黄偲
- 作品数：21 被引量：75H指数：6
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牦牛Toll样受体8和9基因克隆及组织表达分析被引量：2
- 2015年
- 为了解牦牛Toll样受体8(TLR8)和9(TLR9)蛋白的结构特征及其基因的组织表达规律,丰富牦牛TLRs基因研究的理论数据,应用RT-PCR方法克隆牦牛TLR8、TLR9基因,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR技术构建组织表达谱。结果显示,两个基因cDNA全长分别为3 102bp和3 090bp。牦牛TLR8和TLR9基因与野牦牛、黄牛和绵羊之间的同源性都很高,均在95%以上。牦牛TLR8和TLR9蛋白都具有胞外LRRs功能域、胞内区TIR结构域、低复杂度区;另外,TLR8还具有1个C端富集亮氨酸重复序列(LRRCT)和跨膜结构域。两个基因在10个组织中均有不同程度的表达,在肾脏中表达量最高,而在大肠中表达量最低。本研究成功克隆了牦牛TLR8和TLR9基因的完整编码区,并揭示了它们在各组织器官的表达规律,为进一步研究TLRs在牦牛体内的免疫机制奠定了基础。
- 黄勇兰道亮陈亚冰林宝山黄偲李键
- 关键词：牦牛TOLL样受体9克隆
- 牦牛Toll样受体5基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2014年
- 根据GenBank中已公布牛Toll样受体5(toll-like receptors 5,TLR5)基因序列,设计全长引物,并对所得序列进行生物信息学分析和预测。基因序列分析结果表明,克隆得到牦牛TLR5基因全长2582bp,开放阅读框2577bp,编码氨基酸858个,N端含有21个氨基酸组成的信号肽,分子质量为97.981ku,理论等电点为4.85;蛋白预测结果表明,TLR5编码蛋白整体表现为亲水性;同源性分析结果表明,牦牛与野牦牛、黄牛、绵羊、山羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近,说明TLR5基因序列具有较高的保守性。牦牛TLR5基因序列的成功克隆为今后深入研究牦牛及高原动物抗病及免疫机制提供非常重要的理论基础。
- 陈亚冰兰道亮林宝山黄偲黄勇李键
- 关键词：牦牛克隆
- 牦牛不同组织TLR3、TLR5 mRNA转录水平相对定量研究被引量：1
- 2014年
- 参考牦牛TLRs基因序列设计荧光定量PCR特异性引物,建立检测牦牛TLRs相对表达量的荧光定量PCR方法,分析TLR3及TLR5基因在牦牛不同器官组织中的转录水平。结果显示两基因具有不同的表达谱及表达量,其中TLR3基因除在乳腺组织外,在其它组织器官中均有转录,其中在心、大肠、胃和肌肉组织中表达量较高;TLR5基因则在心、肺、大肠、小肠、胃、肌肉、卵巢组织中具有较高的表达量。该试验结果表明,TLRs在不同组织器官转录水平差异较大,可能与其对病原体的识别有关;同一个基因在不同组织中存在差异性,这可能与基因作用机理相关。
- 陈亚冰兰道亮林宝山黄偲黄勇李键
- 关键词：牦牛转录水平TLRS
- 牦牛神经珠蛋白基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2014年
- 参照GenBank中牛神经珠蛋白(Ngb)基因序列,设计引物并从牦牛脑组织中克隆出牦牛Ngb基因。基因序列分析表明,牦牛Ngb基因编码区全长456bp,开放阅读框为456bp,编码氨基酸151个,分子质量16ku,理论等电点为4.859。蛋白预测结果表明,Ngb编码蛋白整体表现为亲水性。同源性分析表明,13条序列中牦牛与牛、藏羚羊、绵羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近,说明Ngb基因序列具有较高的保守性。牦牛Ngb基因序列的成功克隆为进一步对牦牛低氧适应的分子生物学机制的研究提供依据。
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- 关键词：牦牛克隆
- 麦洼牦牛Toll样受体1基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2014年
- 【目的】克隆并分析高原牦牛Toll样受体1基因(TLR1)的特点。【方法】提取麦洼牦牛脾脏RNA,反转录合成cDNA,以其为模板分段扩增后拼接获得麦洼牦牛TLR1基因编码区序列,采用相关分析软件对基因进行序列分析,并对其编码的蛋白质进行基本理化性质分析及预测。【结果】分段扩增获得了TLR1基因1 484bp的上游序列和823bp的下游序列,拼接后获得2 287bp的cDNA序列。TLR1基因系统进化树及同源性比对结果表明,TLR1基因极其保守,牦牛TLR1基因与黄牛、绵羊等哺乳动物遗传距离很近。预测TLR1基因含有1个2 184bp的开放阅读框,编码727个氨基酸,其编码蛋白的分子质量为83.148 7ku;预测TLR1蛋白在第500~600位氨基酸区域含有1个疏水区域,结合跨膜区预测认为该疏水区域可能是TLR1蛋白的一个跨膜区,TLR1蛋白二级结构主要以α-螺旋及自由卷曲为主。【结论】TLR1基因在高原牦牛与平原哺乳动物之间存在较高的同源性,这可能与TLR1蛋白重要的生理功能相关。
