王若宁
- 作品数：22 被引量：52H指数：5
- 供职机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胸苷磷酸化酶在肿瘤中表达的研究
- 该研究在参照国外有关胸苷磷酸化酶的研究基础上,设计并完成了以下几部分研究工作：1.在原核系统中表达并纯化人胸苷磷酸化酶;制备、纯化及鉴定兔抗人胸苷磷酸化酶多克隆抗体.2.研究对比具有不同增殖能力的细胞中胸苷磷酸化酶的表达...
- 王若宁
- 关键词：胸苷磷酸化酶抗体制备血管生成肿瘤瘢痕疙瘩
- 文献传递
- 血管生成抑素的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2001年
- 目的 :在原核系统中表达并纯化人血管生成抑素 (angiostatin) ,制备鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。方法 :设计引物扩增angiostatin的cDNA ,然后亚克隆入原核表达载体pQE ,并转化入大肠杆菌BL2 1中诱导表达并纯化 ,再用纯化的人血管生成抑素免疫小鼠并制备多抗。结果 :通过重组质粒酶切和测序分析等方法 ,筛选出重组阳性克隆 ,转化入大肠杆菌BL2 1中诱导表达并纯化成功 ,再利用纯化的人血管生成抑素制备成功鼠抗人血管生成抑素多克隆抗体。结论 :表达产物及多克隆抗体为下阶段深入研究提供了重要的实验材料。
- 王若宁刘玲玲张一鸣陈丙莺
- 关键词：血管生成因子血管生成抑制素原核表达多克隆抗体
- 新型阳离子聚合物非病毒载体介导野生型p53基因体外转染效果的研究
- 2011年
- 目的:研究新型阳离子聚合物非病毒载体———尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因体外转染人肝癌细胞系HepG2的效果。方法:载体UAC包裹含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因和wt-p53治疗基因的质粒(pEGFP-p53)转染HepG2细胞,利用流式细胞术和荧光显微术检测细胞内GFP的表达,优选最佳转染条件;采用RT-PCR法检测细胞内p53mRNA的表达,流式细胞术评价基因转染对细胞周期的影响,Western blot法检测细胞内p53及其下游细胞周期调控蛋白的表达。结果:在低pH(pH=6.9)条件下,采用低壳聚糖分子量(20000)的UAC作为载体,与pEGFP-p53形成高N/P(N/P=30)的UAC/pEGFP-p53复合物转染HepG2细胞,可获得最佳转染效果;载体UAC介导wt-p53基因转染细胞后,p53mRNA表达水平明显上调,G0/G1期出现显著阻滞,p53、p21和Rb蛋白表达水平明显上调,cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显下调。结论:载体UAC可成功介导wt-p53基因转染HepG2细胞,并诱导其产生细胞周期阻滞。
- 王伟王玉王若宁徐苏颖丁杨周建平
- 关键词：野生型P53基因转染人肝癌细胞系细胞周期阻滞
- 抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖的影响被引量：2
- 2004年
- 目的 通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型 ,探讨 p15对胆管癌细胞增殖的影响。方法 将抑癌基因 p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体 pcDNA -neo中的EcoRⅠ /XbaⅠ位点 ,构建成 p15真核表达质粒pcDNA3 p15 ;通过脂质体法将 pcDNA3p15质粒传染人胆管癌细胞系QBC93 9,经G418筛选 ,获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的对照细胞模型 ,并经Wistern分子杂交分析证实。结果 与对照组相比 ,p15高表达的人胆管癌细胞生长速率明显下降 ,第 4天细胞增殖结果被抑制了 3 8.6% ;克隆形成能力降低 ,克隆抑制率达 5 5 % ;S期的细胞明显减少 ,G1期、G2 期的细胞均有增加 ;癌基因c myc蛋白水平低。结论 在人胆管癌细胞中高表达抑癌基因p15抑制了细胞增殖 ;p15同时阻遏细胞由G1期向S期及G2 期向M期转换 ;癌基因c myc蛋白水平降低可能是p15抑制作用的分子机理之一。
