贺清华
- 作品数：9 被引量：43H指数：4
- 供职机构：江苏大学临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 香加皮活性成分及其药理作用研究进展被引量：11
- 2013年
- 香加皮是用于治疗类风湿性关节炎的传统中药材。随着研究的不断深入,香加皮新的生物活性如抗肿瘤作用和强心作用等被发现,故具有广阔的开发前景。综述香加皮活性成分及其药理作用的研究进展,为香加皮新的药用价值的探索及相关新药的研发提供参考。
- 张辉云贺清华童珊珊余江南徐希明
- 关键词：香加皮杠柳毒苷活性成分
- 单胺氧化酶抑制剂诱导胶质瘤细胞的体外分化被引量：2
- 2012年
- 为研究单胺氧化酶抑制剂(TCP)对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞的诱导分化作用,以不同浓度TCP单独或与100nmol/L组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)联合处理U251细胞。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖变化;流式细胞仪检测细胞周期变化;Hoechst 33258染色显示细胞凋亡;Real-time PCR和Western印迹法检测分化相关基因mRNA和蛋白表达水平的改变。结果表明:TCP可诱导细胞突起增多且变细长,抑制细胞增殖,阻滞细胞周期于G1期,抑制全能性转录因子Oct4和Sox2的表达,上调分化标志基因胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,TCP联合TSA也诱导了GFAP的高表达。这些结果提示:TCP可诱导胶质瘤U251细胞分化,TSA对TCP诱导细胞分化有协同作用。
- 邵根宝薄丹丹韩晓娟贺清华张严桑建荣
- 关键词：单胺氧化酶抑制剂组蛋白去乙酰化酶抑制剂胶质瘤分化
- 干细胞标志蛋白在成人鼻黏膜嗅鞘细胞的表达
- 2012年
- 目的建立成人鼻黏膜嗅鞘细胞的体外培养方法,探讨干细胞标志蛋白在人嗅鞘细胞的表达及其意义,为嗅鞘细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤提供可行性研究资料。方法用鼻内镜自成人(鼻中隔偏曲伴黏膜肥厚者)鼻腔活体钳取部分嗅区黏膜,经胰酶消化制成细胞悬液。细胞接种于玻璃培养瓶,用含10%胎牛血清的F12培养基培养、传代、扩增。用免疫细胞化学或免疫荧光染色和免疫印迹方法检测SOX-2、SOX-10、Nestin、NCAM、NGFRp75和S100-β在第7代嗅鞘细胞的表达。结果成人嗅黏膜细胞经过多次传代培养后,嗅鞘细胞逐渐成为优势细胞,该细胞高表达干细胞标志蛋白和嗅鞘细胞标志蛋白。结论成人嗅黏膜细胞体外培养可获得高产量的许旺细胞(Schwann cells,Scs)样嗅鞘细胞,该细胞具有干细胞特性(stemness)和很强的增殖能力,可作为自体细胞移植治疗中枢神经系统损伤的种子细胞。
- 黄秋生陆汉强周月鹏贺清华孙湘兰陈谦龚爱华姜平张志坚
- 关键词：嗅黏膜细胞培养技术干细胞特性
- 成人鼻黏膜间充质干细胞的体外培养和多向诱导分化被引量：9
- 2012年
- 目的:观察成人鼻腔呼吸黏膜内间充质干细胞(MSCs)的分布特征,建立鼻黏膜MSCs的体外培养方法,探讨该细胞向神经细胞及成骨细胞分化的潜能。方法:将成人鼻腔呼吸黏膜制成冷冻切片,用Nestin和Vi-mentin抗体进行免疫荧光染色,观察MSCs在鼻黏膜内的分布特征。对鼻黏膜细胞进行体外培养、传代,扩增出MSCs,用干细胞标志蛋白Nestin,CD133,Vimentin和Sall4的抗体进行免疫荧光染色,鉴定该细胞的干细胞特性;分别用成骨诱导培养液(含地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠)及神经诱导培养液(Neurobasal培养液含B27,ATRA,TSA)诱导MSCs向成骨细胞和神经细胞定向分化;用组织化学染色和免疫荧光染色方法评价其诱导分化效果。结果:Nestin和Vimentin免疫荧光染色阳性的MSCs主要存在于鼻黏膜的固有层内,通过体外培养、传代,可扩增出大量的MSCs,该细胞表达干细胞标志蛋白Nestin,CD133,Vimentin和Sall4;用成骨诱导剂诱导培养后,该细胞的碱性磷酸酶活性明显增强,茜素红染色显示细胞表面形成大量的钙结节;经神经诱导培养液诱导培养后,细胞生长出细长突起并互相连接成网,细胞高表达神经细胞标志蛋白NF-200和BM88。结论:成人鼻腔呼吸黏膜固有层内广泛存在MSCs,该细胞具有多向分化潜能,可作为种子细胞用于自体移植修复骨和神经组织损伤。
