王天真
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：浙江工业大学更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程更多>>
- 摩氏摩根菌ZJB09203酯酶的分离纯化及基因克隆研究
- 普瑞巴林安全性高、耐受性好,是新一代治疗神经病理性疼痛和癫痫的首选药物。化学-酶法合成普瑞巴林已成为目前研究和开发的热点。其中,(3S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸是制备普瑞巴林的重要中间体,本研究从实验室筛选的...
- 王天真
- 关键词：酯酶分离纯化酶学性质基因克隆
- 文献传递
- 摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化及性质被引量：1
- 2014年
- 立体选择性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CNDE)是化学-酶法合成重大疾病治疗药物普瑞巴林的关键步骤。分离纯化了能够高效水解S-型CNDE的摩氏摩根菌ZJB-09203胞内酯水解酶,并进行酶学性质研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose 6 FF疏水柱层析、DEAE Sephadex A-50阴离子交换和羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析,纯化得到电泳纯的酯水解酶。SDS-PAGE和凝胶过滤HPLC分析确定该酶为单亚基蛋白,分子量为68 kDa。不同碳链长度p-硝基苯酚酯特异性酶解结果表明,该酶为酯酶,酶促合成普瑞巴林手性中间体(S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸的最适pH为9.0,最适温度为45℃,且在pH 7.0-9.0和40℃条件下具有良好的稳定性。Ca2+、Cu2+、Mn2+对酶活有一定的促进作用,Co2+、Fe3+、Ni2+及EDTA对酶活有较强的抑制作用。此外,考察了该酯酶水解p-硝基苯酚酯的动力学参数,及CNDE浓度对转化率的影响。首次报道了能够立体选择性水解CNDE的酯酶,相关酶学性质研究将为该酶催化合成普瑞巴林手性中间体的工业化应用提供重要依据。
- 郑仁朝王天真黎小军郑裕国
- 关键词：酯酶分离纯化酶学性质
