万荣
- 作品数：11 被引量：74H指数：5
- 供职机构：中国农业大学更多>>
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- 猪前脂肪细胞为核供体生产表达绿色荧光蛋白的转基因克隆胚胎被引量：2
- 2007年
- 分离培养了成年猪前脂肪原代细胞,并对前脂肪细胞向成熟脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色法鉴定了脂肪细胞。利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染前脂肪细胞,经过G418筛选获得了阳性细胞株。然后分别以前脂肪细胞、转绿色荧光蛋白(GFP)前脂肪细胞及胎儿成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植,结果表明:前脂肪细胞(8.8%)和胎儿成纤维细胞(8.3%)的囊胚发育率无显差异著(P>0.05);与前脂肪细胞相比,转基因前脂肪细胞的囊胚发育率降低,但差异不显著(3.7%vs.8.8%,P>0.05)。前脂肪细胞为核供体生产转基因克隆胚胎,能够获得转基因囊胚。虽然囊胚发育率不高,但为生产脂肪细胞转基因克隆猪奠定了基础。
- 潘登科万荣刘吉牟玉莲张莉李奎冯书堂
- 关键词：前脂肪细胞绿色荧光蛋白
- 鲁西黄牛皮肤成纤维细胞分离与培养的研究被引量：11
- 2004年
- 研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的分离与培养、纯化方法及生长特征 ,获得了传代培养的鲁西黄牛皮肤成纤维细胞和上皮细胞。鲁西黄牛耳皮肤细胞在体外培养时呈贴壁生长 ,其原代或早期传代培养物由上皮样细胞与成纤维细胞混合组成。传代培养混合生长的细胞用 0 .2 5 %胰蛋白酶液 37℃下消化处理 3～ 4 min,脱壁悬浮的主要为成纤维细胞。采用反复消化法在传代过程中将二者逐步分离纯化 ,获得了可正常传代的鲁西黄牛耳上皮细胞系和成纤维细胞系。通过绘制生长曲线研究了鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞的增殖规律。传代培养至 12代的鲁西黄牛皮肤成纤维细胞染色体倍性正常。利用第 6代成纤维细胞作核供体克隆试验结果证明重构胚体外发育正常 ,囊胚发育率为 2 7.3%。
- 孙秀柱李青旺戴蕴平程金华龚国春万荣朱化彬
- 关键词：体外培养皮肤组织鲁西黄牛
- 实验用小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞为核供体生产转基因克隆胚胎
- 2007年
- 目的比较不同类型体细胞对生产转基因克隆胚胎效率的影响。方法利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染到五指山小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞,经过G418筛选后均获得了阳性细胞株。然后分别以两种类型转基因细胞以及未转基因细胞为核供体进行体细胞核移植,比较不同类型供体细胞克隆胚胎的囊胚发育率。结果胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞克隆胚的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,8.3%vs.7.1%);转基因胎儿成纤维细胞(9.6%)和转基因骨髓间充质细胞(9.9%)克隆胚胎的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,9.6%vs.9.9%);每一种类型供体细胞转基因与否对克隆胚的囊胚发育率无影响(P>0.05)。结论通过体细胞核移植技术,小型猪骨髓间充质细胞与胎儿成纤维细胞均可有效地生产转基因囊胚。
- 潘登科潘求真牟玉莲万荣刘吉郑茂恩刘晓张莉冯书堂
- 关键词：小型猪骨髓间充质细胞体细胞核移植绿色荧光蛋白
- 供体细胞类型对体细胞克隆牛生产效率的影响被引量：20
- 2004年
- 建立了中国红系冀南黄牛颗粒细胞系(YGR)、Holstein奶牛颗粒细胞系(HGR)、Holstein奶牛不同个体的成年成纤维细胞系(AFB)以及Holstein奶牛同一个体的胎儿成纤维细胞系(FFB)和胎儿输卵管上皮细胞系(FOV).以上述不同类型的体细胞为核供体,进行了体细胞核移植,共成功培育出12头体细胞克隆牛.比较了不同类型供体细胞的重构胚的发育潜能,结果表明:(ⅰ)YGR和HGR的重构胚的囊胚发育率(33.2%vs35.1%)无显著差异(P>0.05),妊娠率分别为33.3%和30.2%,产犊率分别为16.7%和11.6%;(ⅱ)Holstein奶牛不同个体AFB的重构胚的囊胚发育率(27.9%vs39.4%)差异显著(P<0.05),妊娠率分别为36.2%和36.4%,产犊率分别为14.9%和27.3%;(ⅲ)Holstein奶牛同一个体的FFB和FOV的重构胚的囊胚发育率(37.9%vs41.5%)差异显著(P<0.05),妊娠率分别为45.7%和24.1%,产犊率分别为22.9%和10.3%.综合比较Holstein奶牛的4种体细胞(HGR,AFB,FFB和FOV)的重构胚的发育情况,结果显示:在体外发育阶段,FOV的重组胚的囊胚发育率(41.5%)最高,FFB(37.9%)和HGR(35.1%)次之,AFB(29.4%)最低,三者之间差异显著(P<0.05).在体内发育阶段,4种供体细胞克隆胚胎的妊娠率分别为30.2%,36.2%,45.7%和24.1%,产犊率分别为11.6%,17.2%,22.9%和10.3%.
