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王卫华: 作品数：63 被引量：166H指数：6; 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金军队科研计划项目国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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APE表达水平与胃癌临床病理因素的相关性分析被引量：3: 2007年; 目的:研究胃癌患者不同胃黏膜组织无嘌呤无嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclase APE)的表达水平与临床病理因素的相关性。方法:利用已构建好的包含208例胃癌患者胃癌、正常胃黏膜和转移淋巴结的组织芯片,用免疫组化方法检测不同组织APE表达水平,结合患者的临床资料进行统计分析。结果:正常组织和转移淋巴结中细胞核、细胞质APE表达水平与临床各病理因素之间没有明确相关性;胃癌组织中胞核表达与肿瘤浸润深度(P=0.000)、有无淋巴结转移(P=0.010)、TNM分期(P=0.000)有明显相关,浸润深度越深、出现淋巴结转移和TNM分期越晚,则胞核表达越弱,胞核表达还显示出与性别有一定相关性,男性表达水平较女性高(P=0.048),胞质表达水平则与性别无明确相关性,只显示与淋巴结转移(P=0.017)和TNM分期(P=0.019)有关,有淋巴结转移和TNM分期较晚的患者胞质表达水平较弱。结论:随着胃癌的进展,肿瘤分期越晚、浸润深度越深和出现淋巴结转移,则胃癌组织中胞质和胞核的APE表达水平越低。; 徐世平黄海力吴本俨王孟薇王卫华尤纬缔; 关键词：免疫组织化学组织阵列分析

旋转发生器培养扩增人皮肤成纤维细胞被引量：1: 2011年; 目的:研究旋转发生器扩增人皮肤成纤维细胞的可行性。方法:利用组织贴壁法从人皮肤中分离出人真皮成纤维细胞(hDFBs),使用DIO标记细胞后结合微载体在旋转发生器(RCCS)中培养,细胞贴附微载体的状况使用荧光显微镜、扫描电镜观测。并且检测细胞周期和分析细胞群体倍增时间,以比较微重力培养与平面培养的体外增殖能力差异。对照组细胞按常规平面培养。结果:在旋转发生器的微重力培养体系中,人成纤维细胞能快速贴附到微载体表面,在培养过程中达到很大的细胞密度,旋转发生器培养的细胞倍增时间为(2.99±0.50)d,对照组为(3.43±0.42)d(P<0.05);旋转发生器培养细胞增殖指数48.2±4.3,对照组35.2±3.4。结论:利用生物反应器和微载体悬浮培养人皮肤成纤维细胞,是大量制备皮肤组织工程种子细胞的一种有效方法。; 晁洋倪华兰青艳李娟王卫华金岩; 关键词：微载体人真皮成纤维细胞

GCRG224在大肠杆菌中的表达及重组蛋白纯化被引量：1: 2007年; 目的:利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG224,制备高纯度的GCRG224蛋白。方法:采用PCR技术从pGEM-T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG224 cDNA序列,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体pET102/D-TOPO中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达融合蛋白,凝胶回收目的蛋白。结果:SDS-PAGE证实在大肠杆菌中高效表达出相对分子量约16.8ku的Thioredoxin/GCRG224融合蛋白。薄层凝胶扫描显示,其表达量占菌体总蛋白质的22.3%。经凝胶回收法得到纯度近100%的蛋白产品。结论:在大肠杆菌中成功表达Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,并制备了高纯度的蛋白产品,为后续功能研究及其抗体研制创造了条件。; 伍银桥王刚石王孟薇吴本俨尤纬缔王卫华; 关键词：胃肿瘤癌基因蛋白质类原核细胞纯化

miR-92b对人胃癌细胞SGC7901迁移、粘附和侵袭的影响被引量：3: 2014年; 目的探讨mi R-92b对胃癌细胞迁移、粘附和侵袭能力的影响及其相关的分子机制。方法在人胃癌SGC-7901细胞中瞬时转染mi R-92b inhibitor和mi R-92b mimics后,经划痕实验、细胞迁移实验、基质胶粘附实验和Transwell侵袭实验观察对细胞转移的影响;Western blot检测E-Cadherin、Vimentin、Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果 SGC-7901细胞转染mi R-92b inhibitors后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量减少(P<0.05);Western blot结果显示E-Cadherin表达升高,Vimentin表达降低,Akt和p-Akt的表达升高。转染mi R-92b mimics后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量增多(P<0.05);E-Cadherin表达降低,Vimentin表达升高,Akt和p-Akt表达降低。结论 mi R-92b介导SGC7901细胞发生上皮-间质转化,促进肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,可能通过非PI3K/Akt途径促进肿瘤细胞的转移。; 王卫华王昌正蒋一吴本俨; 关键词：胃癌迁移粘附上皮-间质转化

胃癌相关基因GCRG213的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2004年; 目的 :利用硫氧还蛋白融合表达系统表达胃癌相关基因GCRG2 13。方法 :采用PCR技术从pGEM T质粒上扩增出含完整ORF的GCRG2 13cDNA序列 ,将其克隆至硫氧还蛋白融合表达载体 pET10 2 /D TOPO中 ,转化大肠杆菌BL2 1,经IPTG诱导表达重组融合蛋白 ,SDS PAGE分析表达产物。结果 :高效表达出相对分子量约2 9.4ku的重组融合蛋白。薄层凝胶扫描显示 ,其表达量占菌体总蛋白质的 2 8.7%。结论 :在大肠杆菌中成功表达了Thioredoxin GCRG2 13融合蛋白 ,为后续功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。; 伍银桥王刚石王孟薇吴本俨尤纬缔王卫华; 关键词：胃癌基因克隆大肠杆菌基因表达

