张瑾
- 作品数：50 被引量：133H指数：7
- 供职机构：中国海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学经济管理更多>>
- 朊病毒病实验室检测质量控制特点分析
- 2014年
- 目的分析朊病毒病重要实验室检测技术的质量控制环节,提高朊病毒病实验室诊断质量水平。方法从朊病毒常见检测方法,如脑组织的PrPSc免疫组化、脑组织的PrPSc的Western blot检测、脑脊液中14-3-3蛋白的Western blot检测以及血液样本中PRNP的基因检测技术等方面分析朊病毒病实验室诊断的质量控制要求。结果实验室检测过程质量控制是朊病毒检测结果准确与否的关键,有效蛋白酶K消化的时间和浓度是脑组织PrPSc的Western blot检测结果的保证,脑组织PrPSc的有效暴露和PrPC的去除是朊病毒病脑组织IHC检测的核心环节,脑脊液的质量是14-3-3Western blot检测的质量控制点,防止核酸污染是血液的PRNP序列测定的质量检测控制的关键。结论通过分析实验室检测的质量控制关键环节和控制措施,可有效加强朊病毒病实验室质量管理,提高朊病毒病实验室检测能力。
- 周伟张瑾陈操高晨石琦田婵张保云韩俊
- 关键词：朊病毒实验室
- 海参全营养酒及其制作方法
- 本发明提供了一种海参全营养酒及其制作方法，海参全营养酒以海参全营养液为添加剂，与发酵制取的原浆白酒酒基配制而成，其中海参全营养液在海参全营养酒中的重量百分数范围为5％～40％，该酒中含有海参粘多糖低聚糖、海参蛋白活性肽、...
- 薛长湖薛勇王静凤李兆杰盛文静董平王玉明张瑾
- 文献传递
- 膜蛋白Flotillin-1与细胞膜PrPC内吞相关性研究被引量：1
- 2012年
- 目的研究膜蛋白Flotillin-1是否与PrP。蛋白内吞相关。方法利用免疫印迹法观察不同细胞株中Flotillin-1表达情况；利用免疫共沉淀的方法，检测Flotillin-1和PrPc蛋白在Cu2＋存在条件下相互作用的情况。结果①免疫印迹法显示Flotillin-1在多种细胞株中均有表达，且表达量没有明显差别；②免疫共沉淀实验（IP）结果提示在cu2＋处理条件下细胞中有PrPc与Flotillin-1蛋白复合体的形成，并且与cu2＋浓度以及cu2＋处理时间相关；结论膜蛋白Flotillin-1与细胞膜PrPc内吞过程存在相关性。
- 任科王轲许尹李龙珠张瑾王荟燕玉娥董小平高晨
- 关键词：朊病毒铜
- 帕金森病相关蛋白α-共核蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备被引量：1
- 2006年
- 目的利用分子克隆技术在原核细胞中表达α-共核蛋白(SNCP),并制备兔多克隆抗体。方法从人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA。利用PCR技术扩增获得SNCP的cDNA序列,测序正确后克隆至pQE-30-GST表达载体上,在大肠埃希菌中表达GST-SNCP融合蛋白。融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,制备特异性抗血清,并对该抗体进行检测。结果琼脂糖凝胶电泳显示获得的SNCP cD-NA序列为420 bp。SDS-PAGE和W estern b lot分析,表达的融合蛋白呈可溶性,相对分子质量约为45 000。以其为抗原制备的SNCP抗血清的ELISA效价达到1:32000,并且该抗体可与BALB/c小鼠脑组织中内源性SNCP发生特异性反应。结论人SNCP可在原核细胞中可溶性表达。用表达的蛋白制备获得特异性较好的SNCP抗血清,为进一步了解SCNP的结构和功能以及在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础。
- 黄银霞韩俊张晓光姚海兰王小凡张瑾张宝云董小平
- 关键词：Α-共核蛋白神经退行性变原核表达抗体制备
- 一种新的PrP无细胞构象转化系统的建立
- 2005年
- PrP细胞外构象转化系统已经被一些实验室用于朊病毒的研究,但在反应体系中往往需要使用放射性同位素。为了建立一种安全方便的PrP无细胞构象转化系统用于TSE发病机制的研究,通过PCR方法获得仓鼠PrP(HaPrP)全长基因,克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌中表达并纯化出分子量为27kDHaPrP蛋白,Westernblot证实可与PrP特异性单克隆抗体反应。将纯化蛋白在体外标记生物素(Biotin-7-NHS),与纯化的scrapie263K毒株仓鼠感染脑组织PrPSc蛋白共同孵育4天后,经蛋白酶K消化,Westernblot检测,证明存在一条抵抗蛋白酶K消化的、被亲和素特异性识别的条带,其分子量约为20kD。这表明HaPrPsen可以被转化为HaPrPres。实验表明,可以利用原核系统取代真核系统表达PrP,并用生物素标记取代35S标记纯化蛋白,建立一个更加安全方便的无细胞构象转化系统,用于朊病毒的研究。
