张贵萍
- 作品数：2 被引量：22H指数：1
- 供职机构：南通大学医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校优势学科建设工程资助项目南通市应用研究计划项目江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠海马神经元TLR4介导的MyD88依赖途径在神经炎症中的作用被引量：22
- 2013年
- 目的:研究大鼠海马神经元是否有Toll样受体4(TLR4)介导的的髓样分化因子88(MyD88)依赖途径及该途径的激活在神经炎症中的作用。方法:采用体外培养7 d的新生大鼠海马神经元,细胞免疫荧光双标法鉴定海马神经元纯度。用TLR4配体脂多糖(LPS)或TLR4抗体预处理海马神经元,以激活或阻断TLR4的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)方法检测海马神经元中MyD88、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)mRNA的表达;Westernblot方法测定海马神经元MyD88和TRAF6蛋白水平;细胞免疫荧光双标法观察海马神经元中核因子κB/P65(NF-κB/P65)的表达定位及TLR4激活或阻断后NF-κB/P65核易位情况;ELISA检测培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和一氧化氮(NO)的水平。结果:LPS能上调海马神经元MyD88和肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF6)mRNA水平;促使NF-κB/P65转位至核;增加MyD88和TRAF6蛋白的表达;增加海马神经元培养上清中TNF-α、IL-1β和NO含量;TLR4抗体预处理能减弱LPS对海马神经元NF-κB/P65核易位作用及降低培养上清中TNF-α、IL-1β和NO的水平。结论:大鼠海马神经元有TLR4介导的的MyD88依赖途径,该途径的激活能导致TNF-α、IL-lβ和NO含量的增加。海马神经元TLR4介导的MyD88依赖途径参与了神经炎症反应,神经元不是神经炎症反应中的被动者。
- 张国霞周爱玲张贵萍胡亚娥茅家慧
- 关键词：海马神经元神经炎症MYD88
- 海马神经元Toll样受体4的髓样细胞分化因子非依赖途径在神经炎症中的作用
- 2015年
- 目的探讨海马神经元Toll样受体4(TLR4)介导的髓样细胞分化因子88(My D88)非依赖途径在神经炎症中的作用。方法构建3对针对My D88基因的特异siRNA序列,经脂质体途径转染入体外培养的海马神经元,通过免疫荧光检测转染效率和RT-q PCR选择最佳siRNA序列,并优化转染条件,达到沉默My D88基因而保留My D88非依赖途径的目的;将体外培养海马神经元随机分成4组:空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)、LPS组和siRNA组。采用RT-q PCR分别测定TLR相关分子(TRAM)、TLR4相关的干扰素活化子(TRIF)mRNA的表达;Western印迹检测TRIF蛋白水平;ELISA技术测量培养上清中TRAM、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和白细胞介素-1β(IL-1β)浓度。结果 siRNA转染成功,siRNA2的沉默效果最佳,效率达94.3%,且最适转染浓度和时长分别为30 nmol/L和48 h。空白对照组和阴性对照组可观察到TRAM、TRIF mRNA以及TRIF蛋白的表达,同时上清液中也可以检测到TRAM、IP-10和IL-1β;LPS刺激组,上述检测指标的表达量均明显增高;siRNA组,在阻断My D88基因的前提下加LPS刺激,与空白对照组和阴性对照组相比,上述检测指标的水平均显著增高,但在上清液中,IL-1β的浓度低于LPS组。结论 siRNA序列能够成功转染入体外培养的海马神经元,发挥很强的沉默效率,达到理想的阻断My D88依赖型途径的作用;海马神经元有TLR4的My D88非依赖途径的存在的证据,当激动该途径时,相应炎症因子的表达上调;TLR4激活所致的My D88非依赖途径活化可能是神经退行性疾病的发病机制之一。
- 张贵萍周爱玲张国霞胡亚娥茅家慧
- 关键词：海马神经元MYD88炎症神经退行性疾病
