徐斌
- 作品数：106 被引量：118H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生经济管理化学工程生物学更多>>
- 日本血吸虫金属蛋白酶基因的克隆和表达及其对小鼠的免疫保护性研究被引量：2
- 2011年
- 目的克隆和表达日本血吸虫金属蛋白酶(metalloprotease)编码基因并纯化表达产物,观察其在成虫体内定位及在小鼠的免疫试验。方法根据表达序列标签(EST)测序的结果设计引物,从含有金属蛋白酶基因的日本血吸虫cDNA克隆(SJM2CFB04,简称SjB04)中扩增得到该编码基因片段,亚克隆至原核表达载体pET28a中表达,应用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。应用间接免疫荧光法,观察金属蛋白酶在血吸虫成虫体内的分布。将18只C57BC/6小鼠随机分成两组,实验组用SjB04重组蛋白(25μg/只)免疫小鼠,共3次,每次间隔2周;对照组用佐剂免疫(50μl/只)。末次免疫后2周,每鼠腹部感染40±2条日本血吸虫尾蚴,攻击后第37天起连续收集6 d小鼠粪便,计算每克粪虫卵数和减卵率;第42天剖杀小鼠,门静脉灌注收集成虫并计算减虫率。结果获得了SjB04基因(ORF 528 bp)的编码序列,构建了原核表达载体,并在大肠埃希菌中表达,经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjB04。免疫荧光法检测结果显示,SjB04主要定位于日本血吸虫成虫的肠管表皮。Western blotting分析结果显示,该纯化重组蛋白SjB04能被感染兔血清和免疫兔血清识别,在相对分子质量(Mr)29 800处出现一清晰条带。用该纯化蛋白免疫C57BC/6小鼠后,减虫率为27.1%,粪减卵率为57.8%。结论克隆获得的日本血吸虫SjB04重组蛋白主要定位于日本血吸虫成虫的肠管表皮,该蛋白可明显减少感染日本血吸虫的C57BC/6小鼠的粪卵排出量。
- 徐斌鞠川卢艳莫筱谨冯正许学年胡薇
- 关键词：日本血吸虫金属蛋白酶免疫保护力
- 日本血吸虫表皮生长因子受体基因的鉴定和功能研究
- 2020年
- 目的鉴定日本血吸虫表皮生长因子受体基因(SjEGFR),并阐明其在日本血吸虫生长和生殖发育中的作用。方法通过5’-RACE和3’-RACE扩增、测序获取SjEGFR基因全长片段。采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测该基因在日本血吸虫不同发育阶段(16、18、20、22、24、26 d)表达情况。使用整条虫体原位杂交法对感染24 d的日本血吸虫雌、雄虫SjEGFR基因转录本进行定位。通过体内持续RNA干扰(RNAi)技术特异性敲低SjEGFR基因,待虫体发育至30 d收集虫体。统计分析雌、雄虫回收数量以及虫体长度,通过明矾卡红染色观察虫体生长发育情况。结果首次鉴定了SjEGFR基因,其结构具有一个保守的酪氨酸激酶位点。整条虫体原位杂交定位显示该基因转录本在虫体各处均有表达,在雌、雄虫肠道部位呈现出明显着色的高表达。体内RNAi显示,SjEGFR基因表达被特异性敲低后,雌、雄虫生长受阻。RNAi组雌虫子宫内无虫卵,肠道内无色素沉积、卵黄腺发育迟滞、卵巢发育受阻;雄虫呈现睾丸个数减少、体积变小,出现了更多未成熟的精母细胞。结论特异性敲低SjEGFR基因表达可影响日本血吸虫生长和生殖发育,阻滞虫卵产生。
- 相慢玉李健罗芳孙成松朱炳宽王吉鹏莫筱瑾张颋徐斌冯正胡薇
- 关键词：日本血吸虫表皮生长因子受体生殖
- 田鼠巴贝虫候选诊断抗原的表达和评价被引量：1
- 2017年
- 目的克隆、表达田鼠巴贝虫(Babesia microti)候选诊断抗原,评价其潜在的诊断价值。方法目的基因来自本室前期构建的田鼠巴贝虫cDNA文库,分别是Bm2、Bm4、Bm6、Bm9和Bm15,用生物信息学分析软件对编码其ORF的氨基酸序列进行预测和分析。从阳性克隆的p Bluscript重组质粒中PCR扩增目的基因。将扩增产物连接至p ET28a质粒,构建重组质粒并转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞中,用终浓度为1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行蛋白表达和可溶性分析。对包涵体表达的蛋白,采用PAGE胶蛋白微量回收试剂盒对目的蛋白进行纯化。用田鼠巴贝虫感染小鼠血清和疟疾患者血清对纯化的重组蛋白进行ELISA分析,评价各重组抗原的敏感性和特异性。结果 5个候选抗原Bm2、Bm4、Bm6、Bm9和Bm15基因经PCR扩增,大小分别约为480、300、750、200和700 bp,与理论值相符。构建的重组质粒经测序鉴定与cDNA文库筛选的阳性克隆的ORF序列一致。Bm4、Bm6和Bm15质粒经IPTG诱导,获得包涵体表达,相对分子质量(Mr)分别为13 000、30 000和30 000。但Bm2和Bm9未能表达成功。3个重组蛋白Bm4、Bm6和Bm15纯化后,经SDS-PAGE电泳分析,获得了单一条带的目的重组蛋白。使用田鼠巴贝虫感染小鼠血清和健康小鼠血清对Bm4、Bm6、Bm15和Bm SA1(参照)重组蛋白的ELISA分析结果显示,重组蛋白Bm4、Bm6、Bm15及Bm SA1的敏感性分别为15.0%、55.0%、80.0%、100.0%,特异性分别为100.0%、100.0%、90.0%、100.0%。Bm4、Bm6及Bm15与疟疾患者血清无交叉反应,Bm SA1与疟疾患者血清有一定的交叉反应(假阳性率为13.3%)。结论表达了3个田鼠巴贝虫候选诊断抗原,初步评价发现Bm15抗原对检测田鼠巴贝虫具有良好的敏感性和特异性。