- 黄秋生陆汉强周月鹏贺清华孙湘兰姜平张志坚
- 关键词：鼻黏膜诱导分化成骨细胞神经细胞
- 大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞向成骨细胞和神经元的诱导分化被引量：2
- 2011年
- 目的:建立鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,ECTO-MSCs)的体外培养方法,探讨该细胞的干细胞特性(stemness)和分化潜能。方法:在观察ECTO-MSCs在大鼠鼻腔呼吸黏膜内分布特征的基础上,体外培养扩增ECTO-MSCs,并用干细胞标志蛋白巢蛋白、CD133、CD44、波形蛋白的抗体进行免疫荧光染色,鉴定该细胞的干细胞特性;分别用成骨诱导培养基(含地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠)及神经诱导培养基(neurobasal培养液中加入B27、脑源性神经生长因子、全反式维A酸、音猬因子)诱导ECTO-MSCs向成骨细胞和神经细胞定向分化;用组织化学染色和免疫荧光染色方法,评价其诱导分化效果。结果:用成骨诱导剂诱导培养后,ECTO-MSCs碱性磷酸酶活性明显增强,在细胞表面形成大量的茜素红染色阳性的钙结节;用神经诱导培养基诱导培养后,ECTO-MSCs变化为神经细胞样形态,细胞高表达神经细胞标志蛋白NF-200,细胞发出细长突起并互相连接成神经网络。结论:大鼠鼻腔呼吸黏膜内广泛存在ECTO-MSCs,该细胞具有多向分化潜能,可作为种子细胞用于自体移植修复骨和神经组织损伤。
- 贺清华周月鹏陈谦刘锦波吴滢庄琴孙湘兰龚爱华姜平张志坚
- 关键词：鼻黏膜诱导分化成骨细胞神经细胞
- 嗅黏膜神经干细胞的体外培养和向酪氨酸羟化酶阳性神经元的分化被引量：1
- 2010年
- 目的:建立体外培养和诱导嗅黏膜神经干细胞向酪氨酸羟化酶阳性神经元分化的方法,探讨该细胞的干性和分化特性。方法:首先用含10%胎牛血清的DMEM/F-12混合培养基培养成年大鼠嗅黏膜细胞,当细胞贴壁后将培养基更换为含表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF),不含血清的干细胞培养基,以促进干细胞增殖形成神经球。将神经球取出用干细胞培养基悬浮培养以纯化扩增神经干细胞。应用干细胞相关蛋白Nestin及CD133的抗体对神经干细胞进行免疫荧光染色,观察上述蛋白在细胞的表达。用Neurobasal培养基(含B27、NGF、ATRA及SHH)培养扩增后的神经干细胞,诱导其向神经元分化。用神经丝蛋白(neurofilament-200,NF-200)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)抗体对分化的细胞进行免疫荧光染色;用免疫印迹法检测上述细胞裂解样品内的相应标志蛋白的电泳条带。结果:嗅黏膜神经干细胞高表达Nestin及CD133两种神经干细胞标志蛋白;干细胞经诱导分化后其形态具有神经元特征,并且高表达NF和TH两种神经细胞标志蛋白。结论:贴壁/悬浮序贯培养方法可体外纯化扩增嗅黏膜神经干细胞,该细胞可分化为酪氨酸羟化酶阳性神经元。
- 王超崔国兴王国祥宗海洋贺清华施俊峰宋雪祥苗丽新张志坚
- 关键词：嗅黏膜神经干细胞分化酪氨酸羟化酶
- 纤维蛋白胶支架搭载外胚间充质源雪旺细胞移植修复大鼠脊髓损伤被引量：5
- 2015年
- 目的:观察外胚层间充质源的雪旺细胞在损伤脊髓中的迁移情况、组织相容性,评价纤维蛋白支架搭载该细胞移植治疗急性脊髓损伤的疗效。方法:(1)成年大鼠鼻中隔活体取出部分鼻黏膜制成细胞悬液,自然纯化并扩增鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs),用雪旺细胞诱导培养基将其诱导为雪旺细胞并用红色荧光进行标记。(2)建立脊髓针刺损伤模型并移植标记细胞,术后10 d,观察雪旺细胞在组织内的存活和迁移情况,并评价其组织相容性。(3)健康SD大鼠60只,制作脊髓横断模型,随机分为3组:单纯脊髓横断(SCI)组、纤维蛋白胶(Fibrin)移植组和细胞-支架(F-C)移植组,术后每周进行运动行为学评分。