倪吴花
- 作品数：49 被引量：222H指数：8
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- 发文基金：浙江省自然科学基金温州市科技局资助项目温州市科技计划项目更多>>
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- siRNA抑制SK-BR-3细胞株Her2/neu的表达及细胞增殖
- 2005年
- 目的研究siRNA(smallinterferingRNA)对乳腺癌SK-BR-3细胞株Her2/neu基因表达的抑制作用,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法体外合成两条针对Her2/neu基因的siRNA,转染SK-BR-3细胞株;分别应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法和流式细胞仪测定Her2/neu基因和蛋白的表达,并用MTT比色法测定细胞的增殖活性,AnnexinV检测细胞凋亡。结果两条siRNA分别使Her2/neu基因表达降低了42·88%、49·27%,蛋白表达降低了25·03%、56·59%。同时转染siRNA后细胞生长受到抑制,并发生细胞凋亡,凋亡率分别为28·51%、42·81%。结论siRNA可以有效抑制SK-BR-3细胞株中Her2/neu的表达,从而抑制细胞生长,并导致细胞凋亡。
- 蒋磊倪吴花吴建波李继承
- 关键词：SIRNAHER2/NEURNAI流式细胞术
- 子宫内膜骨桥蛋白和整合素αvβ3表达与IVF-ET反复种植失败的关系被引量：16
- 2011年
- 目的:检测骨桥蛋白(OPN)和整合素αvβ3在人子宫内膜的表达,并探讨它们与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)反复种植失败的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测35例反复种植失败患者(研究组)及35例正常妇女(对照组)各时期子宫内膜组织中OPN和整合素αvβ3的表达。结果:OPN在增殖晚期开始表达,整合素αvβ3则在分泌中期开始出现并表现为强表达,两者在分泌中、晚期的表达水平均较其余各期明显增加(P<0.05)。与对照组相比,两者在研究组种植窗期内膜的表达均明显减弱(P<0.05)。结论:OPN和整合素αvβ3在正常子宫内膜中协调表达且呈现明显周期依赖性,参与子宫内膜容受性的建立;两者在反复种植失败患者种植窗期内膜中的表达明显减弱,可能是引起种植失败的原因之一。
- 杨海燕倪吴花余蓉
- 关键词：骨桥蛋白整合素ΑVΒ3子宫内膜
- 高载量血清乙肝病毒DNA的乙肝携带者精浆和精子感染乙肝病毒的特征被引量：1
- 2012年
- 目的探讨高载量血清乙肝病毒核酸（HBVDNA）的乙肝携带者精浆和精子感染HBV的特征。方法选择男性乙肝大三阳携带者61例，根据血清HBVDNA数量级分为10e组和10’组，采用荧光定量PCR（FQ—PCR）法测定其精浆中的HBVDNA，用PCR法制备地高辛（Dig）标记的HBVDNA探针通过荧光原位杂交（FISH）技术检测精子中的HBVDNA。结果10^8组和10，组精浆HBVDNA的阳性率分别为90．3％和40．0％，差异有统计学意义（P〈0．01）；与HBVDNA探针杂交后精子细胞可见清晰的绿色荧光信号。10^8组和10^7组精子标本HBVDNA的阳性率分别为25．8％和1617％，差异无统计学意义（P〉0．05）；两组精浆HBVDNA的阳性率均明显高于精子标本HBVDNA的阳性率（均P〈0．05）。结论高载量血清HBVDNA的乙肝大三阳携带者的精浆HBVDNA阳性率与其血清HBVDNA载量密切相关．其精子HBVDNA的阳性率不受血清HBVDNA载量影响，但明显低于精浆HBVDNA的阳性率。
- 费前进黄学锋倪吴花李澄棣
- 关键词：精浆精子脱氧核糖核酸
- 精子染色质结构分析和染色质扩散试验检测精子DNA碎片的比较研究被引量：5
- 2014年
