将测序正确的重组质粒用SacI线性化后电转化至毕赤酵母X-33,经PCR法、SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物,从而筛选出能够稳定、高效分泌表达hbFGF的酵母工程菌。结果:经测序证实获得的hbFGF序列与GenBank(登录号NM002006)报道的完全一致,甲醇诱导表达后培养液上清的SDS-PAGE凝胶电泳显示在相对分子质量约18000有一蛋白条带,Western blotting结果显示表达产物与抗人碱性成纤维细胞生长因子抗体产生特异性条带,证明rhbFGF蛋白的表达。结论:成功克隆了hbFGF基因,并在毕赤酵母体系中进行了表达。
- 牟旭鹏孔宁申茉函韩东张林颜炜群
- 关键词：成纤维细胞生长因子2毕赤酵母逆转录聚合酶链反应
- 影响禽流感病毒(H3N2/H4N6)感染机制的生物信息学分析被引量：1
- 2013年
- 目的通过生物信息学分析禽流感病毒WDK/ST/27/03（H3N2）和Dk/ST/472/03（H4N6）HA、NA氨基酸序列,进一步探讨影响禽流感病毒感染血液肿瘤细胞株K-562和HL-60的机制。方法 RT-PCR扩增WDK/ST/27/03（H3N2）和Dk/ST/472/03（H4N6）HA、NA基因,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,对纯化的PCR产物进行测序。在GenBank中选取登录的H3N2和H4N6序列,利用在线生物信息工具ClustalW2（http：//www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/）对这些序列和WDK/ST/27/03（H3N2）和Dk/ST/472/03（H4N6）HA、NA氨基酸序列进行比对分析。结果 RT-PCR扩增产物的大小与预期相符。生物信息学分析显示,WDK/ST/27/03（H3N2）HA的裂解位点是QNR＊GLFG,Dk/ST/472/03（H4N6）HA的裂解位点是KAAR＊GLFG,此位置的氨基酸无变化。HA的226位氨基酸为Gln（Q）,228位氨基酸为Gly（G）,具有禽流感病毒HA受体结合位点的特征,影响受体结合的位点98Y、136S、152W、183H、190E、194L、222W、225G、227S未见变异。NA活性位点及影响酶活的位点均无变异,但WDK/ST/27/03（H3N2）NA在接近N-末端的茎部61~79位缺失19个氨基酸,致使NA茎部变短,且丢失2个潜在的糖基化位点。结论 WDK/ST/27/03（H3N2）的NA茎部缺失突变可能是造成其吸附、繁殖和复制能力低于Dk/ST/472/03（H4N6）的一个因素。
- 张红梅赵丹吴玫牟旭鹏周伯平
- 关键词：流感病毒血细胞凝集素神经氨酸酶生物信息学
- rhTRAIL对黑色素瘤A-375细胞凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:研究重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(rhTRAIL)对黑色素瘤A-375细胞生长及诱导细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:将培养的黑色素瘤A-375细胞分为对照组和rhTRAIL低、中、高剂量组(0.25、0.50、1.00mg·L-1),经不同剂量rhTRAIL作用后,观察细胞形态;MTT法检测细胞存活分数;TUNEL法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化。结果:对照组细胞呈梭形贴壁或半贴壁生长,rhTRAIL组一部分细胞变圆,贴壁不佳,细胞数低于对照组。与对照组比较,rhTRAIL明显抑制黑色素瘤A-375的生长,1.00mg·L-1组的生长抑制率最高,0.50mg·L-1组次之,0.25mg·L-1组最低,3组间比较差异有显著性(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,rhTRAIL蛋白可诱导A-375细胞凋亡,rhTRAIL低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为6.68%、24.59%和28.91%,且凋亡率随剂量增大而升高,3组间比较差异有显著性(P<0.05)。rhTRAIL低、中、高剂量组细胞处于G1期的百分率(45.26%、60.67%和69.10%)明显高于对照组(37.41%)(P<0.05)。结论:rhTRAIL对A-375细胞生长有显著的抑制作用,呈剂量依赖性,其机制可能与细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡有关。
- 陈伟莉牟旭鹏班磊刘韦申茉函颜炜群
- 关键词：黑色素瘤TRAIL
