任莉
- 作品数：35 被引量：55H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点实验室开放基金更多>>
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- 昆明市静脉吸毒感染者HIV-1env基因C2-V4区序列特征分析被引量：3
- 2017年
- 目的分析昆明市静脉吸毒(intravenous drug user,IDU)感染者艾滋病病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)env基因C2-V4区序列特征及代表性广谱单克隆中和抗体(broadly monoclonal neutralizing antibodies,bm NAbs)的表位变异。方法在昆明市收集165份IDUHIV-1感染者血浆样品,提取RNA,通过逆转录得到cDNA,巢式聚合酶链反应(nested-polymerase chain reaction,nested-PCR)扩增HIV-1膜蛋白基因C2-V4区,应用Bio Edit和MEGA等生物信息软件分析所获得序列的特征,并分析2G12、PGT135、PGT128、b12和VRC01等bm NAbs的表位变异。结果 165条序列主要为CRF08_BC(74.55%)和CRF07_BC(23.03%)重组毒株,各可变环变异程度由小到大为V3区
- 邹森高占齐中伟任莉胡园园王铮洪坤学
- 关键词：人免疫缺陷病毒1型流行病学研究
- 人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体，本发明的中和抗体通过单个B细胞流式分选‑抗体基因扩增配对表达技术筛选获得，具有独特的CDR区域，能特异性与SARS‑COV‑2结合并且可以有效中和目前多株国际流行...
- 邵一鸣李丹王铮靳昌忠苏俊威任莉
- 文献传递
- 具有广谱中和活性的HIV感染者血浆病毒膜蛋白基因及中和特征分析被引量：3
- 2018年
- 目的分析一例具有广谱中和活性的慢性HIV感染者病毒膜蛋白(Env)基因序列特征及中和特征。方法使用单拷贝基因组扩增(SGA)方法从患者两个随访时间点血浆样本扩增env基因,测序后进行序列比对和进化树构建,分析env基因特征;将env基因克隆至pcDNA^(TM)3.1载体上,env质粒和骨架质粒pSG3△env共转染293T细胞制备假病毒,使用假病毒分别和两个时间点的自体血浆及6种不同的广谱中和抗体进行中和试验,分析Env蛋白的中和特征。结果从两个时间点血浆样本中共获得50个全长env基因,进化分析显示两个时间点序列各自聚集成簇,第1个时间点膜蛋白序列有较短的V1区和较少的V1区糖基化位点数目,第2个时间点膜蛋白序列有更高的基因多样性。自体血浆不能中和同时期的假病毒,但能中和前期的假病毒;两个时间点的假病毒对PGT121、PGT135、2G12和10E8抗体均高度敏感,但对VRC01及12A21抗体呈现中和抗性。结论该具有广谱中和活性的慢性HIV感染者病毒膜蛋白基因持续进化;感染者体内存在CD4bs类中和抗体的免疫压力。
- 张岱张岱邹森侯佳利侯佳利胡园园任莉洪坤学
- 关键词：膜蛋白中和抗体假病毒
- 1例慢性HIV-1感染者体内CD4结合位点特异性记忆B细胞分选及抗体表达研究
- 2016年
- 目的通过抗原特异性记忆B细胞(Memory B)分选、抗体基因克隆表达和鉴定方法,从艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者中获得HIV-1中和抗体,并进一步探讨获得抗体的特征。方法通过检测血浆中和抗体活性和表位筛选,挑选出1例含有CD4结合位点(CD4bs)特异性抗体的慢性HIV-1感染者。采用一对含有/缺失CD4-bs的探针RSC3/ΔRSC3进行Memory B分选,获得抗体可变区基因后进行抗体的表达纯化,并检验所得抗体的结合能力和中和能力。结果从9×106外周血单核淋巴细胞(PBMCs)中分离得6个特异性Memory B。