- 目的：探讨精子染色质结构分析（SCSA）和染色质扩散试验（SCD）对精子DNA碎片检测方法的比较及相关性分析。方法：本研究对134例男性不育症患者分别用SCSA和SCD方法进行精子DNA碎片检测，分析两种方法检测结果的相关性。将DNA碎片指数（DFI）分成3个等级组别（≤15％DFI、〉15～≤30％DFI和〉30％DFI），分别比较两种方法检测的结果差异。结果：SCSA方法与SCD方法对精子DNA碎片的分析结果具有明显的线性正相关性（r=0．915，P〈0．0001）。在〉15～≤30％DFI和〉30％DFI两组中．其两种方法分析结果无显著差异。而在≤15％DFI组中，采用SCD方法检测的DFI结果（13．50±4．82）明显高于SCSA方法检测结果（9．79±2．60）（P〈0．001）。结论：SCSA和SCD两种方法检测DNA碎片结果有较好的相关性。在D兀≤15％时。SCD检测结果明显高于SCSA检测结果。
- 倪吴花金建远杨旭费前进潘承双黄学锋
- 关键词：精子DNA碎片精子染色质结构分析
- 精子DNA碎片对辅助生殖技术治疗方式的影响被引量：8
- 2012年
- 目的探讨精子DNA碎片(SDF)对常规体外受精(IVF)和卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗方式的影响。方法选择235对夫妇的154个IVF和88个ICSI治疗周期,男方在女性配偶获卵日获取精液标本行精液常规分析和SDF检测,统计IVF和ICSI的胚胎结局:受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率和临床妊娠率。结果 IVF和ICSI周期的精子DNA碎片指数(DFI)分别为(17.4±10.4)%和(25.3±15.8)%,差异有统计学意义(P<0.01)。精子DFI≥24%时,ICSI周期的受精率、胚胎种植率和临床妊娠率显著高于IVF周期,差异有统计学意义(P均<0.05)。单因素分析时,精子DFI≥24%时的ICSI周期和IVF周期获得临床妊娠的优势比(OR)为3.85,95%可信区间(95%CD为1.40～10.59。纳入精液量、精子浓度、精子活动力(a+b)和女性配偶的年龄作为变量进行多因素分析时,DFI≥24%时的ICSI周期和IVF周期获得临床妊娠的OR为4.61(95%CI 1.09～19.57)。结论高SDF水平可影响辅助生殖技术(ART)的治疗方式,SDF水平较高时行IVF治疗的结局较差,此时应选择ICSI的治疗方法。
- 费前进金建远倪吴花黄学锋
- 关键词：精子常规体外受精卵胞浆内单精子注射
- siRNA沉默S100P基因对胰腺癌细胞的生长抑制作用被引量：1
- 2011年
- [目的]探讨小干扰RNA(siRNA)沉默S100P基因后对胰腺癌SW1990细胞株生长的影响。[方法]化学合成针对S100P基因的siRNA,用脂质体转染试剂将siRNA体外转染至人胰腺癌SW1990细胞中,48h后收集细胞,分别提取细胞总RNA和蛋白。用实时定量RT-PCR测定S100P基因mRNA水平的表达;免疫印迹测定S100P蛋白的表达;MTT法测定细胞的生长曲线。[结果]转染siRNA后,S100P基因在mRNA水平上表达减少了77%,蛋白表达降低了74%,均显著性低于对照组。siRNA-S100P明显抑制细胞生长。[结论]应用RNAi技术沉默S100P基因可以降低人胰腺癌SW1990细胞株中S100P表达,抑制细胞生长。
- 李文峰李刚倪吴花蒋磊吴式琇
- 关键词：S100PSIRNA胰腺肿瘤
- 重组CD_(13)单链抗体和蝎毒素多肽AGAP融合蛋白真核表达及对NB4细胞的靶向杀伤作用被引量：1
- 2008年
- 目的:本研究应用基因工程技术方法,构建含重组编码CD13单链抗体和蝎毒素镇痛抗肿瘤缬精甘肽(analgesic antitumoral peptide,AGAP)融合蛋白基因的表达载体,并研究CD13-AGAP融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4影响。方法:克隆东亚钳蝎活性肽AGAP的基因,插入真核表达载体pSecTag2/CD13/RFP,得到pSecTag2/CD13/AGAP重组真核表达载体。酶切及测序鉴定后,脂质体介导重组质粒转染293T细胞,通过RT-PCR和免疫印迹方法检测融合基因和蛋白的表达。纯化融合蛋白,作用NB4细胞,CCK8检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:酶切及测序结果证实pSecTag2/CD13/AGAP重组真核表达载体构建成功,转染293T细胞后,RT-PCR和免疫印迹方法结果证实重组质粒得到有效表达,并纯化真核表达融合蛋白CD13-AGAP对血液肿瘤CD13阳性白血病细胞NB4有一定的生长抑制作用,并且使细胞周期G1期阻滞,S期减少。结论:成功构建了融合蛋白真核表达载体pSecTag2/CD13/AGAP,并在293T细胞中成功表达,进一步证实融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4有杀伤作用。
