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具备中和中东呼吸综合征冠状病毒活性的单克隆抗体的制备: 2014年; 目的制备并鉴定对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)具有中和活性的单克隆抗体,为进一步开展MERS-CoV感染与免疫保护机制研究,以及发展诊断与治疗手段奠定基础。方法 MERS-CoV S蛋白受体结合区与人IgG Fc片段融合表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选出阳性克隆,随后通过多次亚克隆筛选出稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定;通过MERS-CoV假病毒及活病毒中和试验筛选出中和单抗。结果获得了10株能够稳定分泌抗原特异性单抗的杂交瘤细胞株。制备的腹水单抗亚类均为IgG1;其中7株单抗抗体ELISA效价达到10 000以上,并有1株单抗对MERS-CoV具有良好的中和活性。结论本研究获得了1株对MERSCoV具有良好中和活性的单克隆抗体。; 于虹邱洪杰潘婷李琳唐健郭彦孙世惠寇志华赵光宇周育森; 关键词：单克隆抗体中和活性

一种对中东呼吸综合征冠状病毒具有中和活性的小分子抗体及其应用: 本发明公开了一种对MERS冠状病毒具有中和活性的小分子抗体及其应用。该小分子抗体Nano‑Anti‑MRBD是如下(a)或(b)或(c)的蛋白质：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1...; 赵光宇周育森邱洪杰孙世惠郭彦寇志华李军锋

中东呼吸综合征冠状病毒S1蛋白在昆虫细胞中的重组表达及免疫效果评价被引量：2: 2015年; 目的:利用昆虫杆状病毒表达系统重组表达中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-Co V)S1蛋白,并对其免疫效果进行评价。方法:构建含有MERS-Co V S1基因的重组杆状病毒质粒,转染Sf9细胞包装杆状病毒;重组病毒传代3次获得种子病毒,感染Sf9细胞,收获感染上清,通过镍离子亲和层析纯化获得S1重组蛋白;用纯化的S1蛋白免疫BALB/c小鼠,采用ELISA检测免疫小鼠血清抗原特异性的抗体水平;采用假病毒中和试验检测血清中抗体的中和活性。结果:获得了表达MERS-Co V S1蛋白的重组病毒株,在昆虫细胞中表达并纯化了S1重组蛋白;利用重组表达的S1蛋白免疫小鼠3次,血清S1特异性Ig G抗体滴度可达1∶102 400,免疫小鼠血清稀释至1/5120后中和百分比仍达50%以上。结论:利用昆虫细胞重组表达的MERS-Co V S1蛋白具有良好的免疫原性,并能有效诱导产生高滴度中和抗体,为发展MERS-Co V重组蛋白疫苗奠定了基础。; 潘婷郭彦邱洪杰于虹太万博孙世惠赵光宇周育森; 关键词：S1蛋白昆虫细胞杆状病毒表达系统

SARS冠状病毒多抗原表位融合蛋白的表达及其诊断应用: 2013年; 目的制备SARS冠状病毒(SARS-CoV)多抗原表位融合蛋白,建立一种可特异性诊断SARS的血清学方法,用于SARS的明确诊断和流行病学调查研究。方法设计含有SARS冠状病毒S、M和N蛋白优势抗原表位区的多表位融合蛋白SMN,利用大肠杆菌表达SMN蛋白,并作为包被抗原建立ELISA方法,用于SARS患者血清检测。结果设计出包含S603-635、M2-31、N362-412表位区的多表位融合蛋白SMN,并在大肠杆菌中成功表达。以SMN蛋白为包被抗原,ELISA检测74份SARS患者血清全部为阳性,另44份非SARS-CoV感染的发热病人血清和62份健康人血清均为阴性。结论 SARS-CoV多抗原表位融合蛋白SMN在大肠杆菌中成功表达,以SMN为检测抗原建立的ELISA方法为SARS血清学诊断奠定了基础。; 张珍珍郭彦于虹高基民邱洪杰赵光宇周育森; 关键词：SARS冠状病毒表位蛋白表达酶联免疫吸附测定