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- 关键词：麦洼牦牛克隆生物信息学分析
- 牦牛TLR2和TLR4基因mRNA在不同组织中的表达分布研究被引量：14
- 2014年
- 为检测牦牛TLR2和TLR4基因m RNA在不同组织中的表达分布,本研究根据Gen Bank中牛TLR2和TLR4序列设计特异性引物,以β-actin为参照基因,建立了检测牦牛天然免疫受体TLRs家族TLR2和TLR4基因的荧光定量PCR方法,并对TLR2和TLR4基因在牦牛各组织中的表达分布进行了研究。结果表明,TLR2和TLR4基因在牦牛所有组织中均有表达,其中TLR2基因在小肠表达量最高,在卵巢表达量最低,在肾、肺、肝、心、脾、乳腺、大肠、肌肉等组织依次有较高的表达;TLR4基因在乳腺表达量最高,在肌肉表达量最低,在脾、肝、小肠、肾、卵巢、肺、心、大肠等组织依次有较高水平的表达。该研究结果提示TLR2和TLR4基因可能在牦牛抗病免疫分子机制中发挥重要的作用,对研究高原动物免疫机制和应对牦牛及其他高原动物重大疫病具有重要意义。
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- 关键词：牦牛荧光定量PCR
- 麦洼牦牛TLR3基因编码区的克隆及生物信息学分析
- 2014年
- 利用分子克隆技术成功获得麦洼牦牛TLR3编码区基因序列,采用相关分析及预测软件对基因及其编码的蛋白质进行基本理化性质、二级结构及结构域等分析预测。结果表明该基因包含了1个2 715 bp的开放阅读框,编码904个氨基酸;所编码的蛋白质二级结构主要由α螺旋及无规则卷曲为主;TLR3基因进化树及基因同源性比对结果表明TLR3基因及其保守,牦牛TLR3基因与黄牛、绵羊和马等哺乳动物遗传距离很近。
- 陈亚冰兰道亮林宝山黄偲黄勇李键
- 关键词：麦洼牦牛克隆生物信息学分析
- 麦洼牦牛TLR1基因组织表达分析被引量：6
- 2015年
- 【目的】建立一种牦牛TLR1基因表达量的荧光定量PCR检测方法,并分析TLR1基因在牦牛不同组织中的表达差异。【方法】参考牦牛TLR1基因序列,在其保守区设计特异性引物,并以牦牛β-actin基因为内参基因建立荧光定量方法;基于该荧光定量方法分析TLR1基因在牦牛心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、胃、乳腺、肌肉、卵巢11种组织中的表达水平。【结果】TLR1基因和β-actin基因扩增产物电泳结果呈现单一条带,其产物熔解曲线均为特异的单峰,表明引物具有较高的特异性。组织表达结果显示,TLR1基因在所检测的牦牛11个组织样本中均有表达,其中在肾、肝、脾、肺、卵巢、小肠中表达量较高,在胃、乳腺、心、大肠、肌肉组织中表达量较低。【结论】TLR1基因在牦牛各组织中转录水平差异较大,这可能与各组织对病原体的识别和抵抗能力有关。
- 陈亚冰兰道亮黄勇林宝山黄偲李键
- 关键词：麦洼牦牛荧光定量PCR组织表达谱
- 牦牛TLR7基因的克隆序列分析及其组织表达研究被引量：2
- 2014年
- 为了解牦牛TLR7基因特点及其在牦牛各组织器官动态表达分布规律。根据GenBank中牛TLR7序列设计引物克隆并对所得序列进行生物信息学分析,并以β-actin为参照基因,SYBR Green I为荧光染料,建立检测牦牛天然免疫受体TLRs家族TLR7基因的荧光定量PCR方法,对TLR7基因在牦牛各组织中的表达分布进行研究。结果表明:克隆得到牦牛TLR7基因编码区全长3 153 bp,编码氨基酸1 050个,N端含有27个氨基酸组成的信号肽,分子量120.7192 ku,理论等电点为7.35;TLR7编码蛋白整体表现为亲水性;10条序列当中牦牛与野牦牛、普通牛、绵羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近,说明TLR7基因序列具有较高的保守性;荧光定量分析发现,TLR7基因在牦牛所有组织中均有表达,TLR7基因在肾脏表达量最高,在大肠表达量最低,在肝、脾、肺、卵巢、小肠、心、胃、肌肉、乳腺等组织依次有较高的表达。该研究结果为理解TLRs在牦牛等其他高原动物体内的分布及动态表达规律以及牦牛抗病毒免疫及育种的相关研究奠定了基础。
- 林宝山兰道亮陈亚冰黄偲梁彦彦李键
- 关键词：克隆荧光定量PCR牦牛
- 牦牛发情期卵巢比较转录组学研究被引量：7
- 2016年
- 旨在进一步了解牦牛发情期卵巢的分子机制,解析牦牛繁殖的特殊性。本研究应用RNA-seq技术对牦牛和平原黄牛发情期卵巢进行转录组高通量测序及全基因组差异表达模式比对分析。通过比较分析牦牛和黄牛卵巢转录组数据,共筛选出1 307个差异表达基因,其中661个基因表达量上调和646个基因表达量下调。进一步功能分析表明,这些差异基因涉及多种GO分类及KEGG通路。其中GO分类注释显示,差异基因与细胞粘附、激素调控等生物学过程存在密切关联,同时钙离子结合、阳离子跨膜转运等分子事件表现活跃。KEGG通路分析显示,补体和凝血级联通路的富集水平最高,其次为细胞色素P450相关通路。昼夜节律等一些新型通路,尽管与生殖功能没有明显关联,但也表现出显著富集。本研究首次对比牦牛和黄牛发情期卵巢转录组数据,筛选并分析相关差异基因。该研究结果为进一步阐述牦牛卵巢的基本分子机理提供基础,同时也为全面理解牦牛繁殖特异性提供新的思路。
- 兰道亮熊显荣柴志欣艾鷖黄偲李键
- 关键词：牦牛转录组分子机制
