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鸡胚胎原始生殖细胞的体外培养被引量：10: 2006年; 旨在对影响鸡胚胎原始生殖细胞(PGC s)体外培养、传代过程的各种影响因素进行探讨。将分离到的19期鸡胚胎生殖腺的PGC s在以鸡胚成纤维细胞(CEF)为饲养层,添加细胞因子的培养体系中进行培养、传代。经冷冻保存的PGC s在添加细胞因子的培养体系中能增殖,并具有分化能力。从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定等方面对培养过程中的鸡胚胎PGC s进行检测。结果表明,采用传至3代的CEF为饲养层,多次离散法进行传代所获得的5代鸡胚胎PGC s不但能有效维持PGC s的未分化状态和正常二倍体核型,也具有其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征。; 秦洁蔡琳琳李碧春韩威周冠月吴宏孙思宇; 关键词：鸡胚胎体外培养

鸡胚原始生殖细胞诱导分化为神经元样细胞的研究被引量：1: 2005年; Primordial germ cells(PGCs) isolated from gonads of stage 19 by Ficoll density gradient centrifugation were cultured in DMEM medium in vitro.Then the second passage PGCs were induced to differentiate into neuron-like cells by different induction media.Specific markers and structures were detected by histochemistry method.The results showed that induction medium RA and IBMX were the best ways to induce PGCs into neuron-like cells,and almost 80%-85% cells exhibited typical neuron-like phenotype after induction.Special Nissl body was found by histochemistry.The effect of induction medium RA+IBMS,RA+BHA+DMSO and RA+BHA+DMSO+IBMX were better than that of induction medium BHA+DMSO.Under the same induction medium,about 80%-85% neuron-like cells could be detected no matter what PGCs were cultured 24 h,48h or 72 h in vitro.; 蔡琳琳秦洁李碧春肖小珺陈国宏吴信生吴圣龙; 关键词：原始生殖细胞分化神经元样细胞

冷冻保护剂和平衡方法对鸡胚原始生殖细胞冷冻保存效果的影响被引量：4: 2004年; 采用Ficoll密度梯度离心,提取第19期(孵化72h)和第28期(孵化132h)性腺中的原始生殖细胞(PGCs),应用不同的冷冻保护剂和平衡方法进行冷冻保存。PGCs解冻后用DMEM培养液进行体外培养,并采用苔盼蓝染色法鉴定复苏后PGCs的存活情况。结果表明:1从第19期或第28期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护剂下,平衡方法对PGCs的存活率有显著或极显著影响,平衡方法1的冷冻保护效果优于平衡方法2。2采用相同的平衡方法,冷冻保护剂C的冻存效果与其他保护剂之间存在显著或极显著差异,冷冻保护剂E和F对PGCs的冻存效果次之,冷冻保护剂A、B和D对PGCs的冻存效果最差。复苏后PGCs进行体外培养,其存活时间与分离后PGCs直接培养相比未出现显著缩短现象。; 肖小珺秦洁蔡琳琳李碧春; 关键词：原始生殖细胞冷冻保存

鸡胚盘细胞的研究进展: 2005年; 鸡胚盘细胞存在于未孵化的新鲜种蛋中,是一种具有多潜能性的胚胎干细胞。通过胚盘细胞移植法可制备体细胞或种系细胞嵌合体。如果将外源基因转入受体胚盘,受体胚后代则可能成为转基因鸡。利用胚盘细胞作为转基因载体,生产转基因鸡是研究禽类转基因的一种理想方法。作者就胚盘细胞及其研究进展给予综述。; 蔡琳琳肖小珺秦洁李碧春; 关键词：胚盘细胞体外培养嵌合体转基因

第28期鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存与体外培养研究被引量：2: 2005年; 　利用Ficoll密度梯度离心,提取鸡胚第28期(孵化132h)性腺中的原始生殖细胞(PGCs),用不同的冷冻保护液,对PGCs采用分离后直接冷冻保存和体外培养24h后冷冻保存2种方法,以筛选合适的冷冻保护体系。结果发现,分离提纯后直接进行冷冻保存的PGCs,存活率最高为(87.07±1.29)%;体外培养24h后进行冷冻的PGCs,存活率最高为(44.08±1.19)%。对复苏后的PGCs进行体外培养结果发现,分离提纯后直接进行冷冻的PGCs,在体外培养过程中具有形成细胞克隆的能力,且可传代和进行体外分化;而体外培养24h后进行冷冻的PGCs,复苏后在体外培养过程中不能形成细胞克隆,且在体外培养40h左右死亡。; 肖小珺蔡琳琳秦洁李碧春; 关键词：原始生殖细胞冷冻保存体外培养

