王瑞刚
- 作品数：246 被引量：464H指数：11
- 供职机构：内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学医药卫生更多>>
- 中间锦鸡儿CiCPK32基因在调控植物抗逆性的应用
- 本发明涉及生物基因工程领域，具体而言，涉及中间锦鸡儿CiCPK32基因，同时涉及该基因的功能研究和在调控植物抗逆性的应用。本发明利用中间锦鸡儿的转录组数据库，从中间锦鸡儿中克隆得到与非生物胁迫相关的CiCPK32基因，在...
- 李国婧于秀敏王瑞刚杨飞芸丛靖宇红格日其其格杨天瑞
- 文献传递
- 柠条锦鸡儿CkLEA4-2基因的克隆与功能分析被引量：2
- 2017年
- 胚胎发育晚期丰富(LEA)蛋白在植物抵抗非生物胁迫过程中起着重要作用。利用RACE技术从柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)中克隆得到一个LEA_4家族基因Ck LEA4-2,其cDNA全长963 bp,编码240个氨基酸。实时荧光定量PCR检测发现CkLEA4-2的表达受干旱、脱水、NaCl、冷、高pH、脱落酸(ABA)处理的诱导。通过构建35S启动子驱动的pCanG-CkLEA4-2植物过表达载体,研究转基因拟南芥并发现,过表达Ck LEA4-2提高了拟南芥在ABA处理及NaCl和甘露醇胁迫下的萌发率。在幼苗生长阶段,转基因拟南芥的抗旱性增强,失水率低于野生型,并且积累了较少的丙二醛,脯氨酸和谷胱甘肽含量高于野生型。同时,CkLEA4-2过表达后使ABA2、AAO3等ABA信号途径基因以及胁迫响应基因RD22、RD29A和MYB2的表达量升高。结果表明,Ck LEA4-2基因参与了植物逆境应答过程,并提高了转基因拟南芥的抗旱能力。
- 于秀敏岳文冉张燕娜王瑞刚李国婧杨杞
- 关键词：非生物胁迫柠条锦鸡儿转基因拟南芥
- 中间锦鸡儿WRKY75基因对拟南芥耐受盐和ABA能力的影响被引量：7
- 2018年
- 该研究从旱生灌木中间锦鸡儿中克隆得到1个CiWRKY75基因。序列分析显示,CiWRKY75开放阅读框长570bp,编码189个氨基酸,含有1个WRKYGQK基序和1个C2H2型锌指结构,属于第二类WRKY转录因子。亚细胞定位显示,CiWRKY75定位于细胞核。实时荧光定量PCR检测表明,CiWRKY75基因的表达受盐胁迫和ABA诱导。在拟南芥中过量表达CiWRKY75后,与野生型拟南芥相比,转基因株系种子的萌发率在盐胁迫下降低,并且对盐胁迫的耐受能力明显减弱;ABA处理下,2个转基因株系的种子萌发率(10.3%、9.6%)较野生型(25.9%)明显降低。研究表明,CiWRKY75是中间锦鸡儿对盐和ABA响应的重要调控因子。
- 万永青毛铭铢万东莉万东莉王光霞李国婧王光霞
- 关键词：中间锦鸡儿WRKY转录因子盐胁迫转基因拟南芥
- 异源表达CiRS基因通过生成白藜芦醇增强拟南芥的抗氧化能力被引量：3
- 2017年
- 白藜芦醇是一种具有多种医疗保健作用的植物芪类次生代谢产物,在农业、医药、食品和化妆品等领域受到广泛的关注。白藜芦醇合酶是白藜芦醇生物合成中唯一必需的关键酶,决定植物体内白藜芦醇的合成。将中间锦鸡儿中克隆到的CiRS基因(Gen Bank登录号MF678590)转入野生型拟南芥,实验结果显示:野生型的总黄酮含量明显高于转基因株系。HPLC测得转基因拟南芥中有白藜芦醇的生成,并且含量最高达335μg/g FW。紫外照射处理后转基因植物中丙二醛的积累量明显少于野生型。转基因植物提取物DPPH自由基清除能力均高于野生型。这些结果表明,中间锦鸡儿CiRS基因异源表达后利用与黄酮类物质的共同底物合成了白藜芦醇,使得转基因植物的抗氧化性增强。
- 杨飞芸武燕燕崔爽张秀娟王瑞刚李国婧
- 关键词：白藜芦醇合酶中间锦鸡儿白藜芦醇转基因拟南芥
- 表面活性剂对转枯草芽孢杆菌纤溶酶基因烟草根系BSFE分泌表达的调节被引量：1
- 2005年
- 0.05%～8%(w/v)浓度的常用表面活性剂Triton×100、SDS、DMSO和Tween20可使转枯草芽孢杆菌纤溶酶(Bacillus subtilis fibrinolytic enzyme,BSFE)基因烟草增加BSFE在根系中的分泌或增加其在水培液中的稳定性,从而促进转BSFE基因烟草水培液BSFE活性的增加.其单位根体积下水培液BSFE活性与培养天数呈抛物线型变化趋势,可模拟为二次回归模型.这种促进作用与表面活性剂的浓度有关.一定浓度的Triton×100、SDS、DMSO和Tween20可作为转BSFE基因烟草根系分泌表达的有效化学调节剂.
