王秋鹏
- 作品数：13 被引量：56H指数：5
- 供职机构：中南大学湘雅医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 热休克反应对氧化应激所致nucleolin裂解的影响被引量：3
- 2004年
- 观察热休克反应对氧化应激 (0 .5mmol/LH2 O2 )诱导细胞凋亡发生时nucleolin(C2 3)裂解的影响并探讨其机制。方法 :采用caspase 3活性定量分析及免疫印迹技术检测氧化应激诱导的原代心肌细胞、RAW 2 6 4 .7巨噬细胞及K5 6 2白血病细胞凋亡及C2 3的裂解 ;通过热休克反应观察热休克反应对C2 3裂解的影响。结果 :0 .5mmol/LH2 O2处理细胞 2hcaspase 3活性显著升高 ,12h达高峰。免疫印迹结果显示上述各种细胞的C2 3蛋白均发生了裂解 (有 80kD裂解片断出现 ) ,而且最早出现裂解片段的时间都在H2 O2 处理 30min到 1h左右 ;同时热休克反应通过诱导HSP70 ,HSP2 5等应激蛋白表达而显著减少氧化应激所致C2 3的裂解。结论 :氧化应激诱导凋亡发生的同时也引起C2 3的裂解 ;热休克反应显著抑制氧化应激所致C2 3的裂解 。
- 王慷慨蒋磊易宇欣刘可鄂顺梅唐道林王建设石永忠王秋鹏肖献忠
- 关键词：热休克反应氧化应激CASPASE-3H2O2片段
- 大鼠心肌短暂缺血-再灌诱导表达上调的新基因Mip1的功能初步研究
- 目的:Mip1为本室克隆的一个大鼠心肌短暂缺血-再灌诱导表达上调的新基因。本研究通过建立稳定表达Mip1的CC肌原细胞株,研究Mip1的过表达对细胞氧化应激损伤及对应激状态下细胞生长周期的影响,探讨Mip1是否具有细胞保...
- 袁灿刘瑛王秋鹏王建设肖献忠
- 文献传递
- 热休克因子1对内毒素所致G-CSF基因表达的影响被引量：6
- 2005年
- 为探讨热休克因子1(heatshockfactor 1,HSF1)活化和过表达对内毒素(endotoxin ,ET)所致粒细胞集落刺激因子(granulocyte colonystimulatingfactor,G CSF)基因表达的影响,采用大肠杆菌内毒素即脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)处理RAW2 6 4 7巨噬细胞,并通过热休克预处理诱导HSF1活化,采用Western印迹检测HSP70的表达观察HSF1的活化情况,RT PCR检测热休克反应(heatshockresponse ,HSR)对G CSFmRNA表达的影响;构建HSF1的pcDNA3 1真核表达质粒,采用脂质体转染法建立HSF1过表达RAW 2 6 4 7巨噬细胞株,用免疫细胞化学和Western印迹观察HSF1的表达,RT- PCR及Northern印迹进一步研究HSF1对G CSF基因表达的可能影响.发现LPS诱导巨噬细胞中G- CSFmRNA表达增多,并随时间的延长,表达量逐渐增加;与单纯内毒素处理组相比,热休克预处理后,LPS诱导的巨噬细胞G- CSFmRNA的表达明显被抑制;建立的稳定表达HSF1的RAW 2 6 4 7细胞株中有HSF1蛋白的核移位;HSF1过表达可明显抑制LPS诱导的RAW2 6 4 7巨噬细胞G -CSFmRNA的表达.上述结果表明热休克预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞G- CSFmRNA的表达;HSF1过表达可抑制内毒素诱导的巨噬细胞G CSFmRNA的表达.
