王衍海
- 作品数：36 被引量：108H指数：6
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- BSL-2实验室开展SARS-CoV-2核酸检测过程中的生物安全管理被引量：5
- 2021年
- 目的:总结生物安全二级(bio-safety level 2,BSL-2)实验室开展新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核酸检测过程中的生物安全管理经验与效果。方法:检测样本来源于2020年2月21日到2020年11月5日送达中国疾控中心病毒病预防控制所病毒资源中心科室的人体咽拭子、鼻拭子、痰液、尿液、便液等。在遵循常规生物安全管理要求的基础上,在检测过程中积极进行人员、岗位、标本、过程、安全巡视等生物安全管理。结果:共开展了27692人次样本的SARS-CoV-2核酸检测,平均每天检测(2.32±0.11)批样本,每批平均检测(87.22±6.83)件样本,BSL-2实验室平均每天工作时间(3.43±0.23)h。在检测过程中未出现任何生物安全问题。结论:BSL-2实验室在长时间的SARS-CoV-2核酸检测过程中,要积极从多方面加强生物安全管理,从而保障检测工作安全有序进行。
- 夏志强杜海军夏冬梅国勇王文军王瑞芳宋芹芹宋娟王衍海韩俊
- 关键词：核酸检测
- 日本血吸虫雌性特异基因的筛选及排泄-分泌抗原的筛选
- 研究背景：血吸虫病是由血吸虫感染引起的一种分布广泛、危害严重的人畜共患寄生虫病。据世界卫生组织专家估计，目前仍有76个国家和地区流行血吸虫病，有2亿人受感染，6亿人受威胁。人体血吸虫病的病原为日本血吸虫(Schistos...
- 王衍海
- 关键词：日本血吸虫特异性基因抑制性消减杂交斑点杂交排泄-分泌抗原
- 文献传递
- AalDV-3介导的miRNA海绵载体构建及其在埃及伊蚊体内外的抑制效果测试
- 2016年
- miRNA不仅广泛参与了蚊生长、发育的调控,还参与了媒介与病原体的相互作用,因此miRNAs可能作为蚊虫防制与蚊媒病原体控制的靶点,但目前尚无有效的转导系统。为研究白纹伊蚊浓核病毒-3(AalDV-3)是否可以作为有效的载体,我们利用内含子内表达miRNA海绵的策略,以埃及伊蚊内源性miR-210为靶基因,构建了重组病毒AalDV-anti-210。使用跨内含子引物通过RT-PCR验证了内含子可在蚊体内外的剪接效果,通过qPCR方法对埃及伊蚊Aag2细胞与埃及伊蚊幼虫的感染后的miR-210的表达水平进行检测。结果证实,含有miRNA海绵的内含子可以有效的蚊体内外剪接,重组病毒可以在蚊体内外高效的抑制靶miR-210的表达水平。该结果为探索AalDV-3在蚊虫基因功能研究及生物杀虫剂方面的潜在价值提供了理论依据。
- 郭菁华王衍海
- 关键词：MIRNA
- 白纹伊蚊内源性登革病毒序列分析被引量：1
- 2016年
- 目的 分析和验证白纹伊蚊（佛山株）基因组中的登革病毒来源的内源性病毒序列（endogenous viral elements,EVEs）.方法 使用Blast序列比对工具,分别以四型登革病毒基因组全序列为待查序列对白纹伊蚊基因组进行序列比对分析.根据筛选得到的EVEs序列设计基因特异性引物,分别以雌、雄各8只成蚊个体进行基因组PCR检测并测序验证.结果 在白纹伊蚊基因组上共计找到5个与登革病毒高度同源性的EVEs片段.其中,EVE-1与DENV-2 P8-1407MS株、EVE-2-5与DENV-1 02-20株具有高度的相似性.基因组PCR检测结果显示,EVE-1在种群个体中保守存在,而EVE-2未检测到,EVE-3-5在不同个体中变异度较高.结论 白纹伊蚊基因组中存在登革病毒序列来源的EVEs,为研究登革病毒与媒介之间的相互作用提供了新的方向.
