王建民
- 作品数：37 被引量：111H指数：8
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金河南省杰出人才创新基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生政治法律农业科学更多>>
- hTERT启动子调控的HSV-tk基因逆转录病毒载体的构建及SKOV3转染细胞的生物学特性观察被引量：3
- 2004年
- 目的 :观察转染有人端粒酶逆转录酶基因 (humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)启动子调控的单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 (herpessimplexvirusthymidinekinase ,HSV tk)基因的人卵巢癌细胞的部分生物学特性。方法 :构建hTERT启动子调控的HSV tk基因重组逆转录病毒载体 ,筛选携带该载体的包装细胞 ,测定包装细胞产生的逆转录病毒滴度 ,并用病毒颗粒感染人卵巢癌SKOV3细胞 (SKOV3/tk细胞 )并经RT PCR方法鉴定。然后倒置显微镜下观察SKOV3/tk细胞形态 ,MTT法研究细胞生长特性 ,并观察转染细胞裸鼠体内的成瘤能力。结果 :包装细胞产生的病毒滴度可达 2× 1 0 3 cfu·ml-1 。SKOV3/tk细胞扩增出 770bp的tk基因片段 ,形态与SKOV3细胞无明显差异 ;倍增时间 72h ,无明显变化 ;裸鼠体内的成瘤能力较SKOV3细胞下降。结论 :hTERT调控的HSV tk基因逆转录病毒载体构建成功 ;
- 郭玉忠姜国忠李克虹史惠蓉王建民薛乐勋
- 关键词：HTERT启动子HSV-TK基因
- 拓扑替康和更昔洛韦单独或联合应用对SKOV3/tk细胞生长的影响
- 2004年
- 目的 :探讨更昔洛韦 (GCV)与拓扑替康 (TPT)单独或联合应用对携带有hTERT启动子调控的HSV tk基因的SKOV3细胞生长的影响。方法 :将hTERT启动子调控的HSV tk基因重组逆转录病毒载体成功转染人卵巢癌SKOV3细胞 (SKOV3/tk细胞 ) ,用MTT法观察SKOV3/tk细胞对GCV、TPT的敏感性 ;观察合用GCV和TPT对SKOV3/tk细胞的杀伤作用。结果GCV及TPT对SKOV3/tk细胞的最低有效浓度分别为 1 0mg/L和 1 0 μg/L ,1 0 0mg/LGCV与TPT合用时TPT对SKOV3/tk细胞的最低有效浓度为 5 μg/L。 结论 :GCV合用TPT较TPT单用更能抑制携带有HSV
- 郭玉忠史惠蓉姜国忠李克虹王建民薛乐勋
- 关键词：HTERT启动子HSV-TK基因拓扑替康更昔洛韦
- 盐藻cbr基因启动子及其3'-非翻译区序列的克隆被引量：3
- 2005年
- 目的:克隆盐藻cbr基因启动子和3' -非翻译区(3' -UTR)片段。方法:设计2对引物,通过2轮巢式PCR 反应,扩增cbr基因启动子,其中首轮PCR反应使用改良的降落PCR程序,第二轮巢式PCR反应的模板是第一轮 PCR产物,使用普通PCR程序;cbr基因3' -UTR片段的克隆采用一对引物,通过一般PCR程序得到。结果:通过巢 式PCR得到长约1.1kb的cbr基因启动子片段,DNA测序结果表明碱基序列与文献记载完全相同,无任何碱基突 变;克隆的长0.3kb的cbr基因3' -UTR片段经人工比较,与收录的序列吻合,无碱基突变。结论:利用普通Taq酶 对用PCR方法克隆得到了盐藻胡萝卜素生物合成相关基因cbr的2个基因表达调控序列;结合使用巢式PCR和改 良降落PCR,可以非常有效地克隆具有复杂二级结构的DNA片段;通过两端人工添加的限制序列,将cbr基因启动 子和3' -UTR2个调控片段构建到同一个载体上,形成cbr基因表达盒,为构建转基因盐藻表达载体打下了基础。
- 张贵星潘卫东王宁贾岩龙陈小让王建民薛乐勋
- 关键词：盐藻启动子
- 杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变藻株的分离和初步鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的:分离制备杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变藻株并进行初步鉴定。方法:①杜氏盐藻经乙 基亚硝基脲(ENU)诱变后,利用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长实验,获得NR 缺陷型突变藻株。②用磺胺比色法测定酶反应生成的亚硝酸盐(NO-2)的浓度,从而计算出盐藻NR活性。比较突 变藻株与野生型杜氏盐藻NR活性,作出初步鉴定。结果与结论:共获得30株NR缺陷型突变藻株,共有6株NR 活性显著降低。杜氏盐藻NR缺陷型突变藻株成功建立。