- 王瑞刚王彦曹前进吴自荣王水平
- 关键词：烟草根系化学调节纤溶酶SDS
- 中间锦鸡儿CiCHIL克隆及其黄酮代谢功能研究
- 2016年
- 植物的次生代谢产物能够为植物的果实和花着色、有助于种子的形成、花粉的传播、适应外界逆境及防御害虫的攻击。苯丙烷代谢途径是植物中一个重要的次生代谢途径,苯丙烷代谢通路上有几条主要的分支,分支下游产生了上千种化合物。查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)是苯丙烷通路上的一个关键酶,催化查耳酮到黄烷酮的反应,主要作用是帮助底物进行正确的分子内环化反应,生成的黄烷酮类化合物成为苯丙烷代谢途径下游产物的底物。从中间锦鸡儿干旱胁迫抑制性削减杂交文库中克隆得到一个CHI基因家族成员,序列分析和系统进化分析表明,该基因属于CHIL基因亚家族成员,命名为CiCHIL。实时荧光定量PCR检测发现,该基因受UV-B诱导且过表达CiCHIL具有较强的抵御紫外胁迫的能力。对过表达株系进行RNA和蛋白质水平的检测,对挑选出来的过表达株系进行总黄酮含量检测,发现过表达株系总黄酮含量显著高于野生型。
- 韩晗包旦奇杨飞芸刘坤杨天瑞杨杞李国婧王瑞刚
- 关键词：WESTERNBLOT总黄酮含量中间锦鸡儿
- 拟南芥AtiPGAM2基因参与非生物胁迫的响应
- 2024年
- 【目的】AtiPGAM2 基因是拟南芥(Arabidopsis thaliana)碱性磷酸酶超家族的成员,参与糖酵解过程。研究AtiPGAM2基因在逆境胁迫下的响应机制,为进一步研究AtiPGAM2的抗逆功能奠定基础。【方法】使用PlantCARE在线软件对AtiPGAM2基因启动子顺式作用元件进行分析。采用实时荧光定量PCR,检测AtiPGAM2在NaCl和ABA胁迫下的响应模式。克隆AtiPGAM2基因转入拟南芥,获得AtiPGAM2基因超表达株系。利用三引物法鉴定Atipgam2突变体。对过表达、突变体和野生型在盐胁迫下的萌发率、绿苗率以及各种非生物胁迫(甘露醇、ABA和MeJA)下的表型,进行统计分析。【结果】其启动子上存在多个光、MeJA、低温、ABA、SA、GAs等非生物胁迫和激素响应元件。荧光定量PCR分析显示,AtiPGAM2在NaCl和ABA胁迫下受到不同程度的诱导。成功获得AtiPGAM2基因过表达和突变体株系。在盐胁迫条件下AtiPGAM2过表达株系萌发率以及绿苗率均高于野生型,突变体表型则相反。甘露醇处理下突变体的萌发率低于野生型。ABA处理48 h内突变体和过表达AtiPGAM2株系的萌发率都低于野生型。MeJA处理下过表达的侧根数量高于野生型,突变体则相反。【结论】AtiPGAM2具有耐盐性,该基因响应甘露醇、ABA 和MeJA处理。
- 李景艳周家婧袁媛苏晓艺乔文慧薛岩磊李国婧王瑞刚
- 关键词：拟南芥盐胁迫非生物胁迫甘露醇MEJA
- 中间锦鸡儿CiNAC42基因序列分析及遗传转化
- 2020年
- NAC转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,在植物应答各种胁迫和生长发育过程中有重要的功能。该研究利用RACE技术克隆得到了CiNAC42基因的cDNA全长序列。生物信息学分析显示,该基因序列包括长度为933 bp的开放阅读框(ORF),可以编码311个氨基酸,N端具有保守的NAM结构域。利用实时荧光定量PCR对该基因的表达模式进行了检测,发现该基因在叶片中表达量最高,根中表达量最低。通过电极法将重组质粒pCanG-CiNAC42植物过表达载体转化到农杆菌GV3101中,利用浸花法转化野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana),获得了阳性转基因拟南芥纯合子株系,为进一步研究转基因拟南芥功能提供了基础。
- 红格日其其格王燕飞田敏特日格乐赵鑫李国婧王瑞刚
- 关键词：中间锦鸡儿转基因拟南芥
- 中间锦鸡儿CiCesA3的克隆及表达分析被引量：1
- 2020年
- 为了研究中间锦鸡儿Caragana intermedia纤维素合酶基因(cellulose synthase,CesA)的结构及表达特性,通过同源克隆及RACE(rapid amplification of cDNA end)技术,获得1条中间锦鸡儿CesA基因的全长cNDA序列.NCBI Blast结果显示该基因与野生大豆Glycine soja基因GsCesA3相似度最高(94%),因此命名为CiCesA3.CiCesA3基因cDNA全长为3 475bp,其中5’UTR长为175bp,3’UTR长为76bp,开放阅读框长度为3 225bp,编码1 075个氨基酸.CiCesA3蛋白预测分子质量为119.89ku,第16位到第79位氨基酸为CesA蛋白保守的锌指结构(Cx2Cx12FxACx2CxEx5Gx3Cx2C).CiCesA3蛋白C端有6个跨膜结构域,为亲水性蛋白.qRT-PCR检测不同组织中基因表达量的结果表明CiCesA3在叶中表达量最高.以上结果证明中间锦鸡儿CiCesA3基因与其他植物CesA基因相似,并无变异,为阐明中间锦鸡儿纤维素的合成提供了依据.
- 朱宏柴文娟杨飞芸王瑞刚
- 关键词：中间锦鸡儿纤维素合酶基因克隆
- 创新与就业需求下生物类专业课程模块化建设与学生自主性设计
- 2023年
- 生物类专业就业难的问题已成为制约生物类专业发展的因素,因此对生物类专业的学科教学改革已迫在眉睫。在生物类专业学生的创新创业及就业需求影响下,对生物类专业课程进行模块化建设可以实现专业内分领域教学,增强学生的就业与创新创业竞争力。同时,以模块化建设引导学生自主学习,增加学生对专业知识学习的选择性。
- 王瑞刚安惠韬万永青李国婧
- 关键词：模块化教学自主性
