刘金花
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：武汉大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白的亚细胞定位
- 刘金花
- 关键词：人乳头瘤病毒16型变异株亚细胞定位核定位信号激光扫描共聚焦显微镜
- 人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及其亚细胞定位
- 宫颈癌(cervical carcinoma,CC)是全球妇女中最常见的恶性肿瘤之一,仅次于乳腺癌而居于第二位。全球每年约有50万新发病例,25万人死亡,其中大部分在发展中国家,占 80%左右。据不完全统计,我国每年有宫...
- 刘金花伍欣星
- 关键词：人乳头瘤病毒亚细胞定位激光共聚焦
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒16 E7基因的原核表达及表达条件的优化被引量：2
- 2006年
- 目的:构建pET-28a(+)-HPV16 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPV16E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPV16 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测对重组质粒DNA进行鉴定,将其转入宿主菌E.coliBL21(DE 3)进行诱导以表达蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性。优化诱导表达的条件,如温度、IPTG浓度、适用的培养基,探讨不同温度下蛋白的表达形式;纯化回收HPV16 E7蛋白。结果:PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因,其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确;HPV16 E7(标准株)蛋白得到高效原核表达,最佳表达条件:表达HPV16 E7的工程菌BL21(DE 3)的最佳诱导温度是37℃,诱导剂IPTG的浓度为0.3-0.4 mmol/L,最佳培养基为1.5倍LB。结论:pET-28a(+)-HPV16 E7标准株和湖北株重组载体构建成功,人乳头瘤病毒16 E7标准株获得高效原核表达。
- 许蓓妮刘金花彭敏解庭波朱丽琴伍欣星吴承龙
- 关键词：HPV16E7基因原核表达
- BLCAP蛋白多克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定
- 2007年
- 目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达BLCAP融合蛋白并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:构建原核表达重组质粒pET32a(+)-BLCAP并转化到宿主菌BL21中,诱导表达带有His标签的目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收后免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性和亲和性。结果:成功获得分子质量约为28 kU纯化的融合蛋白,免疫日本大耳白兔后得到抗BLCAP的多克隆抗体。ELISA测定显示抗体效价可达到1∶10 000。通过Western blot检测证明该抗体有较好的针对BLCAP蛋白的专一性。结论:重组质粒表达的BLCAP融合蛋白具有良好的抗原性。制备的特异性和效价良好的抗BLCAP的多克隆抗体,能够满足针对BLCAP免疫印迹和细胞免疫组化检测等实验要求,为今后深入研究BLCAP蛋白性质与功能提供了有用的实验工具。
- 俞娟解庭波刘金花姚军赵旻伍欣星
- 关键词：多克隆抗体
- 人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位被引量：1
- 2007年
- 目的构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)-人乳头瘤病毒16型变异株E7(HPV16-HBE7)重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP-C1表达载体上,用脂质体法导入宫颈癌细胞中;West-ern印迹检测HBE7蛋白的表达;同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术,采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定,其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确;结果表明,转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核;各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主,绿色荧光密集点状分布于细胞浆内,而野生株E7(WE7)蛋白分布在核内。结论人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内,以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关。
- 刘金花俞娟许蓓妮姚军左泽华赵旻伍欣星
- 关键词：人乳头瘤病毒亚细胞定位核定位信号激光共聚焦
