温路
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市渝中区科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBV人工转录因子的制备及其靶向抑制HBV增强子活性研究被引量：2
- 2014年
- 目的构建可靶向性识别HBV增强子的锌指蛋白人工转录因子真核表达载体,检测其在真核细胞内的表达、对细胞增殖影响及生物学活性分析。方法应用锌指蛋白(zinc finger protein,ZFP)设计工具Zinc finger tools 3.0获取人工转录因子(artificial transcription factor,ATF)结合结构域并融合抑制性效应结构域KRAB,全基因合成ATF克隆进真核表达载pcDNA3.1(+),酶切、测序来鉴定构建载体的正确性,X-tremeGENE HP转染pcDNA3.1-ATF于HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫荧光及Western blot检测ATF mRNA与蛋白的表达情况;CCK-8检测不同浓度的ATF表达载体转染后对细胞增殖的影响;双荧光素酶报告基因检测ATF对HBV增强子序列的靶向性抑制作用。结果成功构建pcDNA3.1-ATF真核表达载体;在HepG2细胞中能够正常表达;CCK-8检测ATF对细胞增殖生长无明显的毒性作用;双荧光素酶报告基因分析ATF能靶向性结合增强子并抑制报告基因的表达。结论通过基因工程的方法构建pcDNA3.1-ATF的真核表达载体可正常表达且无明显细胞毒性作用,可靶向性识别HBV增强子并具有相应的生物学活性。
- 罗伟蒋清虎刘济铭胡慧雯温路魏续福刘锐吴忠均
- 关键词：增强子锌指蛋白人工转录因子真核表达载体
- ARK5在肝癌组织中的表达及其对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响被引量：2
- 2014年
- 目的:检测ARK5在肝癌组织及肝癌SMMC-7721细胞中表达水平,探讨其对肝癌细胞生长的作用。方法:采用PCR和Western blotting法检测30例肝癌组织及癌旁组织、正常肝细胞LO2及肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平;合成ARK5的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,转染至SMMC-7721细胞分别为实验组和阴性对照组,同时设空白对照组,采用MTT法和流式细胞术检测各组肝癌细胞的增殖活性和细胞凋亡率。结果:PCR和Western blotting法检测,肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中ARK5mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织和LO2细胞(P<0.05)。MTT法检测,实验组24、48和72h细胞生长抑制率分别为(19.39±5.42)%、(23.19±0.53)%和(20.74±1.23)%,均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);流式细胞术检测,实验组细胞凋亡率为(15.017±0.945)%,与空白对照组[(8.770±0.656)%]和阴性对照组[(8.763±1.201)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ARK5在肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中表达水平明显升高,抑制其表达可抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡,提示ARK5可能作为一种癌基因促进肝癌的形成。
- 蒋清虎罗伟温路胡惠雯邓大炜吴忠均
- 关键词：肝肿瘤RNA干扰SMMC-7721细胞
- 射频消融联合经肝动脉化疗栓塞治疗肝癌的疗效与安全性系统评价被引量：3
- 2014年
- 目的：系统评价射频消融（radiofrequency ablation，RFA）联合经肝动脉化疗栓塞（transcatheter arterial chemoemboliza—tion，TACE）治疗肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）的有效性与安全性。方法：计算机检索PubMed、Cochrane Li—brary、EMBase及CNKI数据库中1978至2013年间的数据，只纳入比较RFA＋TACE与单独RFA治疗HCC的随机对照试验。结果：按照人选标准，有9项临床试验纳入本研究。与单独RFA治疗HCC相比，RFA＋TACE能显著提高患者1、3、5年总生存期（ORl年=2．34，95％CI=I．54-3．57，P=-0．000；OR3年=1．99，95％CI=1．43-2．77，P=0．000；OR54=2．26，95％CI=1．03-4．95，P=0．04）和1、3年无肿瘤复发生存期（ORl年=1．74，95％CI=1．16～2．63，P=0．008；0R3~=2．47，95％CI=1．61—3．80，P=-0．000）。2组之间主要并发症发生率无明显差别（0R=1．24，95％CI=0．79～1．95，P=0．36）。亚组分析显示：RFA＋TACE治疗能明显提高直径在3—5am之间的HCC患者的1、3年总生存期。结论：RFA＋TACE能显著延长HCC患者的无肿瘤复发生存期及总生存期，尤其适合于直径介于3-5cm之间的HCC患者。
- 温路吴忠均沈艾张超魏续福刘锐
- 关键词：肝细胞性肝癌射频消融肝动脉化疗栓塞