- 王衍海顾金保
- 关键词：登革热病毒伊蚊属
- 日本血吸虫性别特异性基因的研究进展
- 2006年
- 血吸虫病是一种重要的人畜共患病,在世界范围内广泛分布,严重危害人体健康。本文以近年来国外在血吸虫基因的性别特异性方面的研究为依据,对血吸虫性别特异性基因的调控及克隆进行了综述。
- 王衍海彭鸿娟
- 关键词：血吸虫
- 寨卡病毒感染人肝癌细胞HepG2后外泌体中差异miRNA分析
- 2022年
- 目的探索人肝癌细胞HepG2感染寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)后的外泌体miRNA的表达差异,对其靶基因进行预测、分析。方法以感染复数0.5的ZIKV(ZJ03株)感染HepG2,以超速离心法提取、纯化感染2 d与未感染细胞的外泌体(Exo-ZIKV与Exo-NC)。以透射电镜观察外泌体形态,纳米粒径分析检测外泌体粒径分布,Western blot检测外泌体标志蛋白质等方法鉴定。提取纯化外泌体小RNA,进行miRNA测序与分析,对部分差异表达miRNA采用实时定量PCR验证。生物信息方法分析差异miRNA靶基因。结果在透射电镜下呈杯托状双层膜小囊泡结构;粒径大小分布几乎一致但Exo-ZIKV浓度(5.24×10^(8)颗粒/ml)较Exo-NC(3.06×10^(8) paritcle/ml)增多。Western blot检测出Hsp70、CD63和CD9蛋白表达,测序分析显示共20个差异表达miRNA,其中12个miRNA表达上调8个miRNA表达下调,上调miRNA多与抗病毒通路相关,差异表达miRNA对应的靶基因主要富集在嘧啶与嘌呤代谢等途径中。结论ZIKV感染能刺激HepG2细胞外泌体分泌增加,且引起外泌体miRNA表达变化,这为深入了解ZIKV感染导致肝细胞损伤机制提供新基础,为ZIKV治疗提供新的思路。
- 周婉葵宫悦顾金保王衍海
- 关键词：HEPG2细胞外泌体蚊媒传染病
- 病原微生物实验室生物安全和质量管理的关系探讨被引量：14
- 2011年
- 建国近60年来,虽然我国传染病防治取得了巨大成就,但传染病的威胁依然存在。除了艾滋病、乙型病毒性肝炎和结核病,近年来我国还面临着新发、突发传染病以及多发、常见传染病暴发、大流行的威胁,新发、突发传染病不断出现,严重威胁我国社会稳定和经济发展。
- 胡寒雁王衍海张瑶贾淑惠韩卫芳高云雪韩俊武桂珍
- 关键词：病原微生物实验室生物安全质量管理
- 日本血吸虫消减雌性成虫cDNA文库的建立及其特异表达基因的筛选被引量：7
- 2006年
- 目的筛选雌性日本血吸虫特异表达基因。方法感染日本血吸虫6周的家兔,用静脉灌注法收集成虫,经核糖核酸固定液固定,分别提取雌、雄成虫总RNA,纯化后获得mRNA,并反转录为cDNA。用抑制性消减杂交技术(SSH)构建雌、雄成虫正向消减(雌虫消减雄虫)及反向消减(雄虫消减雌虫)cDNA文库。用斑点杂交法筛选差异表达基因,挑选目标基因片段(与正向消减探针杂交的信号明显高于与反向消减探针杂交信号的克隆)进行测序、同源性搜索及基因功能预测分析。以日本血吸虫肌动蛋白(actin)基因作内参照,用半定量PCR(semi-quantitative PCR)鉴定目标基因在雌、雄虫体内的表达。结果得到正向消减及反向消减cDNA文库,斑点杂交筛选出50个雌虫特异性表达的克隆,经测序得到42个表达序列标签(EST),其中,有17个基因(占40·5%)与已知日本血吸虫卵壳蛋白基因高度同源;17个基因(占40·5%)与日本血吸虫未知基因高度同源、且有一小片段与卵壳蛋白基因高度同源;有8个基因(占19·0%)与日本血吸虫其他未知基因高度同源。半定量PCR结果,6个基因在雌虫体内的表达水平明显高于雄虫,分别与GenBank的血吸虫卵壳蛋白基因AY222885、AY222895、AB017097、AF519182、M32281及血吸虫其他基因AY813556高度同源。结论构建了雌、雄成虫正向消减及反向消减cDNA文库。用SSH可筛选日本血吸虫雌性特异性表达基因。
- 王衍海彭鸿娟陈晓光沈树满
- 关键词：日本血吸虫成虫抑制性消减杂交
- 生物安全二级实验室冬季温度过高的原因分析与对策探讨被引量：2
- 2019年
- 目的:分析中国疾病预防控制中心病毒病所生物安全二级实验室(BSL-2)冬季温度过高现象产生的原因,提出对应的解决方案。方法:根据BSL-2冬季空调供暖系统的基本情况,从系统设计、热媒、冬季防冻及运行管理等方面分析产生温度过高现象的原因,分析确定科学有效的降温方法,并提出对应的解决方案。结果:实验室空调设计、过渡季室外温度不稳定、冬季设备防冻及温室效应等是产生BSL-2冬季温度过高的基本因素。空调系统采取设计季节区分模式、加装风冷热泵机组、加强防冻传感器预警、增加玻璃隔热以及科学管理等有效可行对策,降低BSL-2冬季温度过高。结论:采取有效可行的对策解决BSL-2冬季温度过高现象的发生,能够提高生物安全病毒病实验室保障水平,为BSL-2的设计和运行管理提供可借鉴的经验。
- 谷鑫李雪柏高连胜王衍海韩俊谭吉宾吕阳
- 关键词：温度过高生物安全实验室空调系统
- AaeDV编码的miRNA样分子的分析与鉴定
- 2015年
- 一些双链DNA病毒和RNA病毒可以在宿主细胞内编码自身的miRNAs分子,其在病毒感染宿主细胞与病毒复制过程中发挥重要的作用,为研究单链DNA病毒是否可编码miRNAs,我们利用VMir、miRNAFold和MaturePred软件,通过生物信息学方法预测了一株单链DNA病毒-埃及伊蚊浓核病毒(Aedes aegypti densovirus,AaeDV)编码的miRNAs分子的颈环结构前体与成熟体,并通过Northern blot与stem-loop RT-PCR方法进行了验证,结果在预测的4个茎环结构前体中,通过stem-loop RT-PCR方法验证到一个miRNA样分子AaeDVMD。该结果证实了单链DNA病毒可编码miRNAs,为进一步研究蚊浓核病毒与宿主蚊类之间的相互作用提供了新的研究方向。
- 王衍海吴江顾金保
- 关键词：单链DNA病毒