心房可兴奋间期对山羊心房颤动稳定性的影响被引量：3: 2005年; 目的研究山羊心房可兴奋间期(EP)在心房颤动(房颤)稳定过程中的作用.方法在10只山羊的左心房游离壁外膜缝合电极片,利用自制的房颤刺激器于体外发放50 Hz的刺激1 s,每次间隔2 s,诱发维持时间超过24 h的持续性房颤.定期终止刺激,记录房颤自发持续时间,计算平均房颤波周长(AFCL),并在房颤持续过程中利用感知房颤波发放刺激夺获心房的方法测量房颤时心房有效不应期(ERPAF),计算EP(EP= AFCL-ERPAF).结果 8只山羊完成实验,均在6～16(9.3±4.6)d内诱发出持续超过24 h的持续性房颤.在房颤自发维持达3～10 min和24 h时的AFCL分别为98.3 ms ±11.0 ms与84.9 ms ± 5.2 ms ,P<0.05;ERPAF分别为90.5 ms ±13.2 ms与63.0 ms ± 4.8 ms,P<0.05;EP分别为7.8 ms ± 2.4 ms与21.9 ms ± 3.5 ms,P<0.05.结论心房ERPAF的缩短大于AFCL的缩短,使得EP持续性增宽,可能在房颤的稳定过程中起重要作用.; 单兆亮王玉堂时向民闫俊瑾周俊彦国建萍王卫华李天德; 关键词：心房颤动电生理学山羊

miR-18b对胃癌细胞凋亡的影响被引量：3: 2011年; 目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-18b(miR-18b)对胃癌细胞系SGC-7901凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法 miR-18b inhibitor对SGC-7901细胞进行转染;流式细胞仪进行细胞凋亡检测;Western blot检测P53、Bcl-2的表达变化。结果在SGC-7901细胞中抑制miR-18b的表达,能够促进细胞凋亡,并能降低凋亡相关蛋白P53、Bcl-2的表达。结论 miR-18b在胃癌的发生、发展中起一定作用,其可能通过调节P53、Bcl-2的表达而影响细胞凋亡。; 王昌正吴本俨王卫华张文辉; 关键词：胃癌微小RNA 细胞凋亡

AIF基因真核表达载体的构建及其在MGC-803中的表达: 2009年; [目的]检测胃癌标本中AIF基因是否存在碱基突变;构建AIF基因真核表达载体AIF-GFP;并检测其在胃腺癌细胞株MGC-803中的表达。[方法]应用RT-PCR的方法分别从5例胃癌组织标本中提取总RNA,进一步扩增出全长的AIF基因;将其克隆到pMD19-T载体进行测序,并亚克隆至真核表达载体pEGFP-N2,重组载体AIF-GFP采用脂质体法瞬时转染MGC-803细胞,荧光显微镜观察AIF-GFP在细胞中的表达。[结果]由5例胃癌组织标本提取的mRNA所扩增出的AIF基因的序列与Gene Bank中AIF(AF100928)序列完全一致,胃癌组织中均未发现碱基突变;构建了真核表达载体AIF-GFP;并将其转染MGC-803进行表达。[结论]胃癌中AIF基因未发生碱基突变;AIF-GFP真核表达载体,在MGC-803细胞中获得了表达,为进一步探讨AIF在胃癌诊治中的应用奠定了基础。; 王昌正吴本俨黄海力李英男王卫华; 关键词：胃肿瘤凋亡诱导因子基因突变基因表达

胃癌及其转移灶中S100A6基因的表达被引量：4: 2008年; 目的分析S100A6在胃癌发展过程中的作用，研究配对胃癌组织以及转移灶中S100A6基因mRNA和蛋白的表达。方法应用实时定量逆转录聚合酶链反应（QRT—PCR）检测20例配对胃癌组织中S100A6mRNA的表达，构建208例胃癌患者配对胃癌组织及转移淋巴结病灶的组织芯片，采用免疫组化方法检测S100A6蛋白的表达，并分析其与临床病理因素以及预后之间的相关性。结果QRT—PCR检测结果显示，20例配对胃癌中，有14例的S100A6mRNA转录水平升高，平均升高倍数为2．25倍。免疫组化检测结果显示，S100A6在正常胃黏膜中的表达阳性率为34．3％，在癌灶中表达阳性率为84.1％，在淋巴结转移灶中表达阳性率为90．9％，癌灶和淋巴结转移灶表达高于正常胃黏膜（P〈0．05）。65．5％的胃癌组织中S100A6表达较对应正常胃黏膜升高。癌灶中S100A6表达与肿瘤大小和侵袭程度相关，肿瘤越大表达越高（P=0．022），侵袭越深表达越高（P=0．000），未发现S100A6表达与其他临床病理因素之间的相关性。S100A6表达与预后无关，但相对于正常胃黏膜，癌灶中S100A6表达升高者的预后比表达下降者差。结论S100A6表达上调是胃癌早期事件，与胃癌的发生、发展相关。; 黄海力吴本俨朱旭东尤纬缔王卫华王孟薇; 关键词：胃肿瘤基因表达

人黑色素瘤相关抗原Restin的克隆和表达: 2009年; 目的:通过对原核表达载体、表达条件和宿主菌的优化,利用原核表达系统有效表达可溶性的人Restin融合蛋白。方法:应用PCR方法扩增获得Restin编码区,克隆入原核表达载体pET44a(+),分别转化E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3),不同的IPTG浓度诱导表达Restin重组融合蛋白,SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物。结果:成功构建了重组载体pET44a(+)-Restin,并在E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3)中获得了可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的8.9%。结论:可溶性Restin融合蛋白的获得为后续的功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。; 王卫华路凡沈琦; 关键词：RESTIN 原核表达重组融合蛋白

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