李博
- 作品数：5 被引量：43H指数：3
- 供职机构：南京军区福州总医院更多>>
- 发文基金：福建省重点科技计划项目南京军区“十一五”医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的构建及免疫避孕效果的实验研究被引量：3
- 2008年
- 精子特异性乳酸脱氢酶是精子能量代谢的一个关键酶,具有很强的组织特异性和免疫原性.在本研究中,将人和小鼠(Mus musculus)的精子特异性乳酸脱氢酶编码序列分别与真核表达载体pVAX1连接,构建了两个DNA疫苗:pVAX1-hLDHC和pVAX1-mLDHC.将这两个DNA疫苗通过黏膜表面滴注的方式分别免疫雌雄两性BALB/c小鼠,在实验小鼠的血清和雌性实验小鼠的阴道分泌液中均检测到特异性抗体的存在,滴度随免疫次数的增加而升高.交配实验中,实验组出生子代的数量明显减少,有的小鼠甚至未生育,与未免疫组和pVAX1空质粒免疫组在统计学上有显著性差异.精子凝集实验表明,实验小鼠血清和雌性实验小鼠阴道分泌液均可引起正常雄性小鼠的精子悬液发生凝集反应.免疫组化结果显示:实验小鼠血清和雌性实验小鼠阴道分泌液中的抗体与位于正常精子胞质、顶体外膜及顶体囊中的乳酸脱氢酶抗原发生特异性结合.本研究初步显示了人用避孕DNA疫苗免疫效果,为以后可能进行的临床实验奠定了基础.
- 陈勇张朵辛娜熊永忠陈平李博涂向东兰风华
- 关键词：DNA疫苗避孕疫苗黏膜免疫
- X-连锁肾上腺脑白质营养不良高风险胎儿的产前分子诊断被引量：2
- 2008年
- 目的探讨X-连锁肾上腺脑白质营养不良高风险胎儿的产前分子诊断方法。方法提取4个高风险家系胎儿羊水细胞基因组DNA，采用亲子鉴定试验评估母体基因组DNA污染情况，用PCR扩增先证者突变的DNA片段，然后进行PCR-限制性片段长度多态性、DNA序列测定和变性高效液相色谱对胎儿羊水基因组DNA的ABCD1基因进行分析。结果（1）家系1：用BcnI切割799bp的PCR产物，胎儿1与其父（正常对照）酶切模式一样，PCR产物测序未发现胎儿1的ABCD1基因有与先证者相同的突变（P560L突变）；（2）家系2：用MaeI切割232bp的PCR产物，胎儿2与其父酶切模式一样，PCR产物测序未发现胎儿2的ABCD1基因有与先证者相同的突变（Q177X突变）；（3）家系3：用AciI切割271bp的PCR产物，胎儿3与先证者酶切模式一样，PCR产物测序发现胎儿3的ABCD1基因有与先证者相同的突变（R617C突变）；（4）家系4：变性高效液相色谱（DHPLC）分析269bp的PCR产物，胎儿4与其父洗脱峰的峰型相似，而与先证者的峰型不同，PCR产物测序未发现胎儿4的ABCD1基因有与先证者相同的突变（K276E突变）。结合胎儿性别判断，胎儿1、2为正常纯合子，胎儿3为肾上腺脑白质营养不良半合子，胎儿4为正常半合子。结论应用产前分子诊断的方法诊断X-连锁肾上腺脑白质营养不良高风险胎儿准确且有效。
- 柯龙凤王志红黄惠娟涂向东曾健李博杨渤生兰风华
- 关键词：肾上腺脑白质营养不良产前诊断ATP结合匣式转运子
- 精子特异性表达基因的遗传多态性与男性不育被引量：21
- 2008年
- 精子发生需要精子特异基因的表达,这些特异表达基因的遗传多态性可能影响精子的发生,导致男性不育。国内外学者已对精子发生特异表达的一些候选基因进行多态性研究,分析其多态性与不育的相关性及其可能的致病机制,进一步从基因角度阐明不育的病因。本文对于精子发生相关的基因多态性研究进展做一综述。
- 李博兰风华
- 关键词：精子发生基因多态性男性不育
- 以TritonX-114液相分离法去除质粒溶液中的内毒素被引量：11
- 2007年
- 目的:采用Triton X-114液相分离法去除质粒溶液中的内毒素,以保证实验动物的安全和结果的准确性。方法:通过碱裂解法提取质粒pVAX1和pVAX1-hLDHC,用聚乙二醇6000沉淀对质粒进一步纯化;用Triton X-114抽提的方法,去除质粒溶液中的内毒素。结果:通过3轮Triton X-114抽提,能够将质粒溶液中内毒素水平降至1.95 EU/mL,质粒样品的回收率为79.8%,质量保持不变。结论:Triton X-114液相分离法是一种非常有效的去除质粒溶液中内毒素的方法。
- 张朵李博兰风华
- 关键词：质粒内毒素TRITON
- 不明原因男性不育人群中睾丸特异性乳酸脱氢酶基因突变的发现及其意义被引量：7
- 2010年
- 为了研究睾丸特异性乳酸脱氢酶,即乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)基因突变在男性不育发病中的作用,利用LDH-C4特异性底物对100名不明原因男性不育症患者的精子LDH-C4进行活性显色,用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对LDH-C4活性低下的患者进行LDHC基因PCR产物的突变筛查,对DHPLC峰形异常的PCR产物进行序列测定.筛选到一组精子LDH-C4活性明显下降的患者,其中1名患者的LDHC基因PCR产物在DHPLC中呈异常洗脱峰.对这一PCR产物进行序列测定,发现患者LDHC基因第5外显子的115位碱基发生了T→A的杂合改变(GenBank登录号GU479375),该突变使LDHC基因的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),形成截短的C亚基.T克隆-测序进一步证实了该无义突变的杂合状态.这是在人类LDHC基因上发现的第一个突变,提示LDHC基因突变可能是男性不育发病的原因之一.
- 李博张朵曾健富显果柯龙凤颜水堤严爱贞兰风华
- 关键词：不育症DHPLC基因突变
