廖娟红 作品数:26 被引量:211 H指数:4 供职机构: 中国检验检疫科学研究院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项资金 国家科技重大专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
奶牛白细胞黏附缺陷症焦磷酸测序检测方法 本发明涉及奶牛白细胞黏附缺陷症(BLAD)的检测方法,特别涉及一种奶牛白细胞黏附缺陷症焦磷酸测序(Pyrosequcing)检测方法。主要是根据Genbank已发表的BLAD CD18序列,设计针对SNP位点的特异性PC... 贾广乐 周莉 廖娟红 林祥梅肉牛传染性牛支原体肺炎流行的诊断 被引量:141 2008年 采用多种诊断方法,对2008年以来湖北省多个地区新引进育肥肉牛呼吸道传染病进行了病原学研究。患牛病理变化主要集中在肺部,轻者可见肺局部肉样变,严重者可见肺广泛分布干酪样或化脓性坏死灶。将肺坏死组织制作石蜡切片,显微镜观察发现,肺组织表现为坏死性肺炎,未见典型的结核结节。实验室病原检测项目包括:支原体培养鉴定,PCR检测与目的基因测序鉴定;细菌分离鉴定;牛结核检测;泰勒虫血涂片检测与PCR检测等。最终确定该新发呼吸道传染病为牛支原体(Mycoplasma bovis)肺炎。同时,环形泰勒虫混合感染与细菌继发感染率很高,使病情复杂化。通过药敏试验发现,不同牛场分离的牛支原体最敏感药物为环丙沙星,其次为左氟沙星、四环素。文中还对该病的综合防治提供了合理的建议。 石磊 龚瑞 尹争艳 周勇 裴洁 胡智斌 王利霞 胡长敏 刘涛 陈颖钰 廖娟红 赵俊龙 陈焕春 郭爱珍关键词:牛支原体 肺炎 小鼠髓源未成熟树突状细胞的分离与培养 被引量:4 2013年 本试验旨在建立一种体外诱导培养小鼠未成熟树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法。应用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rGM-CSF)在体外诱导小鼠骨髓前体细胞分化为未成熟树突状细胞,进行形态学观察、细胞表型分析、刺激T细胞增殖等方法,对小鼠髓源未成熟树突状细胞的体外诱导培养进行鉴定。试验结果显示,小鼠骨髓来源的DC在体外培养8d后,特异性细胞表面标志CD11c的表达量达到81.09%,中度表达MHCⅡ,低表达CD40、CD80、CD86。本试验成功地建立了体外小鼠髓源DC扩增的方法。 廖娟红 林祥梅 贾广乐关键词:小鼠 树突状细胞 骨髓 贝氏柯克斯体外膜蛋白H(OmpH)原核表达载体的构建与鉴定 2014年 本试验旨在构建贝氏柯克斯体外膜蛋白H(outer membrance protein H,OmpH)的重组表达载体并分析该蛋白的免疫原性,以贝氏柯克斯体九里株为模板,通过PCR方法扩增出含798bp的贝氏柯克斯体的OmpH基因片段,并将其克隆至原核表达载体pQE-30,得到重组表达质粒pQE-30/OmpH。经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果发现,该重组蛋白大小约为25ku。Western blotting试验结果显示,该方法所诱导产生的重组蛋白具有良好反应原性。 乔海燕 贾广乐 林祥梅 张映 廖娟红关键词:贝氏柯克斯体 原核表达 免疫原性 Q热贝氏柯克斯体环介导等温扩增实时浊度检测法的建立 被引量:1 2013年 根据Q热贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)插入序列IS1111序列设计1套特异性引物,建立快速检测Q热的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)实时浊度检测方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,在恒温反应条件下,对靶基因的特定区域进行扩增,建立LAMP检测方法。