刘晨
- 作品数：11 被引量：13H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨髓基质细胞介导的微环境对人肝癌细胞株SMMC-7721的作用以及机制研究
- 2013年
- 目的:探讨肿瘤微环境中人骨髓基质细胞HS-5对人肝癌细胞SMMC-7721的作用及机制。方法:采用HS-5细胞条件培养基(HS-5 cell-conditioned medium,HS-5-CM)处理肝癌细胞SMMC-7721,分别通过MTT、划痕和Transwell实验分析对SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭的影响;采用Transwell小室间接共培养SMMC-7721细胞与HS-5细胞,应用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)、ELISA或Western blotting分别测定SMMC-7721细胞中趋化因子CCL5及其受体CCR5的mRNA和蛋白表达;此外加入PI3K抑制剂LY294002后,通过Western blotting检测SMMC-7721细胞中PI3K-Akt通路的相关蛋白Akt及其磷酸化水平的变化,以及qRT-PCR和ELISA检测SMMC-7721细胞中CCL5的变化。结果:HS-5-CM可以促进SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭;间接共培养后,SMMC-7721细胞中CCL5及CCR5 mRNA和蛋白表达均有增高;PI3K抑制剂LY294002可有效抑制共培养后SMMC-7721细胞中PI3K-Akt通路的激活,并减少其CCL5的分泌。结论:HS-5细胞可以促进SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力;与HS-5细胞间接共培养,激活了肝癌细胞SMMC-7721的PI3K-Akt通路,从而增加SMMC-7721细胞的CCL5分泌。
- 白慧丽李宝林何方张汝益严树涓刘晨杨丹丹施琼
- 关键词：骨髓基质细胞SMMC-7721细胞微环境
- miR-30a抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化被引量：2
- 2013年
- 目的:确认miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-BMP9处理间充质干细胞C3H10T1/2,通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测早期成骨指标ALP、Western blot和PCR检测晚期成骨指标OPN,茜素红S染色检测钙盐沉积了解BMP9对C3H10T1/2细胞的成骨分化作用,同时用Real-time PCR检测miR-30a在该成骨分化中的变化。然后用BMP9条件培养基分别作用Ad-mmu-miR-30a和Ad-RFP预处理10h的C3H10T1/2细胞,检测早期成骨指标ALP、晚期成骨指标钙盐沉积和骨钙素OPN的表达。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中的可能作用机制。结果:Ad-BMP9处理C3H10T1/2细胞5d,7d后,ALP的活性的表达增高;第9d后,OPN的表达增加;第14d后,钙盐的沉积明显增多。而miR-30a过表达后,抑制了这一现象。同时发现过表达miR-30a后,Runx2蛋白水平较对照组下降而mRNA水平基本没有变化。结论:miR-30a可以抑制BMP9诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化,其作用机理可能和Runx2相关。
- 李宝林白慧丽张汝益严树涓何方杨丹丹刘晨施琼
- 关键词：成骨分化
- 长链非编码RNA CRNDE通过下调miR-136-5p表达并上调MCM5表达促进U937细胞增殖并抑制其凋亡被引量：1
- 2021年
- 目的 探究长链非编码RNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)对U937细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其作用机制。方法 首先通过基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库分析CRNDE在急性髓系白血病(AML)患者骨髓细胞中的表达水平;实时荧光定量PCR检测AML细胞系miR-136-5p、 CRNDE及微小染色体维持蛋白5(MCM5)的mRNA表达水平。构建敲低CRNDE的慢病毒载体并转染U937细胞,设为敲低CRNDE组(sh-CRNDE组)和阴性对照组(sh-NC组);分别转染miR-136-5p模拟物(miR-136-5p mimic)和miR-136-5p抑制物(miR-136-5p inhibitor)对U937细胞中的miR-136-5p进行过表达和敲低,设为miR-136-5p过表达组(miR-136-5p-mimic)、过表达阴性对照组(NC-mimic)、 miR-136-5p敲低组(miR-136-5p-inhibitor)和敲低阴性对照组(NC-inhibitor)。CCK-8法和细胞计数试验检测CRNDE和miR-136-5p对细胞增殖的影响,流式细胞术检测CRNDE和miR-136-5p对细胞周期和凋亡的影响。实时荧光定量PCR检测miR-136-5p、 CRNDE及MCM5的mRNA表达,Western blot法检测MCM5、 P53、 B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期蛋白A2(cyclin A2)的蛋白表达水平。结果 CRNDE在AML患者骨髓和细胞系中高表达。敲低CRNDE可以上调miR-136-5p,抑制MCM5 mRNA和蛋白表达,抑制细胞增殖,促进凋亡并使细胞周期阻滞在G1期。过表达miR-136-5p也可抑制MCM5核酸和蛋白水平表达。而敲低miR-136-5p则可以逆转以上作用。结论 CRNDE通过下调miR-136-5p和上调MCM5表达,进而促进U937细胞增殖并抑制其凋亡。
- 刘晨刘北忠刘北忠楚璇罗栩余莉华余莉华熊玲但文冉李健李健
- 关键词：急性髓系白血病
- SDF-1/CXCR4信号轴在BMP9介导间充质干细胞成骨分化过程中的作用研究
- 多能性间充质干细胞(MSCs)属于骨髓基质前体细胞，具有向成骨细胞、成软骨细胞、成脂细胞和成肌细胞分化的能力。前期体内外实验证实， BMP9为BMPs家族中诱导成骨分化能力最强的因子之一，但是BMP9诱导成骨分化过程中所...
