方晓文
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
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- NF—κB信号通路对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用
- 2009年
- 目的研究高糖尤其是波动性高糖对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的影响，以及NF-κB信号通路在高糖诱导HUVEC凋亡中的作用。方法构建针对NF-κBp65 mRNA序列1566位点的重组RNAi腺病毒表达载体，并利用RNAi腺病毒抑制HUVEC p65表达。应用流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）研究NF-κB信号通路在高糖诱导HUVEC凋亡的作用。结果高糖（20．5mmol／L或30．5mmol／L）可以促进HUVEC凋亡。NF-κBp65特异腺病毒感染HUVEC后，可以明显抑制高糖刺激的NF-κBp65核蛋白转录，使核内p65蛋白表达处于基础水平。TUNEL结果示高糖作用后5d，高糖组细胞凋亡率显著高于正常葡萄糖组（25．81％±1．77％比8．20％±0．63％，P〈0．05），Ad—DEST＋高糖组（26．10％±0．98％）与单独高糖组的细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）。Ad-1566＋高糖组的细胞凋亡率（11．49％±0．92％）比Ad—DEST＋高糖组显著下降（P〈0．01）。TUNEL法及流式细胞术检测结果均显示NF-κBp65特异腺病毒可以降低高糖诱导的HUVEC凋亡。结论高糖可以促进HUVEC凋亡。腺病毒感染HUVEC可以明显抑制高糖刺激的NF-κBp65核转录，从而保护高糖作用的HUVEC凋亡。
- 陈刚沈小燕林旭游婷婷乔玉芳姚瑾林苗朱香清牟伦盼方晓文邹欣林丽香
- 关键词：RNA干扰细胞凋亡高糖人脐静脉内皮细胞
- 高糖对血管内皮细胞增殖凋亡的影响
- 目的:内皮细胞功能紊乱被认为是高糖诱导血管并发症的始动因素和加重的基础。高糖在内皮细胞的增殖和凋亡的调控上起着重要的作用,本研究拟对比研究波动性与持续性高糖对血管内皮细胞/(HUVEC/)增殖凋亡的影响。方法:以培养成功...
- 方晓文
- 关键词：人脐静脉内皮细胞增殖凋亡高糖
- 文献传递
- 用RNA干扰腺病毒载体研究Wnt／β-连环蛋白信号途径对人甲状腺细胞增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的以糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）特异的RNA干扰（RNAi）腺病毒表达载体作为研究工具，从转录后水平抑制GSK-3β基因表达，探讨Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路对人甲状腺细胞增殖的影响。方法利用体外同源重组技术构建短发夹RNA（shRNA）腺病毒表达载体，在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度；RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞，Western印迹法检测其对GSK-3β蛋白表达的抑制效应；利用构建的RNAi腺病毒抑制GSK-3β表达，BrdU法检测原代培养人甲状腺细胞增殖活性。结果成功构建了GSK-3β特异的RNAi腺病毒表达载体，获得高滴度的腺病毒液；RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞后，GSK-3β蛋白的表达受到明显抑制，β-catenin蛋白表达显著增加（1．324±0．057vs0．935±0．029，P〈0．05）；腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞1、3、5、7d后，RNAi腺病毒组比空病毒组细胞增殖率明显增加（1．473±0．035vs1．312±0．043、1．226±0．045vs0．959±0．066、0．776±0．041vs0．605±0．054、0．337±0．018vs0．259±0．021，P〈0．05）。结论构建的目的RNAi腺病毒表达载体能有效抑制GSK-3β基因的表达；Wnt／β-catenin信号通路在人甲状腺细胞的增殖中有重要影响。
- 陈刚牟伦盼姚瑾游婷婷沈小燕朱香清乔玉芳林苗方晓文邹欣林丽香
- 关键词：信号传递增殖
- 用RNA干扰慢病毒研究Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响
- 2010年
- 目的 构建β-连环蛋白特异的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,与辅助包装质粒一起在293 T淋巴细胞中包装并扩增病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度;RNAi慢病毒感染小鼠胰岛β细胞,实时PCR以及Western blot法检测其对β-连环蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi慢病毒抑制β-连环蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测小鼠胰岛β细胞增殖活性.组间比较采用方差分析(ANOVA).结果 成功构建了β-连环蛋白特异的RNAi慢病毒表达载体,获得的慢病毒滴度在5.0×10~8TU/ml左右;RNAi慢病毒在3 d后就能有效感染小鼠胰岛β细胞,5 d后使细胞内β-连环蛋白基因mRNA和相应蛋白的表达受到明显抑制;慢病毒感染小鼠胰岛β细胞后,细胞增殖率明显减少.结论 构建的目的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制β-连环蛋白基因的表达;Wnt/β-连环蛋白信号通路在小鼠胰岛β细胞增殖中有重要影响.
- 邹欣陈刚沈小燕方晓文陈玉芳胡雅婷曾月桂林丽香
- 关键词：RNA干扰WNT信号Β-连环蛋白胰岛Β细胞增殖
- OGTT30分钟血糖升高对正常糖代谢人群心电图异常的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨OGTT30分钟血糖异常升高对正常糖代谢人群中明尼苏达编码提示的心电图异常的影响。方法采用分层随机整群抽样方法,选择我省最近一次糖尿病横断面调查的糖代谢正常的人群(20-75岁)。结果:2441名有完整资料的调查对象(男39.45%)进入统计学分析。明尼苏达编码提示心电图主要异常改变人群占11.6%(男95人,女188人),多因素Logistic回归分析调整相关心血管疾病危险因素后,OGTT30分钟血糖升高(≥9.23mmol/l,第三个四分位截点)仍然和心电图异常显著相关(OR1.721(1.311-2.261),P<0.001)。结论从早期筛查糖尿病和心血管疾病高危人群的角度出发,部分照现行糖尿病诊断标准划分为正常糖代谢的人群但负荷后30分钟血糖异常升高的人群,同样也是需要给予重视的CVD预防阶段。
- 方晓文陈刚邹欣林丽香
- 关键词：心电图心血管疾病