- 龚国春戴蕴平朱化彬王海平王莉莉李荣万荣刘颖李宁
- 关键词：体细胞克隆供体细胞成纤维细胞系重构胚核移植
- 鲁西黄牛体细胞克隆保种技术的研究被引量：1
- 2006年
- 以体外培养的鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞作核供体,研究利用体细胞克隆技术保存我国地方黄牛优良品种的技术方法。通过组织块培养法建立的鲁西黄牛(1♂,4♀)成纤维细胞系,作为核移植供体细胞,利用屠宰场母牛卵巢卵母细胞经体外培养成熟后作为核受体进行核移植,试验结果表明:重构胚的融合率为62.5%(242/387),分裂率为63.6%(154/242),体外培养第7天囊胚发育率为42.9%(66/154)。体外培养第7天的囊胚的内细胞团细胞(ICM)与滋养层细胞数平均为37和47,ICM占44.2%。体外发育到7 d的囊胚新鲜胚胎的移植妊娠率(新鲜胚胎)移植受体10头,60 d妊娠率为20%(2/10)。
- 朱化彬程金华孙秀柱王栋戴蕴平龚国春万荣郝海生
- 关键词：鲁西黄牛成纤维细胞系体细胞克隆
- 利用CNCPS研究玉米和豆粕中碳水化合物不同组分的瘤胃降解和小肠消化被引量：8
- 2008年
- 试验的目的在于研究玉米和豆粕中不同碳水化合物组分的瘤胃降解和小肠消化。应用瘤胃尼龙袋技术和小肠液冻干粉消化试验,结合康乃尔净碳水化合物和蛋白质体系的剖分原理,对玉米和豆粕全样、瘤胃非降解残渣、小肠液冻干粉消化后的残渣的碳水化合物组分进行了剖分,并探讨了不同组分的瘤胃降解和小肠消化特性。结果表明,玉米和豆粕干物质的瘤胃降解率分别为59.1%和72.7%;碳水化合物的瘤胃降解率分别为69.6%和66.2%;瘤胃非降解残渣的干物质小肠消化率分别为40.8%和68.0%;碳水化合物小肠消化率分别为40.4%和62.7%。瘤胃尼龙袋和小肠液冻干粉可以用来作为反刍动物消化研究的方法,结合CNCPS进行组分的剖分可以很好地研究碳水化合物及其组分的利用情况。
- 杜晋平任丽萍赵金石万荣孟庆翔
- 体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1克隆猪被引量：26
- 2009年
- 转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪在优质猪培育及研究ω-3不饱和脂肪酸预防心血管和癌症疾病中的作用方面有着重大的应用．本研究首次通过体细胞核移植制备了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪．将sFat—1基因转染到大白猪胎儿成纤维细胞，获得转基因阳性细胞克隆，然后以转基因细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎，胚胎体外培养或进行移植．先后移植了1889枚1-4细胞期克隆胚胎到10头受体母猪的输卵管内，28天B超检测9头受体母猪妊娠（90％），7头妊娠足月（70％）分娩产下21头仔猪，体细胞克隆猪的效率为1．1％（出生仔猪／移植胚胎）．体细胞克隆猪效率的提高，主要是对克隆胚胎的移植环节进行了改进，比较了受体母猪排卵状况对胚胎移植效率的影响．