一种展示SARS冠状病毒受体结合区的重组枯草杆菌芽孢的制备及免疫原性分析被引量：1: 2013年; 目的:利用枯草杆菌芽孢呈递技术制备表达SARS冠状病毒S蛋白受体结合区(RBD)的重组芽孢。方法:将枯草杆菌CotB基因构建到基因组整合质粒pDG1664中,再将RBD基因连接到CotB基因的下游,构建成重组质粒pDG1664-CotB-RBD,通过同源重组整合到PY-79枯草杆菌基因组中;利用红霉素抗性筛选重组菌并进行PCR和DNA测序鉴定,Western印迹鉴定重组菌芽孢表面RBD蛋白的表达情况;用表达RBD的重组芽孢以口服方式免疫小鼠,通过ELISA和流式细胞术检测重组芽孢的免疫原性。结果:制备出枯草杆菌基因组整合了RBD抗原基因的重组菌株RS1931,形成的重组芽孢表达相对分子质量约62×103的CotB-RBD融合蛋白;重组芽孢免疫的小鼠血清RBD抗原特异性IgG抗体滴度在末次免疫后2周可达1∶10 880,重组芽孢初免后18周的小鼠脾细胞中IFN-γ+CD4+、IL-4+CD4+和IFN-γ+CD8+T细胞比例上调,表明重组芽孢经口服免疫产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。结论:针对SARS冠状病毒S蛋白RBD建立了枯草杆菌芽孢呈递技术方法,制备出在枯草杆菌芽孢表面稳定表达外源RBD蛋白的重组株,获得的重组芽孢具有良好的免疫原性,为开发芽孢呈递型SARS疫苗奠定了基础。; 苗雨张珍珍郭彦唐健邱洪杰于虹孙世惠寇志华赵光宇周育森; 关键词：枯草杆菌芽孢 SARS冠状病毒

一种对中东呼吸综合征冠状病毒具有中和活性的小分子抗体及其应用: 本发明公开了一种对MERS冠状病毒具有中和活性的小分子抗体及其应用。该小分子抗体Nano‑Anti‑MRBD是如下(a)或(b)或(c)的蛋白质：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1...; 赵光宇周育森邱洪杰孙世惠郭彦寇志华李军锋; 文献传递

一种不依赖于活病毒的中东呼吸综合征冠状病毒受体结合区特异性中和抗体检测方法的建立被引量：1: 2018年; 目的拟建立一种不依赖于活病毒和高等级生物安全条件,快速简便检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERSCoV)受体结合区(RBD)特异性的中和抗体。方法利用哺乳动物表达系统表达重组rRBD-Fc蛋白;应用流式细胞术检测rRBD-Fc蛋白与Huh-7细胞结合的最佳浓度,建立通过流式细胞术检测rRBD-Fc与Huh-7结合活性的方法,并利用无关蛋白验证结合的特异性;在此基础上,利用RBD特异性中和抗体、RBD特异性非中和抗体、MERS-CoV RBD免疫小鼠血清和无关抗体建立能够检测中和抗体阻断RBD与Huh-7结合作用的RBD特异性中和抗体检测技术方法,并与实毒中和试验进行比较,评价方法的一致性;应用建立的中和抗体检测方法进行血清学检测。结果成功表达了rRBD-Fc蛋白,rRBD-Fc蛋白能够与Huh-7细胞特异性结合,并确定了rRBD-Fc与Huh-7细胞结合的最佳剂量;在此基础上建立了通过流式细胞术检测抗体阻断RBD与Huh-7结合作用的RBD特异性中和抗体检测技术方法,结果表明,检测方法能够区分具有中和活性的RBD特异性中和抗体、rRBD-Fc免疫小鼠血清和其他抗体,具有特异性,且能够反映中和活性的强弱。该方法在检测12株中和抗体时,与传统的实毒中和试验检测结果具有很好的一致性,能够有效应用于血清学检测。结论成功建立了一种不依赖活病毒和高等级生物安全条件,即可快速检测MERS-CoV RBD特异性中和抗体的方法,为针对MERS-CoV疫苗设计和抗体效果快速评价、血清学调查和免疫保护机制研究提供了一种更加简便、安全的技术手段。; 周旋寇志华郭彦李江凡何雷邱洪杰孙世惠周育森赵光宇杜恩歧; 关键词：中和抗体流式细胞术

新型佐剂蛋白TFPR1在毕赤酵母系统中的表达及鉴定被引量：2: 2016年; 目的：利用毕赤酵母系统表达一种基于蛇毒蛋白triflin的致病相关蛋白1（ PR-1）功能区蛋白 TFPR1。方法从质粒 pUC57-TFPR1中 PCR 扩增目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-TFPR1,转染入巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达重组蛋白TFPR1,采用ELISA法筛选阳性菌株后,SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果重组表达质粒pPICZαA-TFPR1经双酶切和测序鉴定证明构建正确；重组蛋白以分泌形式表达,相对分子质量约16＆#215;103。结论利用巴斯德毕赤酵母表达系统成功表达TFPR1蛋白,为进一步研究其功能和作为佐剂的应用提供参考资料。; 宁秀哲寇志华孙维来朱青杨裔邱洪杰郭晶晶郭彦于虹周育森; 关键词：佐剂分泌表达 PATHOGENESIS

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邱洪杰

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