- 王秋鹏张华莉袁灿刘瑛肖卫民王慷慨刘双于凤秀肖献忠
- cDNA微阵列结合聚类分析探讨大鼠心肌缺血-再灌诱导的基因表达谱改变被引量：4
- 2004年
- 目的 :探讨大鼠心肌缺血 再灌诱导的基因表达谱改变 ,为揭示心肌内源性保护的分子机制提供新的线索和思路。方法 :采用反复短时间结扎及松解左冠状动脉主支构建大鼠心肌缺血 再灌反应动物模型 ,运用含 4 0 97个大鼠基因点的cDNA芯片检测大鼠心肌缺血 再灌处理后不同时间点 (1,3,6 ,12 ,2 4h)的基因表达情况 ,并采用SOM算法将具有相似表达模式的基因进行聚类。结果 :短时间缺血后再灌 1,3,6 ,12 ,2 4h分别有 75 ,779,2 0 5 ,15 5 ,16 6个基因表达发生改变。具有相同表达模式的基因被聚为 12类。结论 :心肌缺血 再灌可以诱导心肌的基因表达谱发生改变 ,具有相似表达模式的基因可能具有相似的功能或相似的表达调控机制。
- 袁灿赵震宇刘瑛吕青兰王秋鹏肖献忠
- 关键词：CDNA微阵列聚类分析心肌缺血基因表达谱CDNA芯片
- 一个大鼠心肌缺血-再灌诱导表达上调的新基因Mip1的克隆和特性分析被引量：15
- 2004年
- 采用生物信息学方法和 5′cDNA末端快速扩增法 (RACE)技术相结合 ,克隆了一个大鼠心肌缺血 再灌诱导表达上调的新基因Mip1,并经RT PCR测序及多组织膜RNA印迹证实 .生物信息学分析显示 ,MIP 1定位于大鼠染色体 1q12区 ,含 5个外显子和 4个内含子 ,开放阅读框 (ORF)为 182 7bp ,编码 6 0 8个氨基酸 ,其编码蛋白N端含KRAB结构域 ,C端含 14个连续的C2H2型锌指蛋白结构域 ,氨基酸第 2 77位至 2 93位为双向的核定位信号 ,多组织膜RNA印迹显示该基因在脑组织表达最高 ,其次是心脏 ,在其他组织表达较低或无表达 .进一步深入研究该基因的功能具有重要生物学意义 .
- 袁灿张华莉刘瑛王秋鹏肖献忠
- 关键词：基因生物信息学克隆脑组织心肌细胞
- 从基因敲除小鼠心肌组织中筛选热休克反应中受HSF1调控的靶基因被引量：8
- 2004年
- 目的 :用cDNA芯片从热休克转录因子 1(HSF1)基因敲除小鼠心肌组织中筛选热休克反应受HSF1调控的靶基因。方法 :用cDNA芯片检测热休克反应 (42℃ 15min ,恢复 3h)中HSF1 / 小鼠心肌组织基因表达谱的改变 (以HSF1+ / + 小鼠为对照 ) ;用RT PCR对cDNA芯片筛选结果进行验证 ;对差异表达的已命名基因进行启动子区转录因子结合位点的分析。结果 :共筛选到差异表达基因 114 2个 ;其中在HSF1 / 小鼠心肌中表达下调的基因为 398个 ,已命名基因为 173个 ;在HSF1 / 小鼠心肌中表达上调的基因为 6 4 1个 ,已命名基因为 2 35个。在HSF1 / 小鼠心肌中表达下调 2 .5倍的已命名基因中 ,有 5个基因启动子区含有热休克元件 (HSE) ;在HSF1 / 小鼠心肌中表达上调 2 .5倍的已命名基因中 ,有 6个基因启动子区含有HSE。结论 :在热休克反应中 。
- 刘瑛袁灿张华莉王秋鹏肖献忠
- 关键词：CDNA芯片热休克反应热休克转录因子1靶基因心肌组织
- HSF1对内毒素所致RAW264.7巨噬细胞炎症介质基因表达的影响
- 内毒素(endotoxin,ET)在革兰氏阴性菌严重感染所致的败血症或败血症休克中起主要作用.它主要通过以炎症介质泛滥为标志的全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndro...
- 王秋鹏
- 关键词：内毒素RAW264.7巨噬细胞TNFΑIL-15G-CSF
- 文献传递
- 转染HSP70基因对过氧化氢所致RAW264.7细胞损伤的影响被引量：5
- 2004年
- 【目的】观察HSP70基因过表达是否能减轻过氧化氢所致的RAW2 6 4 .7巨噬细胞损伤。【方法】用脂质体包裹重组质粒 pcDNA3.1 HSP70导入RAW2 6 4 .7细胞株 ,经G4 18筛选阳性克隆 ,用Westernblot方法检测HSP70的表达情况 ;通过测定细胞存活率、LDH释放率 ,观察了HSP70基因过表达对过氧化氢所致RAW 2 6 4 .7细胞损伤的影响。【结果】获得了HSP70过表达的RAW 2 6 4 .7细胞系 ;HSP70过表达组细胞的存活率及LDH释放率与对照组比有明显差异。【结论】转染HSP70基因对过氧化氢所致RAW 2 6 4 .
