陈思源
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：西南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 基于Fractional Hedonic博弈的联盟形成算法的研究
- 随着人工智能和分布式系统的发展，多Agent系统逐渐成为一个热门研究领域，并且广泛应用于社交网络分析、智能机器人和数据挖掘等领域。在多Agent系统中，Agent之间可以进行交互、协作和合作，互相合作的Agent组成联盟...
- 陈思源
- 关键词：多AGENT系统SHAPLEY值
- 文献传递
- 家蚕整合素基因Bmintegrin αPS3的鉴定及亚细胞定位被引量：6
- 2013年
- 【目的】克隆家蚕整合素基因BmintegrinαPS3,分析其mRNA表达及亚细胞定位特征,并进行原核表达及蛋白纯化,为进一步探究BmintegrinαPS3在家蚕中的功能奠定基础。【方法】利用RACE方法克隆获得BmintegrinαPS3的cDNA全长序列;采用RT-PCR方法检测BmintegrinαPS3的时空表达;在原核表达系统中表达获得BmintegrinαPS3重组蛋白;并构建BmintegrinαPS3真核表达载体,转染家蚕胚胎细胞系分析其蛋白亚细胞定位。【结果】家蚕整合素基因BmintegrinαPS3编码框全长为2 895 bp,编码965个氨基酸,含有整合素家族蛋白典型的integrin alpha结构域,预测其为跨膜蛋白。构建了BmintegrinαPS3的原核表达系统,并利用亲和层析纯化获得高纯度的BmintegrinαPS3原核表达蛋白,为进一步制备抗体获得足够的抗原。在家蚕细胞系中外源表达BmintegrinαPS3蛋白,显示其主要定位于细胞质和细胞膜中。另外,RT-PCR结果显示BmintegrinαPS3 mRNA在血细胞中为特异持续表达。【结论】获得了BmintegrinαPS3的完整cDNA序列及表达特征,经原核表达、纯化获得其融合蛋白,在细胞水平上初步分析了其亚细胞定位情况。
- 谈娟张奎徐曼陈思源崔红娟
- 关键词：克隆原核表达亚细胞定位
- 家蚕组织蛋白酶O(BmCatO)基因鉴定及表达分析被引量：6
- 2015年
- 【目的】克隆家蚕(Bombyx mori)蛋白酶O基因Cathepsin O(Bm Cat O),分析其m RNA表达特征,通过原核表达、蛋白纯化和多次免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,为进一步探究组织蛋白酶O在家蚕变态发育中的功能奠定基础。【方法】利用RACE技术克隆获得家蚕组织蛋白酶O的全长c DNA序列,然后采用RT-PCR对其时空表达特征进行研究。从NCBI下载其他物种组织蛋白酶O基因序列,利用Clustalx和MEGA 6.0软件进行同源比对和进化分析。选取特异性较高的片段设计特异性引物,将PCR扩增产物连接至PET32a质粒,转化至E.coil表达菌株Rosetta(DE3),经IPTG诱导获得组织蛋白酶O重组蛋白,然后利用Ni+亲和层析方法对重组蛋白进行纯化,最后多次免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。【结果】家蚕组织蛋白酶O基因存在于家蚕第14号染色体上,scaffold为nscaf2943,基因编号BGIBMGA009231。该基因有两种剪切形式,剪切体1开放阅读框(ORF)全长为1 071 bp,编码356个氨基酸,预测蛋白分子量36 k D,等电点8.594;剪切体2 ORF全长为942 bp,编码313个氨基酸,预测蛋白分子量40 k D,等电点7.951。两种剪切体均有6个外显子和5个内含子构成,剪切体2的第六外显子出现部分缺失。两种剪切体编码的蛋白结构相似,均含有信号肽、Inhibitor129和Pept-C1结构域。进化分析结果表明,无脊椎动物组织蛋白酶单独聚为一类,且家蚕组织蛋白酶O与同为鳞翅目成员的二化螟(Chilo suppressalis)组织蛋白酶O最为接近。RT-PCR结果显示该基因特异性持续表达于幼虫血细胞,剪切体1的表达水平明显高于剪切体2,但这两种剪切体在幼虫血细胞发育时期表达趋势一致。构建家蚕组织蛋白酶O原核表达系统,利用亲和层析纯化获得高纯度的家蚕组织蛋白酶O重组蛋白,并利用纯蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA显示其效价高达到1﹕1 280 000。Western印迹结果表明,该抗血清
- 苏晶晶陈思源张奎余霜李钰添梁航华赵羽卒晁会娟崔红娟
- 关键词：家蚕克隆抗体制备
