孙在利
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- 高温致体外大鼠睾丸支持细胞凋亡的初步研究被引量：1
- 2013年
- 目的通过观察高温对体外大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响，探讨高温在男性生殖功能降低或不育中的作用机制。方法分离培养大鼠睾丸支持细胞（Sertoli cell，SC）并鉴定。实验分为实验组（39℃下培养2h、4h、8h、12h及24h）和对照组（36℃）。CCK-8法检测SC增殖活性，流式细胞仪检测SC凋亡率，RT-PCR检测Fas／Fasl及Bax／Bcl-2基因转录水平。结果本实验中，SC纯度达到96．15％；随高温时间的延长，SC增殖活性逐渐降低（P〈0．05）；凋亡率呈现先升高后降低的趋势，在高温作用下8h凋亡率最高（P〈0．05）；Fas、Fasl、Bax基因转录水平逐渐升高（P〈0．05），Bcl-2基因转录水平逐渐下降（P〈0．01），且呈时间效应依赖关系。结论高温导致SC增殖能力降低，并可能通过“死亡受体”和“线粒体”两条信号传导途径导致SC凋亡，破坏生精微环境，进而导致男性生殖功能降低甚至不育。
- 孙在利王沛涛李强王洪强刘相萍王新生
- 关键词：高温支持细胞细胞凋亡
- 高温对原代支持细胞增殖能力和occludin紧密连接蛋白的影响(英文)
- 2013年
- 目的:研究高温对原代大鼠睾丸支持细胞增殖作用和对紧密连接蛋白的损伤机制。方法:体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),免疫组化FasL鉴定。实验分为对照组(36℃)和实验组(37℃、38℃、39℃)。在相应的温度下培养5d后,CCK-8法检测SC增殖作用,Western印迹法检测OCLN表达水平。结果:体外培养SC的纯度>90%,CCK-8结果显示,细胞增殖活性在36℃时最强,37～39℃时逐渐降低;Western印迹显示,36℃时OCLN表达量最高;高于36℃时,OCLN表达量随着温度的增加而降低(P<0.05)。结论:高温影响SC增殖活性,破坏了支持细胞紧密连接蛋白的正常表达和血睾屏障的完整性,从而影响正常精子的形成。
- 胡建听王沛涛孙在利李小朋王新生
- 关键词：高温支持细胞紧密连接蛋白精子发生
- 不同温度下体外大鼠睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子的表达被引量：6
- 2014年
- 目的:通过观察不同温度下体外大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)表达特点,探讨高温致不育的机制。方法:采用组合酶消化法和选择性贴壁法分离雄性Wistar大鼠睾丸SC,将分离的SC分别置于不同温度进行体外培养,观察其贴壁、形态学变化,FasL免疫组化鉴定。实验分为对照组(35℃)、实验组(36℃、37℃、38℃、39℃)。CCK-8法检测SC增殖情况,HE染色观察细胞形态及结构,RTPCR、免疫荧光及Western印迹检测细胞GDNF的表达。结果:本实验条件下,体外分离培养SC纯度=(95.30±2.15)%(n=10),CCK-8实验结果显示,36℃时细胞增殖率最高(P<0.01),>36℃时,随着温度的提高,增殖率逐渐降低,39℃对细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01);免疫荧光结果显示,GDNF表达于SC胞质,36℃时荧光最强,RT-PCR及Western印迹检测结果显示,高于36℃时,GDNF mRNA及蛋白的表达随着温度的增加而降低,36℃、37℃、38℃、39℃4组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:不同温度下,体外培养SC的增殖能力和GDNF表达明显不同。>36℃时,随着温度的提高,增殖能力受到抑制,GDNF表达水平显著降低。本研究结果证实,高温下大鼠睾丸SC正常功能受到抑制,从而影响生精功能。
- 赵吉存孙在利李小鹏曹廷帅胡建听王洪强刘湘萍王沛涛
- 关键词：温度支持细胞胶质细胞源性神经生长因子
