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猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP4蛋白的原核表达与纯化: 根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF4基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为676bp的片段,并将扩增的片段...; 王中明夏平安徐红运刘玉松范旭赵琳张凤华崔保安; 关键词：PRRSV 原核表达; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体制备及免疫原性研究: 猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porcine Reproductive and Respiration Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病...; 赵琳; 关键词：猪繁殖呼吸综合征抗体制备免疫原性; 文献传递

感染PRRSV Nsp2基因部分缺失变异株的仔猪抗体变化规律被引量：2: 2011年; 为了解PRRSV Nsp2基因缺失变异株的致病性,采用2个Nsp2基因分别连续缺失3个和89个碱基的PRRSV变异株Hn-2(GenBank:FJ237419)和Hn-4(GenBank:FJ237421)的病毒液,人工滴鼻感染断奶仔猪,同时用Marc-145健康仔猪细胞培养液滴鼻作对照,在感染后0,7,14,24,32,41,50,60和70 d无菌采血,分离血清,用RT-PCR方法检测病毒、用N-ELISA方法和免疫荧光抑制试验分别检测抗PRRSV N蛋白抗体和抗PRRSV中和抗体,比较分析不同时期病毒复制和抗体产生的变化规律。结果表明,仔猪感染Hn-2和Hn-4毒株后7～14 d均能检测到病毒,第7天能检测到抗PRRSV N蛋白抗体,并一直维持较高水平,第41和50天检测到较低水平的中和抗体,随后中和抗体效价逐渐升高。试验猪均未出现死亡,表明PRRSV Nsp2基因缺失变异株不一定导致感染猪的死亡。; 张凤华卢晓艳徐红运赵琳刘玉松范旭夏平安崔保安; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白中和抗体 NSP2基因

猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株M基因的原核表达与重组蛋白的复性研究被引量：2: 2009年; 采用PCR方法从重组质粒pTG19-T-M扩增得到缺失N端疏水区序列的基因片段tM.将tM与原核表达载体pET-32 a进行连接并转化,重组质粒经鉴定并测序.结果表明,目的基因在大肠杆菌BL21细胞中成功地表达了醉繁殖与呼吸病毒重组蛋白pET-tM,表达量为31%.表达产物经SDS-PAGE分析,得到分子量约为29 kD的重组蛋白且以包涵体形式存在.8 mol.L-1尿素变性溶解包涵体,再用稀释与透析相结合的方法对重组蛋白进行复性.复性蛋白经W estern-b lot检测,结果证明复性蛋白可被PRRSV阳性血清识别用.; 刘明莉张凤华范旭赵琳刘玉松徐红运夏平安崔保安; 关键词：PRRSV M蛋白原核表达

重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体间接ELISA方法的建立: 2009年; 采用纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒重组核衣壳蛋白作为ELISA试验的标准抗原,通过优化ELISA各种条件,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该方法具有良好的特异性和重复性。; 李素平赵琳夏平安汪银锋王中明邱璜刘明莉徐红运; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白间接ELISA

猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体的分子特征: 根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体(swFcⅡRIIB)cDNA基因序列(DQ026064)，从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRIIB基因剪接异构体(FJ608551)，测定其序列并进~序列分析，将sw...; 刘玉松夏平安崔保安刘肖萍张志远范旭赵琳张凤华徐红运段二珍卢晓艳; 关键词：剪接异构体抑制性受体基因克隆; 文献传递

重组猪IgGⅡB类Fc受体蛋白的原核表达和抗体的制备被引量：1: 2010年; 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体cDNA(swFcγRⅡB)基因序列(FJ608551),利用Primer5.0软件设计合成了1对特异性引物,扩增swFcγRⅡB去掉胞内区和跨膜区的基因,PCR产物经KpnⅠ+EcoRⅠ双酶切后,将截短的swFcγRⅡB基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-swFcγRⅡB,在IPTG诱导下成功表达了分子质量约为40ku的融合蛋白swFcγRⅡB-His,该表达蛋白在细胞质中主要以不溶性包涵体的形式存在。原核表达蛋白经纯化免疫小鼠,制备鼠源swFcγRⅡB封闭抗体,ELISA检测抗体效价为1:5120,具有高度特异性。Western-blotting检测表明,制备的多克隆抗体可以与融合蛋白swFcγRⅡB-His特异性结合。; 刘玉松夏平安赵琳范旭张凤华徐红运刘肖萍张志远崔保安; 关键词：原核表达抗体制备

猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株的遗传变异分析被引量：2: 2010年; 用间接免疫荧光试验和RT-PCR方法，从河南省不同地区送检的疑似猪繁殖与呼吸综合征的病料中分离到16株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），扩增分离株的ORF5基因并进行序列测定、比较分析和绘制进化树．结果表明，16株分离株之间的氨基酸序列同源性为88．1％～99，8％；与欧洲型LV株和美洲型VR-2332株的氨基酸序列同源性分别为54．0％～54．5％和88．1％～99．2％，证明分离的16株病毒均为美洲型．用DNAstar等软件对16株分离株推导的氨基酸序列作进一步比较分析，发现16株分离株ORF5基因编码的gp5蛋白的抗原区、潜在疏水区、跨膜区和N-糖基化位点分布均有差异，与其它美洲型毒株也存在一定程度的差异，说明在河南流行的PRRSV存在明显的遗传差异性．; 范旭李伟娟刘玉松徐红运张凤华赵琳段志刚夏平安崔保安; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因克隆

重组猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备: 根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551)，利用Primer 5.0软件设计合成3对特异性引物，从质粒pTG19-T-swFcγRIIb1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC...; 刘肖萍刘玉松夏平安赵琳范旭徐红运张凤华张志远崔保安; 关键词：FCΓRIIB 原核表达蛋白纯化; 文献传递

猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备被引量：3: 2011年; 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Prim er 5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG19-T-swFcγRIIB1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2结构域蛋白分子基因片段,PCR产物经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32 a中,构建了3种猪FcγRIIB剪接异构体原核表达载体pET-EY,pET-AY,pET-BY,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下成功表达了相对分子质量约为36,29,27 kD融合蛋白表达,纯化后的融合蛋白分别免疫小鼠制备鼠源血清.ELISA结果显示抗体效价为1∶5 120,1∶5 120,1∶10 240.免疫印迹结果显示制备的多克隆抗体可以与融合蛋白特异性结合.; 刘肖萍张志远刘玉松赵琳范旭徐红运张凤华夏平安崔保安; 关键词：FCΓRIIB 原核表达

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