郑明慧
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系被引量：6
- 2015年
- 目的：对华支睾吸虫成虫（Clonorchis sinensis, Cs）钙调节蛋白（CaM）进行生物学及功能分析，以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs cDNA质粒文库中寻找CsCaM全长序列，以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源比对、理化性质分析及功能域预测。以分子生物学方法进行原核克隆，大肠杆菌表达，亲和层析纯化，并将纯化蛋白免疫大鼠，产生多克隆抗体。ELISA检测CsCaM抗体滴度及产生曲线。免疫印迹实验分析CsCaM重组蛋白纯化及其抗体识别效果。免疫组化分析其组织定位；腹腔注射法建立CsCaM致大鼠肝纤维化模型。结果重组、表达及纯化了CsCaM，其编码150位氨基酸，理论相对分子质量23400。结构域预测其具有EF手位模序。pET-30a-CsCaM重组质粒其目的蛋白表达于宿主菌BL21 E. coli上清，相对分子质量约23400。总IgG抗体滴度于2~4周达较高峰，效价大于1∶51200。免疫组织化学定位显示CsCaM在成虫睾丸表达丰富。CsCaM腹腔注射大鼠的肝脏均显示不同程度病变，HE染色可见炎症反应较严重，可见气球样变、门管区炎及碎片状坏死；网状纤维染色显示小胆管周围胶原增生，有轻到中度纤维化。结论 CsCaM促进大鼠肝脏炎症病变及纤维化的作用，提示其可能参与了华支睾吸虫病致肝纤维化的作用。
- 郑明慧胡坤华刘炜余新炳
- 关键词：华支睾吸虫肝纤维化
- 华支睾吸虫膜抗原/排泄分泌抗原酸性磷酸酶的克隆、表达、生物学特征分析及组织定位被引量：3
- 2014年
- 目的:对华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)成虫酸性磷酸酶(acid phosphatase,AP)进行克隆、表达、生物学特征分析、组织定位及膜抗原/排泄分泌抗原鉴定。方法:对Cs AP进行生物信息学、分子生物学、免疫组化及明胶酶谱分析。结果:从Cs c DNA文库中筛选出编码AP新基因,全长1 410 bp,重组并由大肠杆菌表达、纯化,得到分子量为55 k D的重组蛋白Cs AP。Western blotting分析表明,Cs AP既是膜抗原又是分泌排泄抗原;免疫组化显示,Cs AP荧光显示于成虫的表皮层和肠支,在囊蚴也有显示,在雷蚴和尾蚴未显示荧光;ELISA分析表明Cs AP识别华支睾吸虫病人和日本血吸虫病人存在吸虫间的交叉免疫反应,Cs AP及粗抗原识别轻、中、重度感染程度华支睾吸虫病人的差别不明显。重组蛋白免疫大鼠后,总Ig G抗体滴度于3周达较高峰,抗体效价大于1∶25 600。明胶降解实验表明:Cs AP具降解胶原能力。结论:上述结果表明,Cs AP在大肠杆菌中高效表达,具有较好的免疫原性,但血清诊断价值不理想;Cs AP可能既是膜抗原,又是排泄分泌抗原。
- 郑明慧胡坤华张彤刘炜余新炳
- 关键词：华支睾吸虫酸性磷酸酶排泄分泌抗原膜抗原
- 虫源性galectin在寄生虫感染与免疫中作用的研究进展
- 2017年
- 半乳糖凝集素(galectin)是一个广泛分布于微生物、植物和动物(包括寄生虫)中的蛋白家族。随着后基因组学和功能蛋白质组学研究的深入,作为寄生虫感染和免疫中发挥重要作用的虫源性分子,galectin引起越来越多研究者的关注。本文综述了近年来发现的虫源性galectin及其在寄生虫入侵、移行、致病和免疫逃避中作用的研究进展。
- 唐思琪郑明慧吕志跃
- 关键词：半乳糖凝集素寄生虫免疫
- Fibulin-1蛋白的真核表达与ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 目的建立检测血清中Fibulin-1蛋白浓度的ELISA方法。方法构建Fibulin-1蛋白真核表达载体，以人Fibulin-1基因编码序列为模板，将目的片段定向克隆入载体并转入毕赤酵母菌，进行Fibulin-1蛋白的真核表达。表达产物纯化后，Westernblotting检测证明纯化的重组蛋白的抗原特异性。以该蛋白为定标绘制标准曲线，建立人血清ELISA检测方法并检测其精密度和回收率，最后初步分析人血清中Fibulin-1的含量。结果从真核表达体系获得了纯化的Fibulin-1蛋白，其具有良好的抗原特异性；建立的ELISA方法线性相关系数W=0．98，线性范围为12．5—800ng／mL，检测灵敏度为6．25ng／mL，蛋白回收率在94．33％～109．33％之间，CV均〈10％，具有良好的重复性；检测30例正常人血清样本中Fibulin-1的含量约为（31±8）μg／mL。结论建立的ELISA方法可用于检测血清中的Fibulin-1蛋白含量。
- 张剑文刘炜傅斌生张彤郑明慧台艳杨扬张琪陈规划
- 关键词：真核表达酶联免疫吸附测定
- 维生素与寄生虫
- 2018年
- 维生素作为机体各种生命活动的必要营养素,同时也参与了寄生虫在宿主体内的代谢及免疫过程。由于维生素的合成及其参与的代谢过程在寄生虫与宿主体内不尽相同,这为抗寄生虫药物的研究提供了新的视角。本文从寄生虫感染对宿主维生素水平及功能的影响,以及维生素对寄生虫在宿主内生长发育和致病的影响两方面着手,综述了常见维生素与寄生虫在代谢和功能上的相互影响,以期对寄生虫病药物研发有所启发。
- 王舒仪郑明慧吕志跃
- 关键词：维生素寄生虫药物靶点
- Clinprot技术筛选帕金森病血清标志物的研究
- 2017年
- 目的利用液体蛋白芯片-飞行时间质谱技术(CLINPROTTMMALDI-TOF/TOF MS,Clinprot技术)寻找帕金森病敏感的血清分子标志物。方法对51例帕金森病患者的血清和51例性别、年龄相匹配的正常对照者血清进行Clinprot技术分析,选择P≤0.05和表达差异大于2倍的蛋白峰进行质谱分析。采用遗传算法建立疾病诊断模型,验证模型敏感度和特异度。结果成功建立了帕金森病和正常血清的疾病诊断模型,模型特异度为98.45%,敏感度为91.83%。采用Clinprot技术同时找到5个感兴趣的蛋白差异峰,相对分子量分别为1 946、2 211、2 368、4 055和4 212,通过二级质谱检索Mascot数据库获得匹配蛋白,分别为核苷二磷酸激酶6、睾丸表达序列13B蛋白、核糖核酸酶7、THAP结构域蛋白3、氨转运蛋白Rh型C蛋白。结论 Clinprot技术能够客观显示出帕金森病患者与正常对照者血清差异蛋白,该研究鉴定出的5种蛋白有望成为帕金森病诊断的新分子标志物。
- 郑明慧李竞鲍蕴文潘昆贻朱树华胡坤华
- 关键词：帕金森病蛋白质组学