- 倪吴花骆超俞康吴建波
- 关键词：东亚钳蝎融合蛋白
- 男性不育症患者精浆外泌体miR-202-5p水平变化及临床意义被引量：7
- 2020年
- 目的探讨男性不育症患者精浆外泌体微小RNA-202-5p(miR-202-5p)水平变化及其在男性生殖中的临床意义。方法选取于解放军东部战区总医院、江苏省中医院及温州医科大学附属第一医院就诊的男性不育症患者107例为研究对象,其中无精症患者53例,弱精症患者54例;另选取同期招募的53例正常生育的健康男性为对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测精浆外泌体miR-202-5p水平,分析其在男性不育症中的诊断价值及与精液参数的相关性,采用生物信息学分析软件预测其靶基因、相关通路及靶蛋白相互作用网络。结果与对照组比较,弱精症患者精浆外泌体miR-202-5p水平明显增加(P<0.05),无精症患者精浆外泌体miR-202-5p水平明显降低(P<0.05);无精症患者精浆外泌体miR-202-5p水平较弱精症患者明显降低(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,精浆外泌体miR-202-5p诊断弱精症的曲线下面积(AUC)为0.664,诊断无精症的AUC为0.785,对弱精症和无精症鉴别诊断的AUC为0.878。弱精症患者精浆外泌体miR-202-5p水平与a+b级前向运动精子比例呈负相关(r=-0.312,P<0.05),与不动精子比例呈正相关(r=0.308,P<0.05)。精浆外泌体miR-202-5p是弱精症和无精症发生的危险因素(P<0.05)。生物信息学分析发现,miR-202-5p的靶基因明显富集于生殖和精子功能密切相关的蛋白调控通路。结论男性不育症患者精浆外泌体miR-202-5p水平与正常生育的健康男性存在明显差异,且与精子活力密切相关,可能参与了男性不育症的发生、发展过程。
- 卞玉莹王成顾万建倪吴花张春妮
- 关键词：男性不育症弱精症无精症
- 精子DNA损伤、核蛋白组型转换与顶体酶活性及精液参数的相关性分析被引量：36
- 2012年
- 目的:探讨精子DNA损伤、精子核蛋白组型转换与顶体酶活性及精液参数的相关性。方法:收集535例精液标本,采用精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion,SCD)检测精子DNA损伤,并与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性和WHO手册(第4版)精液参数进行相关性分析。结果:精子DNA损伤与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性、精子浓度及前向运动精子这些指标之间比较均具有显著性差异(P<0.01);精子DNA损伤与年龄、核蛋白组型转换、精子浓度和D级精子比例之间呈显著正相关(P<0.01或P<0.05),而与顶体酶活性呈显著负相关(P<0.001),多元逐步回归分析显示年龄、精子浓度、D级精子比例、核蛋白组型转换及顶体酶活性是5个独立的相关变量。精子核蛋白组型转换、顶体酶活性、精子密度和前向运动精子这4个指标的异常率在精子DNA异常组(DFI≥30%)中均显著的高于正常组(DFI<30%)。结论:精子DNA损伤与精子核蛋白组型转换、顶体酶活性及WHO(第4版)精液各参数之间存在密切的联系,可能是评价精子质量的另一项重要的指标。
- 郑九嘉杨旭张李雅费前进潘承双倪吴花金建远黄学锋
- 关键词：顶体酶DNA损伤
- siRNA抑制SK-BR-3细胞株Her2／neu的表达及细胞增殖
- 目的研究siR2NA(small interfering RNA)对乳腺癌SK-BR-3细胞株Her2／neu基因表达的抑制作用,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法设计...
- 蒋磊李继承倪吴花吴建波
- 关键词：细胞株NEU细胞增殖SIRNA
- 文献传递