当受体母猪卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段，能够获得较高的妊娠率和妊娠足月率（100％），而排卵后移植妊娠足月率为0％．对健康存活15头克隆猪进行了PCR和Southern检测，证实13头为转基因猪，转基因阳性率为87％．RT—PCR检测13头转基因猪，12头表达sFat—1基因．以上结果表明，利用优化的体细胞转基因结合核移植技术，可以成功地批量生产转sFat-1基因的克隆猪．
- 潘登科张莉周艳荣冯冲龙川刘晓董恩球王树臣万荣张健陈红星
- 关键词：体细胞核移植转基因猪
- 促减数分裂甾醇(MAS)对猪卵母细胞体外成熟和胚胎发育能力的影响
- 本研究利用MAS合成代谢过程中的抑制剂AY9944累积FF-MAS,间接地研究了内源性MAS对猪卵母细胞体外成熟质量的影响.将采自猪卵巢表明直径3-5 mm卵泡的卵丘细胞包裹的卵母细胞(COCs,cumulus oocy...
- 潘登科万荣刘吉牟玉莲张莉刘岚员新旭常杰冯书堂
- 关键词：卵母细胞体外成熟囊胚发育率
- 文献传递
- 不同类型的转基因细胞为核供体生产猪的转绿色荧光蛋白基因克隆胚胎被引量：1
- 2006年
- 2005年我国获得了体细胞克隆猪的成功,但是在体细胞转基因克隆猪方面还处于起步阶段。猪的转基因克隆在农业和医学方面有着巨大的应用前景,在农业上可以提高猪肉品质和培育抗病猪种等;医学上可以为人类异种器官移植、疾病模型和新药筛选提供理想材料。体细胞核移植结合基因组修饰技术,是目前生产转基因家畜的一种有效方式。供体细胞的类型是影响转基因克隆效率的一个关键因素,因为供体细胞的类型决定着体细胞转基因效率和重组胚的发育潜力。目前所知,较成功用于生产转基因克隆猪的供体细胞仅限于胎儿成纤维细胞,因为它易培养、增殖期限长、重构胚的发育能力高。此外骨髓间充质细胞,一种成体干细胞,作为转基因克隆猪的供体细胞有着巨大的潜力,国内外仅有个别报道。前脂肪细胞,一种易于获得的体细胞,有报道称利用成年猪前脂肪细胞为核供体构建的克隆胚发育能力和胎儿成纤维细胞相当,并且获得了克隆猪的后代。而利用猪前脂肪细胞生产转基因克隆胚胎,将为后续组织工程研究奠定基础。因此本研究选择猪胎儿成纤维细胞、骨髓间充质细胞和前脂肪细胞为转基因克隆的供体细胞,目的是比较不同类型转基因供体细胞对生产克隆胚胎效率的影响。本研究首先建立了近交系五指山小型猪(WZSP)胎儿成纤维细胞系(FF)、新生猪骨髓间充质细胞(MSCs)系和成年猪前脂肪细胞系(PreA)。采用组织块法建立胎儿(27日龄)成纤维细胞系;髓间充质细胞从新生猪后腿骨冲取骨髓,加入到Percoll分离液中离心,吸取中间界层面细胞,贴壁法培养骨髓间充质原代细胞,培养基为低糖DMEM。对间充质细胞向脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色鉴定;前脂肪细胞从猪的皮下脂肪取样,用0.1%胶原酶消化法建立前脂肪细胞原代细胞,并对前脂肪细胞进行诱导分化为成�
- 潘登科牟玉莲潘求真万荣刘吉张莉冯书堂
- 关键词：核移植绿色荧光蛋白转基因囊胚
- 丙酸调控肉牛肌内前脂肪细胞脂肪生成的机理
- 万荣
- 关键词：丙酸