通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出3对重链和轻链可变区基因,配对得到3个抗体,其中有一个抗体具有HIV-1CD4bs结合能力。中和实验表明,这个抗体能中和毒株SF162[50%抑制浓度(IC50=0.89μg/mL]。抗体可变区基因家系分析表明,该抗体属于IGHV1-18家系,重链可变区(VH)自体突变率为12%,低于广谱中和抗体VRC01VH的自体突变率(32%)。结论建立的单克隆特异性Memory B分选方法,可以获得有中和能力的抗体。该平台有希望获得具有我国自主知识产权的广谱中和抗体,并为开发抗体药物和设计新型免疫原提供技术支持。
- 李丹王铮任莉梁华洪坤学鞠斌王硕李亚峰邵一鸣
- 关键词：艾滋病病毒1型
- HIV-1B'亚型毒株感染者Nef蛋白氨基酸序列变异分析被引量：3
- 2015年
- 目的分析HIV-1 B’亚型毒株Nef蛋白重要功能区及CTL表位氨基酸序列变异特征。方法从137例HIV-1感染者的血浆样本中提取病毒RNA,进行逆转录获得c DNA,再经巢式PCR扩增全长Nef基因并纯化测序。利用Bio Edit、Mega6.0软件分析所获得的Nef基因重要功能区的氨基酸变异,并比较所获得的Nef基因共享序列与我国B亚型Nef共享序列及国际B亚型Nef共享序列的CTL表位情况。结果 HIV-1 B’亚型毒株Nef蛋白N端豆蔻酰化信号区、蛋白酶加工区、酸性区、Pak结合区、Pxx P区等功能区氨基酸序列较为保守,但有3个功能区中存在变异率大于30%的氨基酸位点,其中长度可变区的21号密码子上的R被E/K/Q取代的变异率达56.21%(R21E 24.09%,R21K 19.71%,R21Q 12.41%),COPI结合区EE154-155的E154被K取代的变异率为32.85%,双亮氨酸基序Exxx LL160-165的S163被C取代率为30.66%。本研究所得的137条Nef蛋白的共享序列的CTL表位与我国HIV-1 B亚型的共享序列CTL表位一致,而与国际B亚型共享序列相比有两个肽段表位的氨基酸发生了变异。结论 HIV-1 B’亚型毒株Nef蛋白多数重要功能区及CTL表位的氨基酸序列较保守,但有3个功能区存在变异率大于30%的氨基酸位点,这种特性可能影响病毒致病作用。
- 陈燕丽胡园园郝金娟任莉邵一鸣洪坤学
- 关键词：HIV-1NEF蛋白功能区CTL表位
- 中国HIV-1感染者中分离单克隆中和抗体的初步研究
- 2017年
- 目的从中国人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者中分离单克隆中和抗体,并对其生物活性进行初步鉴定。方法采用抗原特异性单个B细胞分选和单克隆抗体表达技术从感染者中分离单克隆抗体,采用免疫遗传学数据库(immunogenetics database,IMGT)分析抗体的可变区基因,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体的结合能力,采用TZM-bl/假病毒中和实验检测抗体的中和能力。结果从一个HIV-1CRF07_BC病毒感染者中分离到了两个单克隆抗体(A1和A6);两个抗体的重链来源于不同家系(IGHV5-51*01和IGHV4-59*01),轻链分别利用lambda链和kappa链,可变区基因的突变率较低;两个抗体与CRF01_AE、B亚型和CRF07_BC病毒的结合能力较强,可以中和Tier 1的SF162病毒(B亚型)和MW965病毒(C亚型),不能中和12个Tier 2的病毒(Global Panel)。结论本研究成功分离到了两个具有交叉反应性的单克隆中和抗体,丰富了HIV-1中和抗体的研究,也为艾滋病的抗原检测和治疗等应用领域提供备选的免疫制剂。
- 鞠斌李丹任莉郝彦玲张蕾王硕魏民邵一鸣
- 关键词：中和活性
- 人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体，本发明的中和抗体通过单个B细胞流式分选‑抗体基因扩增配对表达技术筛选获得，具有独特的CDR区域，能特异性与SARS‑COV‑2结合并且可以有效中和目前多株国际流行...