术后12周取出脊髓组织,采用免疫组织化学染色和Western Blot方法检测脊髓横断部位神经纤维重建和髓鞘再生情况,以及神经丝蛋白(NF-200)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化。结果:(1)EMSCs来源的雪旺细胞体外分化扩增良好,免疫荧光结果显示其高表达S100、GFAP、P75、CNpase等表面标志蛋白。(2)移植进入体内的雪旺细胞存活良好并发生一定距离的迁移,且与脊髓内神经纤维有良好的相容性。(3)术后2周开始直至12周,F-C组较SCI组大鼠后肢运动功能有较明显恢复,差异有显著意义(P<0.05);Fibrin组亦有一定程度的恢复,但程度较轻;SCI组几乎没有恢复迹象。免疫组化染色结果显示:SCI组断端未见神经轴索通过,Fibrin组可见少量神经纤维通过,F-C组可见多量神经网络状结构。Western Blot检测结果显示:F-C组神经丝蛋白(NF-200)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)相对含量均高于Fibrin组和SCI组(P<0.05)。结论:外胚层间充质源雪旺细胞移植对于脊髓损伤后的组织学和功能学恢复有明显促进作用,纤维蛋白做为移植修复脊髓损伤的生物支架具有良好的应用前景。
- 崔学文李正南张志坚张雪松贺清华束浩明王穆彬刘伦
- 关键词：脊髓损伤外胚间充质干细胞雪旺细胞纤维蛋白胶神经再生
- 成人骨髓间质干细胞向神经干细胞的诱导分化被引量：3
- 2011年
- 目的:建立诱导成人骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向神经干细胞分化的体外培养方法,为细胞移植修复神经系统损伤提供种子细胞。方法:原代贴壁培养成人BMSCs并传代培养至第3代时,将细胞接种于铺有琼脂糖的培养瓶,用神经干细胞培养基(含B27,EGF,bFGF)抗贴壁诱导培养。将诱导培养的神经球(neurospheres)传代扩增。用免疫荧光染色和蛋白质印迹法,对贴壁培养的BMSCs和抗贴壁诱导培养的神经球细胞表达神经干细胞标志蛋白的水平进行检测和比较。结果:抗贴壁诱导培养可使BMSCs形成神经球,初级神经球传代可扩增形成次级神经球。神经球细胞高表达音猬因子、神经细胞黏附分子以及神经干细胞标志蛋白巢蛋白和CD133。结论:琼脂糖抗贴壁,神经干细胞培养基诱导培养可使成人BMSCs形成神经球,神经球细胞具有神经干细胞样特征,该方法可为细胞移植修复神经系统损伤提供大量的种子细胞。
- 庄琴朱彦陆益龙唐爱国宗海洋贺清华陈谦姜平张志坚
- 关键词：骨髓间质干细胞神经干细胞巢蛋白神经细胞黏附分子音猬因子
- CD44、SOX9、MMP9、Vimentin在翼状胬肉中的表达及其意义被引量：11
- 2016年
- 目的研究CD44、SOX9、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase,MMP9)及波形蛋白(Vimentin)在原发性翼状胬肉组织中的表达及其意义。方法对25例原发性胬肉组织和5例正常结膜组织的组织切片用CD44、SOX9、MMP9及Vimentin蛋白的抗体进行免疫组织化学染色,观察上述蛋白在翼状胬肉组织和正常结膜组织组织内的表达,对结膜上皮内CD44和SOX9染色阳性的细胞进行计数,并比较翼状胬肉组织与正常结膜组织内的细胞阳性率。结果 HE染色结果显示,正常结膜和翼状胬肉组织均由上皮层和固有层组成;正常结膜的上皮层次较少,固有层含有少量血管;翼状胬肉的上皮细胞层次明显增多,固有层内含有密集分布的血管。免疫组织化学染色阳性细胞计数的统计学数据表明,正常结膜组织内CD44阳性细胞率为15%±3%,翼状胬肉组织内为70%±15%;正常结膜组织内SOX9阳性细胞率为17%±4%,翼状胬肉组织内为75%±13%;两组的细胞阳性率差异均有显著统计学意义(均为P<0.001)。MMP9及Vimentin阳性细胞广泛分布于翼状胬肉组织的上皮及上皮下基质层内,在正常结膜组织内阳性细胞呈散在分布,翼状胬肉组织的免疫组织化学染色强度高于正常结膜组织。结论CD44、SOX9、MMP9及Vimentin在翼状胬肉组织中高表达,可能在翼状胬肉的发生、发展中起着重要作用。
- 黄燕徐三荣李梅胡新远贺清华肖寿华
- 关键词：翼状胬肉CD44SOX9波形蛋白
