陈卫红
- 作品数：3 被引量：12H指数：2
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院环境生物学系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析被引量：6
- 2009年
- 从嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)RNA中通过RT-PCR克隆出β-葡萄糖苷酶基因bglⅠ的全长序列,cDNA序列为2672bp,Genbank登录号为EU269025,将该片段插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K/bgl,经线性化后用电穿孔法导入毕赤酵母GS115中,在醇氧化酶AOX1基因启动子作用下,获得高效表达β-葡萄糖苷酶的毕赤酵母工程菌株.经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析纯化了该重组表达蛋白.SDS-PAGE测得该重组蛋白相对分子质量(Mr)约为120×103.经甲醇诱导,培养基中β-葡萄糖苷酶的活力可达1.2U/mg,小规模发酵量达0.45mg/mL.该酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0.于70℃保温30min仍保持80%的酶活力,具有较高的热稳定性,在pH3.0～9.0的条件下酸碱耐受性强.
- 陈卫红李多川
- 关键词：嗜热子囊菌光孢变种纯化毕赤酵母Β-葡萄糖苷酶
- 嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析
- 到目前为止，已有上百个微生物β-葡萄糖苷酶基因得到克隆，许多微生物来源的β-葡萄糖苷酶基因已获得异源表达。真菌中目前研究得较多的是酵母和木霉属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus')等霉菌。嗜热真菌...
- 陈卫红
- 关键词：嗜热子囊菌光孢变种Β-葡萄糖苷酶基因克隆基因表达酶学性质
- 文献传递
- 嗜热真菌热稳定性β-葡萄糖苷酶的克隆表达、纯化及酶学性质被引量：5
- 2009年
- 从嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)中克隆出β-葡萄糖苷酶基因bglII的全长序列,GenBank注册号为EU263992。将该基因插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K中以获得重组质粒,将重组质粒转导入毕赤酵母中,大量筛选后获得高效表达β-葡萄糖苷酶的酵母工程菌株。经甲醇诱导6d,培养基中β-葡萄糖苷酶的活力可达0.23U/mg。该酶的最适反应pH为5.0,最适反应温度为50℃。通过DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析纯化了该重组蛋白质。SDS-PAGE测得该重组蛋白质分子量约为118kDa。
- 陈卫红李多川
- 关键词：嗜热子囊菌光孢变种纯化