- 邵一鸣李丹王铮靳昌忠苏俊威任莉
- 利用单个B细胞分选方法获得HIV-1单克隆抗体基因及功能鉴定被引量：2
- 2018年
- 目的从人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）感染者中获得单克隆抗体基因及功能鉴定。方法单细胞流式分选得到抗原特异性单个B细胞，基因扩增和测序得到抗体可变区序列，BioEdit软件包中Sequence Identity Matrix程序分析基因序列一致性，免疫遗传学数据库分析抗体基因家系和突变率，酶联免疫吸附试验测定抗体结合能力，TZM-bl/假病毒试验检测抗体中和能力。结果从3个HIV-1感染者中分别获得了4个、7个和11个不同抗体的重链和轻链基因序列，其基因家系、CDR3长度和突变率广泛多样；验证了一个感染者的4个抗体基因序列，抗体A1和B3是HIV-1单克隆结合抗体，能同时与B亚型、CRF01_AE和CRF07_BC抗原蛋白结合；A1和B3也是HIV-1单克隆中和抗体，能够中和C亚型的MW965病毒，50%抑制浓度分别为0.04 μg/ml和37.34 μg/ml。结论本研究成功获得了大量的单克隆抗体基因，并对其中的部分序列进行了功能验证，为单克隆抗体的分离和鉴定等研究工作提供了基础。
- 鞠斌鞠斌郝彦玲李丹任莉梁华王硕侯佳利魏民
- 关键词：抗体基因中和活性
- HIV-1广谱中和活性感染者假病毒的中和表型分析被引量：2
- 2017年
- 目的分析HIV-1广谱中和活性感染者基于膜蛋白基因(env)的假病毒对自体血浆和代表性广谱单克隆中和抗体(bm NAbs)的中和表型。方法单基因组扩增(SGA)广谱中和活性感染者第0月血浆的env基因并克隆至pc D-NA^(TM)3.1 Directional TOPO表达载体,将env表达质粒与HIV-1骨架质粒p SG3△env共转染293T/17细胞制备假病毒,用假病毒分别与自体连续时间点血浆和代表性bm NAbs进行中和实验分析中和表型。结果共获得11株功能性假病毒,假病毒对8个连续时间点自体血浆的中和敏感性呈现先升高(第0~15月),后下降(第16~32月),之后再上升(第33~45月)的波动。所有假病毒对10E8、PGT121和VRC01中和敏感(IC_(50)<6μg/m L);各有18.2%(2株)的假病毒对12A21和2G12高度敏感(IC_(50)<1μg/m L);所有病毒均对PGT135呈中和抗性。结论假病毒对当前时间点血浆的中和敏感性低,对之后时间点血浆中和敏感性增强,提示感染者体内病毒与中和抗体的动态进化过程。同一时间点假病毒对特定bm-NAbs的敏感性差异明显,提示感染者准种毒株间中和表型的复杂性。
- 邹森张岱胡园园齐中伟侯佳利任莉邵一鸣洪坤学
- 关键词：HIV-1膜蛋白假病毒
- HIV-1gp140蛋白不同聚合体的纯化
- 2016年
- 目的对HIV-1 CN54膜蛋白gp140的不同聚合体进行纯化。方法将在哺乳动物细胞Free Style 293F中表达的gp140蛋白经过糖基化亲和层析、阴离子交换层析和凝胶排阻层析3种纯化方法进行分离,并对该纯化方法进行优化。采用ELISA方法检测不同结构抗原与广谱中和抗体的特异性反应。结果选择lentil lectin填料进行糖基化亲和层析,纯化的gp140蛋白为4.56 mg/L,得率为89.9%;选择弱阴离子填料DEAE用于阴离子交换层析,纯化的gp140蛋白为3.87 mg/L,得率为84.8%;凝胶排阻层析纯化获得了gp140蛋白的多聚体、三聚体+二聚体以及单体3种结构。不同结构的gp140蛋白可与CD4结合位点的广谱中和抗体VRC01以及结构依赖性的V3区特异性广谱中和抗体反应,具有较好的特异性,且不同聚合体在V3区结构依赖性抗体2G12的结合抗体反应上会存在一定差异。结论成功建立了HIV-1 gp140蛋白不同聚合体纯化的方法,该方法对于其他相似蛋白的纯化具有参考作用;不同结构的gp140蛋白的分离为进一步研究其免疫原性奠定了基础。
- 刘建东何彦平鞠斌孙红岩宋伟葛向阳任莉刘颖邵一鸣郝彦玲
- 关键词：HIV纯化