- 刘秀凤孙嘉慧徐斌陈军虎胡薇
- 细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶B细胞表位的预测及鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的预测及鉴定细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶(Echinococcus granulosus lactate dehydrogenase,Eg LDH)的B细胞表位,为研制敏感性和特异性强的棘球蚴病诊断方法奠定基础。方法通过ESPript 3.0在线网站和IEDB软件对Eg LDH的二级结构、β转角、表面可及性、柔韧性、抗原性、亲水性、线性表位等参数进行预测,筛选出具有潜在优势的B细胞表位区域;选取合适的B细胞表位进行体外多肽段合成;通过ELISA方法对合成的B细胞表位进行诊断效能评价,分别检测棘球蚴病患者血清、囊尾蚴病患者血清和健康者血清,评价敏感性、特异性和交叉反应性。用囊液抗原作为对照。结果Eg LDH二级结构中α螺旋占37.16%,β-折叠占9.67%,无规则卷曲占53.17%,存在4个跨膜区。筛选获得7个潜在的B细胞表位区域。体外合成了4个氨基酸长序列的B细胞表位PP-1(215~228)、PP-2(189~200)、PP-4(79~89)和PP-7(21~33),ELISA结果显示,4个B细胞表位PP-1、PP-2、PP-4和PP-7对棘球蚴病患者血清的敏感性分别为52.9%(18/34)、61.8%(21/34)、82.3%(28/34)和50%(17/34),PP-4与PP-1、PP-2和PP-7的敏感性差异有统计学意义(χ~2=8.100、5.143、9.091,均P<0.05),囊液抗原的敏感性为91.1%(31/34),与PP-1、PP-2和PP-7的差异有统计学意义(χ~2=9.600、5.780、10.530,均P<0.05),与PP-4的差异无统计学意义(χ~2=0.444,P>0.05);对健康者血清的特异性分别为100%(21/21)、100%(21/21)、95%(20/21)和95%(20/21),囊液抗原的特异性为95%(20/21),与PP-1、PP-2、PP-4和PP-7的差异无统计学意义;对囊尾蚴病患者血清的交叉反应性分别为:0、1/10、2/10和2/10,囊液抗原的交叉反应性为5/10。结论 EgLDH的B细胞表位PP-4对棘球蚴病患者血清有较强的敏感性和特异性,有望成为潜在的诊断抗原。
- 闫帅严萍莫筱瑾徐斌张颋胡薇詹若挺叶萍
- 关键词：细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶B细胞表位诊断抗原
- 新药专利保护的最优化方向被引量：2
- 2001年
- 根据国外学者的理论分析，推导出新药专利保护的几个最优化方向。
- 徐斌
- 关键词：新药政策干预
- 油浆高温快速裂解特性及机理研究
- 石油催化裂化加工过程中副产大量催化油浆,对催化油浆的利用至今尚无高效的方法,研究开发油浆高附加值转化与利用的方法是炼油行业的迫切需求。本文采用高温快速裂解的方式考察油浆在深度裂化时的裂解特性,并选取两种模型化合物采用实验...
- 徐斌
- 关键词：油浆裂解温度密度泛函理论裂解机理
- 鉴定恶性疟原虫Pfmspdbl2基因多态性的引物及方法
- 本发明公开了一种鉴定恶性疟原虫Pfmspdbl2基因多态性的引物及方法，包括上游引物(如SEQ ID NO：1所示)和下游引物(如SEQ ID NO：2所示)。根据基因多态性区域特征，设计特定的引物，经PCR扩增得到包含...
- 陈军虎陈绅波仰梦佳沈海默徐斌
- 文献传递
- 抗癌小分子化合物索拉非尼在治疗肝包虫病中的应用
- 本发明提供了涉及抗癌小分子化合物索拉非尼在治疗肝包虫病中的应用。更具体地，本发明提供一种索拉非尼类化合物的用途，它被用于制备一组合物或制剂，所述组合物或制剂(a)用于治疗肝包虫病；和/或(b)用于治疗泡型棘球蚴病。与现有...
- 党志胜肖宁周晓农胡薇张颋徐斌沈海默陈军虎
- 文献传递
- 抗静电可染聚丙烯纤维高速纺丝研究
- 该文采用共混法改进聚丙烯纤维抗静电性能和染色性能.以尼龙6(PA6)作为染色添加剂,引入酸性染料的染座;以含有磺酸基团的改性共聚酯(HCDP)作为抗静电剂,并引入可与阳离子染料结合的磺酸基团;同时由于PA6、HCDP与P...
- 徐斌
- 关键词：改性聚丙烯纤维抗静电性能染色性能
- 田鼠巴贝虫Bm7重组抗原蛋白及其制备方法和用途
- 本发明公开了一种田鼠巴贝虫Bm7重组抗原蛋白，具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的蛋白、或由该蛋白发生一个或多个氨基酸的置换、缺失或插入而形成的具有相同功能的蛋白。此外，本发明还公开了该田鼠巴贝虫Bm7重组抗原蛋白...
- 胡薇孙嘉慧徐斌周霞鞠川陈军虎沈海默黄继磊张铤莫筱瑾陈绅波周晓农
- 文献传递