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒,而对结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏杆菌(Brucella.spp)及部分牛血液的核酸样本的特异性检测结果均为阴性,无交叉反应。本研究建立的LAMP实时浊度检测方法灵敏度高、特异性好,在Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。 贾广乐 徐丽丽 廖娟红关键词:Q热 贝氏柯克斯体 环介导等温扩增 奶牛白细胞黏附缺陷症HRM检测方法的建立及应用 被引量:3 2013年 根据GenBank中奶牛白细胞黏附缺陷症(BLAD)CD18序列设计引物,进行PCR扩增后纯化产物,构建A/A型、A/G型和G/G型3种标准质粒,用标准质粒建立HRM检测方法。用建立的方法对300份奶牛血液样品进行检测,将其结果与Sanger测序结果进行对比,分析和验证检测结果的准确性。结果显示,样品中A/A基因型检出294例,占总体的98%;A/G基因型检出6例,占总体的2%,且两种检测方法的结果一致。结果表明,HRM检测BLAD具有简便快速、特异和灵敏等优点,可作为BLAD携带者突变筛查的优选方法。 贾广乐 周莉 林祥梅 廖娟红一种应用Rv3872新型融合蛋白制备的牛结核抗体鉴别检测试纸条 本发明属于动物传染病基因工程技术领域。公开了一种利用RV3872、ESAT6和CFP10三基因融合蛋白制备的检测牛结核抗体的免疫胶体金试纸条及制备方法与应用。以融合蛋白作为胶体金标记抗原和硝酸纤维素膜上检测区的捕获抗原建... 郭爱珍 于清龙 刘冬光 涂玲玲 陈颖钰 廖娟红 凌洁玉 陈焕春文献传递 三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白及制备方法 本发明属于微生物基因工程技术领域。具体涉及一种三基因融合的重组牛结核特异性抗原蛋白其及制备方法。该牛结核特异性融合抗原蛋白的基因,具有如序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列和氨基酸序列。公开了一株能够表达牛结核特... 郭爱珍 刘冬光 曹莎 陈颖钰 廖娟红 于清龙 凌洁玉 陈焕春文献传递 布鲁菌OMP28蛋白的原核表达与间接ELISA方法的建立 被引量:5 2014年 对布鲁菌Omp28基因进行大肠埃希菌表达,用表达的布鲁菌重组蛋白Omp28作为抗原包被酶标板,建立检测布鲁菌抗体间接ELISA方法,进一步研发试剂盒,用该试剂盒和IDEXX抗体检测试剂盒同时对540份临床牛血清样品进行检测,评价二者的符合率。反应条件优化后,该试剂盒的抗原包被浓度为1μg/mL,作用条件为37℃1h;封闭液为50g/L脱脂乳,作用时间为30min;血清稀释度为1∶200,作用时间为30min;酶标二抗稀释度为1∶3×104,作用时间为30min;与IDEXX抗体检测试剂盒的符合率达96.67%,证明该试剂盒可用于临床牛布鲁菌抗体的检测。 张小娟 贾广乐 廖娟红 梅琳 王慧煜 李桂兰 张映 韩雪清关键词:布鲁菌 间接ELISA 试剂盒 贝氏柯克斯体精氨酸受体基因的原核表达及免疫原性分析 2014年 构建贝氏柯克斯体精氨酸受体(argR)的重组表达载体并分析该重组蛋白的免疫原性。应用PCR方法,以贝氏柯克斯体九里株为模板,扩增出含734bp的精氨酸受体目的基因片段,并将其克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,得到重组表达质粒pGEX-6p/argR,经IPTG诱导表达后产生ArgR重组蛋白,SDSPAGE分析该蛋白大小约为25ku,Western blot结果显示,表达的重组蛋白有着良好的免疫原性。用argR免疫小鼠,能诱发特异性抗体的产生,说明该原核表达蛋白具有良好的免疫原性。 廖娟红 贾广乐 乔海燕 林祥梅关键词:贝氏柯克斯体 原核表达 免疫原性