- 刘晨
- 关键词：间充质干细胞成骨分化
- miR-450a腺病毒对体外培养小鼠早期胚胎发育的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨miR-450a腺病毒对体外培养小鼠早期胚胎发育的影响。方法取小鼠2、4、8细胞期胚胎,用含不同浓度miR-450a腺病毒(0.01、0.1、1 ng/ml)的M16培养液培养,并设不含miR-450a腺病毒的对照组。倒置显微镜观察胚胎发育情况,并计算2、4、8细胞期的胚胎发育率。结果 miR-450a腺病毒可明显抑制受精卵细胞的正常分裂,导致小鼠胚胎发育异常,且随着miR-450a腺病毒浓度的增加,胚胎发育率明显下降(P<0.05),在较高浓度miR-450a腺病毒培养过程中,有部分胚胎死亡、退化。结论 miR-450a腺病毒对体外培养的小鼠早期胚胎发育具有抑制作用,为胚胎发育异常的研究提供了新的思路。
- 杨丹丹刘晨蒋凤兵李宝林白慧丽施琼
- 关键词：腺病毒小鼠胚胎发育体外培养
- 下调CENP-E对乳腺癌MCF-7细胞的影响
- 2012年
- 目的:探讨有丝分裂检查点蛋白着丝粒蛋白-E(CENP-E)基因在肿瘤发生发展中的作用。方法:利用shRNA下调CENP-E基因的表达,分别用巢式PCR和Western blot检测CENP-E mRNA和蛋白的表达;MTT检测CENP-E下调后MCF-7细胞的增殖变化;流式细胞术检测CENP-E下调后对MCF-7细胞凋亡的影响;Transwell试验检测MCF-7细胞的迁移和侵袭能力变化;间接免疫荧光检测细胞内CENP-E蛋白和有丝分裂情况。结果:shRNA能有效抑制CENP-E mRNA和蛋白的表达。MTT结果显示CENP-E下调后MCF-7细胞的增殖能力减弱(P<0.05);流式细胞术显示下调CENP-E后能促进MCF-7细胞的凋亡;间接荧光结果显示CENP-E干扰后MCF-7细胞内CENP-E蛋白减少并伴有核分裂异常;Transwell试验显示CENP-E干扰组细胞的迁移和侵袭能力增强(P<0.05)。结论:下调部分CENP-E的表达能抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞的凋亡,增强MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。
- 湛晓琴胡敏宋培培章帆刘晨施琼翁亚光
- 关键词：非整倍体CENP-E肿瘤
- 长链非编码RNA CRNDE通过ceRNA模式调控急性髓系白血病的机制研究
- 目的： 探讨在急性髓系白血病（acutemyeloidleukemia，AML）中结直肠肿瘤差异表达基因（colorectalneoplasiadifferentiallyexpressed，CRNDE）的表达情况以及...
- 刘晨
- 关键词：急性髓系白血病长链非编码RNA细胞增殖细胞周期
- 文献传递
- 实验诊断学教学改革探讨被引量：5
- 2011年
- 以检验的临床应用为目的,结合临床优化教学内容,拓展思路丰富教学方法,联系实际改革实验教学,以更好地促进实验诊断学的教学,培养具有创新精神和开拓能力的临床医学高级人才。
- 施琼刘晨蒋凤兵
- 关键词：实验诊断学教学改革教学方法
- 腺病毒介导的BMP9过表达抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖与迁移被引量：1
- 2013年
- 目的探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)过表达对人骨肉瘤细胞系143B的生物学行为的影响。方法用RT-PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞系中BMP9的内源性表达,用表达BMP9的腺病毒重组体(adBMP9)感染内源性表达BMP9相对较低的骨肉瘤细胞系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕愈合实验检测细胞迁移,MTT法和结晶紫染色法检测细胞的增殖,Hoechst 33258染色法检测凋亡,平板集落形成实验检测集落形成能力。结果 adBMP9可以明显减弱骨肉瘤细胞系143B的增殖、迁移、侵袭及集落形成能力(P<0.05),并促进细胞凋亡。结论 adBMP9能抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖和迁移,促进细胞凋亡。
- 杨丹丹刘晨白慧丽李宝林何方张汝益施琼
- 关键词：骨肉瘤生物学效应
- MicroRNA-450a-3p通过抑制Bub1基因的表达调控小鼠细胞增殖和胚胎发育
- 2012年
- 目的:探讨microRNA-450a-3p(miR-450a-3p)对小鼠细胞增殖和胚胎发育的调控是否通过抑制Bub1基因的表达实现。方法:用萤光素酶报告基因实验检测miR-450a-3p能否特异性结合于Bub1基因的3’-非翻译区(untranslated region,UTR);用Western blotting和实时荧光定量RT-PCR检测miR-450a-3p对Bub1蛋白和mRNA表达;分别通过MTT、Hoechst染色、流式细胞术等分析miR-450a-3p对小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)增殖、凋亡和细胞周期等生物学功能的调控;利用染色体核型分析技术检测miR-450a-3p对MEFs染色体数目的影响。结果:miR-450a-3p能与靶基因Bub1的3’-UTR结合,在翻译水平抑制MEFs中Bub1的表达,然而其转录水平的表达却不受影响。miR-450a-3p通过下调靶基因Bub1的表达,抑制MEFs的增殖,促进细胞的凋亡;而且miR-450a-3p还能使大多数细胞停滞在G1/G0期,使细胞分裂受阻,导致细胞染色体数目异常。结论:miR-450a-3p能够调控靶基因Bub1的表达,抑制MEFs增殖,并最终影响小鼠胚胎的发育。
- 刘晨杨丹丹蒋凤兵白慧丽李宝林罗敏湛晓琴施琼
- 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞胚胎
