钟秀风
- 作品数：69 被引量：110H指数：5
- 供职机构：中山大学中山眼科中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学语言文字文化科学更多>>
- 先天性睑裂狭小综合征患者内眦韧带组织学及超微结构初步研究
- 蔡建毫黄丹平钟秀风余佯洋巩迪
- 关键词：先天性睑裂狭小综合征内眦韧带组织学
- Islet1在人视网膜发育过程中的动态表达
- 许超超钟秀风张波葛坚
- 一种基于组织支架的三维视杯来源神经样细胞的钠离子通道检测方法
- 本发明公开了一种基于组织支架的三维视杯来源神经样细胞的钠离子通道检测方法。它是将人iPSc源性的3D视网膜的神经纤维层消化为单细胞，以该单细胞作为种子细胞经诱导分化培养基重悬后接入包被基质胶Matrigel的聚乳酸-羟基...
- 葛坚顾怀宇钟秀风李康寯杨斯婧
- 文献传递
- CLCN2基因突变者尿液来源诱导多能干细胞的构建及定向分化神经细胞
- 2020年
- 目的建立和鉴定CLCN2基因突变患者尿液来源特异诱导多能干细胞(iPSC),并初步探讨其神经分化能力。方法收集临床上1例CLCN2基因突变患者尿液细胞,将表达重编程因子OCT4、SOX2、KLF4和SV40LT的附加型载体通过电转染导入尿液细胞,使其重编程为iPSC,并继续诱导其神经分化。通过Sanger测序、核型鉴定、免疫荧光、逆转录PCR、畸胎瘤实验及定向分化等评价干细胞和神经细胞特性。结果电转后部分尿液细胞发生形态改变,形成边界清楚的致密细胞克隆团;这些克隆状生长的细胞可以连续传代,具有正常核型,含有CLCN2基因无义突变,表达多能干性标记且无外源基因;裸鼠体内形成三胚层畸胎瘤;体外可定向诱导分化为神经干细胞和星形胶质细胞。结论CLCN2基因突变患者尿液细胞可重编程为iPSC,并可体外分化为神经细胞,可为CLCN2基因突变相关疾病的研究提供重要材料。
- 陈灼林刘佳谢冰冰甘周庆钟秀风彭福华
- 关键词：诱导多能干细胞白质脑病神经分化
- 一种具有细胞示踪功能的生物工程视网膜神经支架及其制备方法
- 本发明公开了一种具有细胞示踪功能的生物工程视网膜神经支架及其制备方法。它是将GFP基因转染进入hiPSc中，得到携带GFP基因的hiPSc，命名为GFP-hiPSc，然后将GFP-hiPSc诱导形成的3D视网膜的神经纤维...
- 葛坚李康寯钟秀风
- 文献传递
- GSK3抑制剂CHIR99021调控人诱导多能干细胞向运动神经元分化被引量：1
- 2017年
- 目的探讨不同浓度糖原合酶激酶-3(GSK3)抑制剂CHIR99021对人诱导多能干细胞(i PSC)诱导分化为运动神经元的影响,分析其促进分化的最适浓度。方法在分化早期加入不同浓度CHIR99021培养i PSC 6 d,并依此将其分为对照组(0μmol/L)及1、2、3、4μmol/L组。分别在诱导分化早期、中期、晚期对各组细胞进行光镜观察和免疫荧光鉴定。结果在分化早、中、晚各期,细胞计数显示CHIR99021浓度越高细胞数量越多。早期,0~3μmol/L组神经干细胞标志物SOX1表达量无差异,4μmol/L组低于其余各组(P均<0.05);中期,0~3μmol/L组运动神经元前体标志物Olig2的表达量随CHIR99021浓度增加而增加(P<0.05),而4μmol/L组则稍低于3μmol/L组(P<0.05);晚期,2~4μmol/L组的细胞成功表达成熟运动神经元标志物胆碱乙酰转移酶(Ch AT),而0~1μmol/L组未表达。结论在神经分化的早期应用一定浓度的CHIR99021可以促进i PSC的细胞增殖,提高分化效率,并最终诱导其成为成熟运动神经元,其中3μmol/L为诱导最佳浓度。
- 易寰谢冰冰刘本刘佳李敏徐莉钟秀风彭福华
- 关键词：运动神经元
- 一种人多能干细胞分化为视网膜组织的简易高效可机械化的诱导方法
- 本发明公开了一种人多能干细胞分化为视网膜组织的简易高效可机械化的诱导方法。包括将hPSCs消化得到细胞沉淀，再将细胞沉淀培养得到拟胚体，拟胚体经诱导分化得到3D视网膜组织，其特征在于，所述的将hPSCs消化得到细胞沉淀，...