- 张瑾王小凡高建梅李锋韩俊陈岚张宝云周伟刘勇董小平
- 关键词：PRP原核表达生物素标记
- 朊蛋白突变体D178N在RT—QuIC实验中的转化研究
- 2012年
- 目的利用RT—QuIC研究带有D178N突变的朊蛋白的自我转化能力。方法以带有人PRNP基因的质粒为模板，通过定点突变，构建了带有D178N突变的人PRNP基因，利用原核表达系统表达并纯化了带有N端及N端缺失的D178N朊蛋白。分别将此蛋白作为底物，利用RT—QuIC体外纤维形成实时监测系统，对各种突变蛋白体外纤维形成进行了观察和比较，并对形成纤维蛋白的蛋白酶抗性进行了初步分析和比较。结果正确构建了D178N突变的PRNP基因；在RT—QuIC的反应条件下，缺失N端的带有D178N突变的人朊蛋白，即使在不存在PrP5c种子的情况下，在体外也能够发生自我转化，且形成的纤维具有蛋白酶抗性；而带有N端的D178N突变的朊蛋白，在RT-QuIC的反应条件下不发生自我转化。结论朊蛋白N端对D178N突变的朊蛋白自发纤维形成具有一定影响，这为探索和研究遗传型克雅病的致病机制提供了重要线索。
- 高晨任科李龙珠姜慧英陈操张瑾韩俊董小平
- 关键词：朊病毒核酸扩增技术
- ATP结合盒转运蛋白A1在仓鼠和SMB-S15细胞朊病毒感染模型中表达及活性的研究
- 2015年
- 目的 评价胆固醇转运子ABCA1在朊病毒病中所发挥的作用.方法 运用WesternBlot检测朊病毒毒株263K感染的仓鼠脑组织和稳定感染羊瘙痒因子Chandler株的小鼠神经细胞系SMB-S15中ABCA1表达的变化,并检测ABCA1激活剂8-Br-cAMP对SMB-S15细胞中朊病毒prpSc含量的影响.结果 与正常对照相比,朊病毒感染的动物及细胞模型中ABCA1蛋白表达显著升高（P＜0.05）,并且在细胞模型中ABCA1活化显著增加prpSc的含量.结论 以上结果提示ABCA1与朊病毒感染的相互关系.该项研究为探索朊病毒复制的分子机制提供了新的思路,同时为以控制胆固醇内稳态为靶点的抗朊病毒治疗提供了理论依据.
- 王晶张瑾张宝云肖康陈利娜孙静董小平石琦
- 关键词：朊病毒胆固醇神经元
- 建设我国水产品加工业培训体系的研究被引量：3
- 2005年
- 周翀张瑾林洪
- 关键词：水产品加工业从业人数水产加工品质量管理
- 2011年中国克雅氏病监测病例特征分析被引量：8
- 2012年
- 目的了解中国(未包括香港、澳门和台湾地区,以下同)克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)的发病情况、流行病学及临床特征。方法对2011年我国CJD监测网络获得的可疑CJD病例的临床及流行病学资料进行分析,收集患者脑脊液及血液样品,利用Western blot方法检测脑组织中PrPSc蛋白及脑脊液中14-3-3蛋白,提取全血基因组DNA并利用PCR及测序方法对PRNP基因进行129位多态性及基因突变的分析。结果没有发现散发型CJD确定诊断病例,发现临床诊断病例57例,疑似诊断病例15例,致死性家族型失眠症病例2例,GSS综合征病例(P102L)1例及遗传型CJD病例5例,包括V203I、E196A、E200K各1例及2例T188K突变。病例报告无季节聚集性,长久居住地呈散在分布,职业分布广泛。临床诊断病例年龄中值为61岁(43,82),男女性别比例为0.46∶1;疑似诊断病例年龄中值为62岁(39,77),男女性别比例为0.88∶1。快速进行性痴呆为最常见的首发症状,占全部诊断病例的54.93%。临床诊断病例比疑似诊断病例出现更多的典型临床表现。结论 2011年我国监测到的CJD病例主要以散发型为主,病例的报告时间、长久居住地分布、职业分布、性别比例以及年龄分布均符合散发型CJD的发病特点。
- 石琦陈操周伟张宝云高晨张瑾田婵韩俊董小平
- 关键词：克雅氏病
- 人神经元特异性烯醇化酶蛋白表达及抗体制备(英文)
- 2006年
- 目的克隆和表达人的神经元特异性烯醇化酶(HuNSE)基因,制备HuNSE多克隆抗体,以期用于朊病毒病及相关疾病的临床诊断。方法经RT-PCR扩增HuNSE基因和测序验证后,将其克隆于原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中诱导表达HuNSE蛋白,蛋白经Ni-NTA亲和纯化后,免疫兔子,所制备的抗血清用ELISA、Westernblotting和免疫组化鉴定。结果所表达的HuNSE蛋白相对分子质量约为22000,以其为抗原制备的HuNSE特异性抗血清具有良好的免疫反应性。Westernblotting和免疫组化结果显示抗血清可识别重组和不同哺乳动物脑组织中的NSE蛋白。结论NSE基因在大肠杆菌中获得了高效表达,所制备的NSE特异性抗血清可用于朊病毒病及其他神经退行性疾病的诊断和研究。
- 肖新莉韩俊张琳陈岚张瑾陈新林周伟姜惠英张宝云刘勇董小平
- 关键词：神经元特异性烯醇化酶抗血清朊病毒病