鸡胚肢芽间充质干细胞的诱导分化: 采用EDTA-牛胰蛋白酶混合消化液(0．05％牛胰蛋白酶+0．025％EDTA)分离24期(孵化4．5 天)鸡胚肢芽间充质干细胞。以DMEM为基础培养液,在添加10％(体积分数)胎牛血清、2％的鸡血清、2 mmol／L ...; 肖小珺蔡琳琳李碧春; 文献传递

保护剂浓度对第19期鸡胚原始生殖细胞存活率的影响: 2004年; 采用Ficoll密度梯度离心 ,提取第 19期 (孵化 72h)性腺中的原始生殖细胞 (PGCs) ,用不同浓度的冷冻保护液进行冷冻保存。复苏后的PGCs用台盼蓝染色检测其存活率 ,并进行体外培养。结果发现 :在同一浓度下 ,不同的冷冻保护液之间存在显著 (P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)差异。在同一种冷冻保护液下 ,不同的浓度之间存在显著(P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)差异 ,具体表现为冷冻保护液浓度越大 ,复苏后细胞的存活率越低。PGCs复苏后于体外培养 ,可增殖形成细胞克隆。; 肖小珺秦洁蔡琳琳李碧春; 关键词：性腺鸡胚原始生殖细胞存活率冷冻保存体外培养

不同时期鸡胚胎体外培养的比较研究被引量：1: 2004年; 试验采用代用蛋壳体外培养方法进行了不同时期鸡胚胎换蛋壳培养的研究。结果显示:体外受精卵体外培养发育率为10%。X期胚胎体外培养的孵化率为1.2%;孵化1日龄的胚胎体外培养的孵化率为7.9%;直接去1/4壳的鸡胚孵化率为3.7%;鸡胚胎换蛋壳以后,添加6～8mL的稀蛋白对换壳鸡胚发育比较适宜。; 李碧春陈国宏吴圣龙吴信生蔡琳琳; 关键词：胚胎体外培养孵化发育

鸡胚胎原始生殖细胞的培养和传代被引量：28: 2005年; 本文旨在探索鸡胚胎原始生殖细胞(Primordialgermcells,PGCs)培养、传代以及各种因素对PGCs培养的影响。实验结果表明,在添加10%的胎牛血清、2%的鸡血清、2mmol/LL谷氨酰胺、1mmol/L丙酮酸钠、5.5×10-5mol/Lβ巯基乙醇、10μl/ml非必需氨基酸、以及5ng/ml人干细胞生长因子(Humanstemcellfactor,hSCF)、10U/ml鼠白血病抑制因子(Mouseleukemiainhibitoryfactor,mLIF)、10ng/ml碱性成纤维生长因子(Fibroblastgrowthfactorbasic,bFGF)、0.04ng/ml人白细胞介素11(Humaninterleukin11,hIL11),10ng/ml胰岛素样生长因子(Humaninsulinlikegrowthfactor,hIGF)的高糖DMEM培养体系中,以多次离散法进行传代获得5-6代鸡胚胎PGCs,有效地维持了PGCs的未分化状态和正常二倍体核型,同时能够定向地诱导分化为神经细胞。; 秦洁李碧春陈国宏蔡琳琳韩威周冠月吴洪孙思宇; 关键词：鸡胚胎原始生殖细胞碱性成纤维生长因子白血病抑制因子 PGCS L-谷氨酰胺

第十九期鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存: 2005年; 采用Ficoll密度梯度离心,提取第 19期(孵化 72h)性腺中的PGCs,对其应用不同的冷冻保护液和不同的平衡方法进行冷冻保存,并于复苏后进行体外培养。复苏后的PGCS用台盼蓝染色检测其存活率,结果发现:从第 19期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护液下,采用不同的平衡方法进行冷冻,对PGCs的存活率有显著影响(P<0.05)或极显著影响(P<0.01);平衡方法相同,在不同冷冻保护液之间存在显著(P<0.05)或极显著 (P<0.01)差异。PGCs经体外培养 24h后再进行冷冻保存,复苏后其存活率、体外培养存活时间均极显著(P<0.01)短于分离后直接冷冻的PGCs。; 肖小珺蔡琳琳秦洁李碧春; 关键词：复苏后冷冻保存性腺原始生殖细胞鸡胚平衡方法

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