吕士恩 作品数:11 被引量:138 H指数:7 供职机构: 山东农业大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中国烟草总公司科技项目 山东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
翻译和非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白基因介导的抗病性比较 被引量:44 2001年 利用RT PCR方法克隆获得马铃薯Y病毒烟草叶脉坏死株系 (PVYN)的可翻译和不可翻译外壳蛋白 (CP)基因 ,并分别插入 pROKⅡ质粒中获得重组双元表达载体。通过根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens) 介导的基因转化方法 ,将可翻译和不可翻译的PVYN CP基因分别导入烟草栽培品种NC89叶片组织中 ,得到抗卡那霉素的再生植株。对所得到的抗卡那霉素的再生苗进行PCR检测表明 ,被导入可翻译和不可翻译CP基因的植株分别占卡那霉素抗性植株的 95 %和 98%。攻毒实验表明 ,两种类型的转基因烟草对PVYN 的抗病性具有相似性 ,其表现型为 :免疫、抗病和感病。免疫型转基因植株的抗病性不受接种物类型及其剂量的影响。Southern印迹杂交结果显示 ,目的基因已经整合到烟草基因组中。Northern印迹杂交证明 ,两种类型的CP基因都已在RNA水平上得到了表达 ,但细胞内RNA的积累量与转基因植株的抗病强度成负相关。Western印迹杂交表明 ,在表达不可翻译PVYN CP基因的转基因植株内未检测到CP蛋白 ,而在导入可翻译的PVYN CP基因的植株内检测到了CP蛋白 ,且CP蛋白含量与抗病性不存在正相关。本研究结果证明 ,表达可翻译与不可翻译PVYN CP基因的转基因烟草对PVYN 的抗病性均为RNA介导的抗病性。 郭兴启 温孚江 宋云枝 孟祥兵 吕士恩 郑成超 朱常香关键词:马铃薯Y病毒 外壳蛋白基因 RNA介导 抗病性 翻译 山东省棉花主要病害的发生现状与防治 被引量:3 1997年 山东省棉花病害种类共有19种,根据其发病部位和时期等特点,习惯上分为四大类:苗期病害,枯黄萎病、铃部病害和叶部病害,其中危害性最大的是棉花枯萎病和黄萎病。某些年份,立枯病、黑斑病和铃疫病也能引起较大的损失。种植抗病品种是防治棉花病害、特别是枯黄萎病,最安全、经济、有效的措施。合理的农业耕作措施。 吕士恩 王慧关键词:棉花 病害 病害防治 酶标记羊抗兔间接法检测烟草马铃薯Y病毒的研究 被引量:11 1998年 本文是对辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG间接法检测浸染烟草的马铃薯Y病毒(PVY)的报导。试验证明该方法检测烟草植株内的PVY具有特异性,健株对照及非PVY病毒均为阴性,检测烟草植株汁液的稀释度可达1/1000,在我们的测试条件下,第一抗血清浓度1/2000,测试抗血清(酶标记羊抗兔)浓度1/140为好。 郭兴启 朱汉城 吕士恩 王智发 陈瑞泰关键词:马铃薯Y病毒 酶联免疫吸附试验 烟草赤星病菌孢子萌发和侵染条件的研究 被引量:3 1993年 用烟草赤星病菌两个菌株进行测定,孢子在烟草叶面萌发能力最强;其次是在1%的葡萄糖溶液中;在蒸馏水中萌发最弱。在侵染试验中,用丙酮和70%酒精清洗的幼苗叶片发病加重;露天放置的烟苗较生长在温室内的烟苗发病重。在3种接种方法中,以孢子悬滴法效果最好。侵染和接种方法中的幼苗,其叶面微生物在种类和数量上均以处理的不同而有差别。 