- 傅赞赵翰林王若宁德伟武正炎
- 关键词：人胆管癌C-MYC蛋白PCDNA3癌细胞生长阻遏分子杂交
- 1型糖尿病自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2真核表达系统的构建和鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的构建能高效表达自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2(IA2)的真核表达载体作为预防发生1型糖尿病(T1DM)的基因疫苗。方法利用基因工程技术构建重组pEGFP/IA2真核表达系统,并且转染、筛选稳定高表达IA2的RIN5F胰岛细胞株,用免疫印迹法并在荧光显微镜下鉴定其表达,利用共培养体系检测IA2刺激淋巴细胞增殖率。结果双酶切结果表明成功构建了重组pEGFP/IA2真核表达系统,免疫印迹法证实可在RIN5F细胞内高表达IA2。并且该表达的IA2可显著促进NOD小鼠淋巴细胞增殖反应(P<0.05)。结论成功构建的IA2真核表达系统对于T1DM基因疫苗预防策略和对于IA2生理功能的研究都具有重要的意义。
- 刘煜 朱虎曾丽玲陈家伟 杨金奎钟耀华王若宁陈小章
- 关键词：1型糖尿病自身抗原真核表达系统IA-2
- 血小板衍化内皮细胞生长因子原核表达载体的构建
- 2000年
- 目的 构建血小板衍化内皮细胞生长因子 (PD- ECGF)的原核表达载体。方法 设计引物扩增 PD- ECGF的 c D-NA,然后亚克隆入原核表达载体 p QE和 p ET- 32 a,并转化入大肠杆菌 JM10 9。结果 通过菌落原位杂交、PCR和重组质粒酶切分析等方法 ,筛选出重组阳性克隆。结论 此重组质粒可用于原核表达等进一步研究。
- 王若宁刘玲玲张一鸣李崇勇徐桦陈丙莺
- 关键词：原核表达载体PD-ECGF
- p15、p16对人胆管癌细胞增殖影响的实验研究被引量：2
- 2003年
- 目的研究抑癌基因p15、p16对人胆管癌细胞的生长抑制作用。方法将抑癌基因p15、p16的cDNA构建到真核表达的质粒载体pcDNA3 neo中形成p15真核表达质粒pcDNA3p15及p16真核表达质粒pcDNA3p16。通过脂质体法将重组质粒pcDNA3p15、pcDNA3p16质粒分别转染人胆管癌细胞系QBC939,获得稳定高表达p15或p16的人胆管癌细胞模型。用MTT法测定细胞生长曲线 ,流式细胞光度术测定细胞生长周期。结果p15、p16高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到抑制 ,p15、p16均明显阻遏细胞由G1期向S期的转换。结论抑癌基因p15、p16均参与了细胞周期的阻抑作用。
- 傅赞赵翰林王若宁德伟武正炎
- 关键词：P15P16胆管癌细胞增殖
- 跨血脑屏障纳米递药系统的研究进展被引量：7
- 2015年
- 血脑屏障是治疗多种中枢神经系统疾病的主要障碍。随着纳米技术的发展,新型脑靶向递药系统的研究取得了较大进展。该类递药系统可通过受体、转运体、吸附等介导的转胞吞作用,以及暂时破坏血脑屏障结构完整性等多种机制跨越血脑屏障并完成脑内药物递释,达到治疗中枢神经系统疾病的目的。本文综述了近年来跨血脑屏障纳米递药系统的研究进展。
- 丁杨王若宁韩悦张旭周建平
- 关键词：脑靶向
- 野生型p53cDNA真核表达载体的构建被引量：1
- 2002年
- 李艳利王若宁李崇勇徐桦朱自路陈丙莺
- 关键词：真核表达载体基因突变肿瘤基因治疗
- 含野生型p53cDNA重组逆转录病毒的制备
- 2002年
- 目的:制备含野生型p53cDNA重组体的复制缺陷型逆转录病毒。方法:设计引物PCR扩增野生型p53cDNA,用T-A克隆的方法克隆入质粒载体pGEM-T,转化JM109,提取pGEM-T/p53重组体,双酶切得到野生型p53cDNA,然后再克隆入逆转录病毒表达载体pLXSN,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选pL(p53cDNA)SN重组体,脂质体法转染包装细胞AM12,G-418(geneticin)筛选,收集病毒液。结果:通过PCR和重组质粒酶切筛选出重组阳性克隆,收集含pL(p53cDNA)SN重组体的逆转录病毒。结论:含pL(p53cDNA)SN重组体的复制缺陷逆转录病毒可用于转染真核细胞等进一步研究。
- 李艳利王若宁张一鸣陈丙莺
- 关键词：野生型P53CDNA