- 刘梅冬张华莉肖卫民刘瑛王秋鹏王慷慨肖献忠
- 关键词：热休克蛋白质类70过氧化氢RAW264.7细胞损伤细胞保护
- HSF1在热休克反应中对KLF4基因表达的影响被引量：2
- 2004年
- 【目的】观察热休克因子 1(HSF1)在热休克反应中对Kruppel样因子 4 (KLF4 )基因表达的影响 ;采用生物信息学方法初步探讨KLF4在热休克反应中调控的下游基因。【方法】采用HSF1基因敲除小鼠热休克模型 ,抽提HSF1基因敲除小鼠 (HSF1-/ -)和野生型小鼠 (HSF1+ / + )心肌及肺组织的总RNA进行RT PCR和Northernblot实验 ,观察KLF4mRNA表达的情况。用热休克处理和HSF1过表达的小鼠RAW2 6 4 .7巨噬细胞 ,抽提总RNA进行RT PCR实验 ,观察KLF4mRNA表达的情况 ;用TESS分析启动子含有KLF4结合位点的下游基因。【结果】热休克处理后 ,HSF1+ / + 小鼠组织中KLF4mRNA的水平明显增加 ,HSF1-/ -小鼠组织中KLF4mRNA水平的增加明显低于HSF1+ / + 小鼠。小鼠RAW2 6 4 .7巨噬细胞受热刺激后 ,KLF4mRNA的水平明显增加 ;在HSF1过表达细胞中KLF4的表达也明显增高。经TESS软件分析发现 6个启动子区含有KLF4结合位点的下游基因。
- 刘瑛张华莉袁灿王秋鹏刘梅冬涂自智肖献忠
- 关键词：热休克反应热休克蛋白质类基因表达
- 热休克反应和热休克转录因子1对LPS诱导的TNF-α和IL-15表达的影响被引量：13
- 2004年
- 【目的】观察热休克反应 (HSR)以及热休克转录因子 1(HSF1)对LPS诱导的TNF α和IL 15表达的影响。【方法】用 2 0 0ng/mlLPS处理热休克或未热休克的小鼠RAW 2 6 4 .7巨噬细胞 ,抽提细胞的总RNA进行RT PCR实验 ,观察TNF α和IL 15mRNA表达的情况 ;采用HSF1基因敲除小鼠经腹腔内注射LPS复制内毒素血症模型 ,抽提HSF1基因敲除小鼠 (HSF1-/ -)和野生型小鼠 (HSF1+ / + )肺组织的总RNA进行RT PCR实验 ,观察TNF α和IL 15mRNA表达的情况。用TESS分析IL 15的启动子 ,寻找热休克元件(Heatshockelement,HSE)。【结果】小鼠RAW 2 6 4 .7巨噬细胞受LPS刺激后 ,TNF α和IL 15mRNA的水平明显增加 ,而热休克抑制了LPS诱导的TNF α和IL 15mRNA的表达 ;腹腔注射LPS后 ,HSF1-/ -小鼠和HSF1+ / + 小鼠的肺组织中TNF α和IL 15mRNA的水平明显增加 ,HSF1-/ -小鼠的肺组织中TNF α和IL 15mRNA水平的增加明显高于HSF1+ / + 小鼠。经TESS软件分析发现IL 15的启动子区含有 2个HSE。【结论】HSR、HSF1抑制了LPS诱导的TNF α和IL 15的表达 ;HSF1可能通过与IL 15启动子区的HSE结合抑制LPS诱导的IL 15的表达。
- 张华莉刘瑛王秋鹏邓恭华肖献忠
- 关键词：热休克反应热休克转录因子1LPS诱导TNF-ΑIL-15白细胞介素15