董汉松 曲建军 吕士恩 孙明业 王智发关键词:烟草 赤星病菌 孢子萌发 侵染 西瓜枯萎病菌致病力的测定 被引量:12 1990年 自1985~1988年,采集三个地区西瓜枯萎病田内发病程度不同的病株567株,经分离、接种、再分离,确定为西瓜枯萎病致病菌后,经单孢分离,选取30个单孢菌系,用其培养滤液浸苗,以其不同致萎程度,区分病菌毒力的强弱。用盆栽土壤接种作生物测定对比,验证毒素滤液浸苗的效果。试验表明:由毒素滤液浸苗法划分的致病力强、中、弱三种类型,与盆栽土壤接种法结果近似,证明可以利用病菌毒素滤液浸苗法,作为病菌毒力测定方法之一。 周凯南 张立修 吕士恩 陈金锋 廖玉刚关键词:西瓜 枯萎病 致病力 单孢分离 利用RNA介导的抗病性获得高度抗马铃薯Y病毒的转基因烟草 被引量:49 2001年 以马铃薯 Y病毒坏死株系 (PVYN)的 RNA为模板 ,应用反转录 -聚合酶链式反应 (RT- PCR)方法 ,扩增出长度为 80 1bp的非翻译的马铃薯 Y病毒外壳蛋白基因。将扩增的片段克隆到 p BSK的Bam HI和 Kpn I之间并进行了序列测定。用 Bam HI和 Kpn I从重组克隆载体上切下该基因并插入到质粒 p ROKII内得到植物表达载体 p PVYCP。通过根癌农杆菌 (LBA4 40 4 )介导的方法转化烟草NC89,经卡那霉素抗性筛选、PCR和 Southern blot检测 ,获得 82株转基因植株。 Northern blot和Western blot分析表明 ,转基因植株只在 RNA水平上得到了表达。抗病性试验表明转基因植株之间抗性水平存在着差异 ,其中有 7株是对 PVYN高度抗病性的植株。转基因植株抗病特异性试验初步表明 ,对 PVYN 表现高度抗病的植株对 PVYO 也具有高度抗病性。 郭兴启 吕士恩 朱常香 宋云枝 孟祥兵 郑成超 温孚江关键词:RNA介导 病毒抗性 马铃薯Y病毒 转基因烟草 棉花根部对枯萎病抗性的研究 吕士恩几种植物致病镰刀菌毒素滤液的生物测定 被引量:13 1989年 于1985—1986年采集了西瓜枯萎病菌(F. Oxysporum f. sp. niveum)等8种致病镰刀菌,经分离、接种、再分离、纯化,获得纯培养,经鉴别培养基鉴别后,又对几种尖孢菌进行交互接种试验,证明其为不同专化型。分别做液体振荡培养,用毒素滤液漫苗法,观察幼苗的病状表现,从而确定毒素的有无。结果证明,西瓜枯萎病菌等六种致病镰刀菌均能产生毒素。 周凯南 张立修 吕士恩 巩风田关键词:镰刀菌 专化型 培养基 烟草上马铃薯Y病毒的提纯与检测 被引量:11 1999年 本文是关于制备马铃薯Y病毒抗血清及ELISA检测技术的实验结果。采用垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯PVY,纯化的PVYOD260/OD280为1.56,将提纯的病毒制品免疫家兔,制备抗血清,经微量沉淀及环状沉淀试验,用提纯病毒测定抗血清的效价均为1/2048,并对制备的PVY—IgG作灵敏度及特异性测定。 郭兴启 吕士恩 朱汉城 王智发 陈瑞泰关键词:马铃薯Y病毒 提纯 ELISA 烟草 病毒 植物致病镰刀菌毒素滤液浸苗鉴定作物苗期抗病性 被引量:17 1989年 1986~1987年用病菌毒紊滤液浸苗法,测定西瓜、黄瓜等作物不同品种的苗期抗病性,用盆栽土壤接种作对照。两种试验方法结果基本一致。因此认为,利用病菌毒素滤液测定作物品种的苗期抗病性是可行的,在抗病品种的选育中,可应用于大量杂交后代的初筛工作。试验还看出农家品种一般较抗病。 周凯南 张立修 吕士恩 巩风田关键词:镰刀菌 毒素 滤液 抗病性