- 葛坚罗子明钟秀风李凯婧
- 文献传递
- 人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞的特性鉴定
- AIMS: To explore whether there exist tumor stem cells in solid human retinoblastomas(RTSC).METHODS: Fresh tumo...
- 钟秀风葛坚李永平黄冰
- 关键词：视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞无血清培养基视网膜前体细胞
- 人免疫重建的非肥胖型糖尿病-重症复合性免疫缺陷小鼠联合视网膜母细胞瘤荷瘤模型的建立被引量：1
- 2007年
- 目的建立人免疫重建的非肥胖型糖尿病-重症复合性免疫缺陷（NOD—SCID）小鼠和人视网膜母细胞瘤（RB）动物模型，并观察其生物学特性。方法NOD—SCID鼠20只，采用计算机随机数字表法分为4组，即空白组（仅注射磷酸盐缓冲液）、人化组（仅注射人淋巴细胞）、荷瘤组（仅注射瘤细胞SO—RB50）及人化荷瘤组（注射人淋巴细胞及瘤细胞SO—RB50），每组各5只鼠。常规分离健康成人外周血淋巴细胞，分别腹腔注射到人化组及人化荷瘤组小鼠。24h后，对单纯荷瘤组和人化荷瘤组鼠双侧腹股沟皮下接种人RB细胞株SO—RB50。定期观察小鼠的健康情况及移植瘤生长、转移情况。采用组织病理学、酶联免疫吸附实验（ELISA）、流式细胞仪等方法检测小鼠人免疫功能重建情况及所生长肿瘤特性。结果荷瘤组及人化荷瘤组RB皮下移植瘤潜伏期为12～19d，成瘤率为100％，形态学及免疫组织化学特点与人类的低分化RB一致，移植瘤内可见人白细胞共同抗原（LCA）阳性淋巴细胞浸润。免疫重建后9d，在人化组及人化荷瘤组鼠检测到人IgG存在，且随时间延长其含量逐渐升高；免疫重建后26d，小鼠血液内检测到人CD3^＋ T淋巴细胞，人化荷瘤组为27．1％，人化组为25．5％。由此表明，人化组及人化荷瘤组鼠也获得了人的体液免疫及细胞免疫功能。结论初步建立人免疫重建的NOD-SCID鼠和人RB皮下移植瘤模型，较好地模拟了有免疫功能情况下人RB的生物学行为，为研究RB肿瘤的发生、发展及其免疫防治提供了一个较为理想的动物模型。
- 钟秀风葛坚彭福华张波林建贤张文忻李永平
- 关键词：视网膜母细胞瘤小鼠SCID肿瘤移植
- 利用CRISPR/Cas9技术对VSX 2绿色荧光报告基因人诱导多能干细胞系的构建
- 2020年
- 目的构建表达视觉系统同源框2(VSX 2)增强绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因的人诱导多能干细胞系(hiPSCs)。方法根据成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术原理,设计VSX 2的小向导RNA(sgRNA),构建敲除质粒及包含左右同源臂的P2A-eGFP供体质粒;2个质粒经测序鉴定后电转野生BC1-hiPSCs细胞系,采用嘌呤霉素筛选获得单克隆,扩增培养并鉴定。采用PCR和Sanger测序鉴定基因型;采用核型分析法分析报告细胞系核型;采用STR法排除细胞交叉污染;采用免疫荧光法及逆转录PCR法检测报告细胞系的多能干细胞分子标志物的表达;通过体外三胚层形成实验鉴定报告细胞系向三胚层分化的能力;应用3D视网膜类器官诱导技术获得视网膜类器官,并采用免疫荧光染色法评价VSX2蛋白与eGFP的共定位情况。结果电转后通过PCR鉴定和Sanger测序成功筛选到1株含有VSX 2-eGFP报告基因的hiPSC系。核型分析结果显示该报告细胞系核型正常。STR鉴定结果表明,BC1-VSX 2 eGFP-iPSCs无细胞系交叉污染。逆转录PCR检测和免疫荧光染色表明,BC1-VSX 2 eGFP-iPSCs中iPSCs标志物基因和蛋白表达阳性,包括NANOG、OCT4、SOX2、DNMT3B和GDF3 mRNA以及NANOG、OCT4、SSEA4和TRA-1-60蛋白。免疫荧光染色表明,由BC1-VSX 2 eGFP-iPSCs分化的三胚层组织中内胚层标志物甲胎蛋白(AFP)、中胚层标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和外胚层标志物神经细胞特异性微管蛋白(TUJ1)表达均为阳性;eGFP与VSX2共表达于视网膜类器官的神经视网膜。结论成功构建1株表达VSX 2-eGFP报告基因的hiPSCs,该细胞系可实时指示VSX2蛋白的时空表达变化,为视网膜发育、疾病机制研究及治疗方法评价提供有力工具。
- 郑丹丹王远张祖明关远远谢冰冰晋康新向孟清钟秀风