- 贾岩龙侯卫红李杰刘红涛陈华燕王建民薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻硝酸盐还原酶突变株
- 杜氏盐藻RbcS基因cDNA片段的克隆和序列分析被引量：3
- 2005年
- 目的:克隆杜氏盐藻1,5 -二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)小亚基RbcScDNA片段。方法:根据 莱茵衣藻、团藻、玉米等真核生物的RuBisCO小亚基RbcS氨基酸的高度保守序列ETRSYLPP和MNKLPMFG,设计 一对简并引物,采用RT PCR方法及该简并引物克隆杜氏盐藻RbcScDNA。PCR产物经T A克隆与T vector相连, 转化大肠杆菌JM109,随机挑取数个菌落,筛选鉴定,对阳性克隆进行测序分析。将测序结果推导成氨基酸序列进 行同源性比较。结果:得到的cDNA长度为209bp,编码69个氨基酸。推导的氨基酸序列与团藻、Chloromonassp. ANT3、衣藻、伞藻、菠菜、玉米的RbcS相比较,同源性分别为85%、84%、82%、76%、70%、69%。结论:所克隆的序 列为杜氏盐藻RbcScDNA片段。
- 柴玉荣陈华艳王天云侯卫红袁保梅王建民薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶RBCS
- 盐藻的一种盐诱导碳酸酐酶基因转录起始点的确定及表达载体的构建
- 2005年
- 采用5′RACE和巢式PCR的方法确定盐藻(Dunaliella salina)一种盐诱导碳酸酐酶基因的转录起始位点,通过序列分析得出转录起始位点为A,从而确定核心启动子及上游调控区的位置。应用巢式PCR技术分别扩增盐藻这种碳酸酐酶基因上游调控区的2个片段,长度大约分别为0.8和1.2kb,序列经测定无误后分别与带β-葡糖苷酸酶(GUS)报告基因的载体相连接,经酶切鉴定这两种表达载体构建正确。用基因枪法将这两个载体导入盐藻细胞中,经染色检测,GUS基因在转化藻株中得到瞬时表达。
- 柴玉荣侯卫红王天云王宁袁保梅王建民薛乐勋
- 关键词：碳酸酐酶转录起始位点GUS报告基因
- 论律师的法治功能
- 法治是人类社会发展的结果，标志着社会文明及法律观念的巨大进步。依法治国是我国现代法治所包括的重要内容，实现十八届四中全会《决定》提出的“全面推进依法治国”的目标，需要建立与完善大量的社会制度，律师制度亦是支撑“全面推进依...
- 王建民
- 关键词：律师限制权力人权保障法律意识
- 文献传递
- 重组小鼠canstatin N端片段对鸡胚新生血管生成的抑制作用(英文)被引量：2
- 2004年
- 为了研究重组小鼠canstatinN端片段的体内抗血管生成活性 ,通过PCR扩增小鼠canstatinN端片段cDNA ,定向克隆于原核表达载体 pET30a (+)中 ,构建小鼠canstatinN端片段重组表达载体 pET mCanN ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹检测小鼠canstatinN端片段的表达 .结果表明 ,IPTG诱导原核表达载体 pET mCanN在大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)中高效表达 ,小鼠canstatinN端片段表达量约占菌体总蛋白量的 18% ,小鼠canstatinN端片段主要以包涵体形式存在 ,包涵体经过洗涤、裂解、Ni spincolumn亲合柱层析以及蛋白质复性等步骤纯化后 ,获得了纯度约为 92 %的重组小鼠canstatinN端片段 .鸡胚绒毛尿囊膜 (chickenembryochoriollantoicmembrane ,CAM)实验表明 ,原核表达的小鼠canstatinN端片段能有效地按剂量依赖的方式抑制鸡胚新生血管的形成 .
- 侯卫红贾岩龙王天云柴玉荣袁保梅田芳王建民薛乐勋
- 关键词：CANSTATIN肿瘤血管生成抑制剂原核表达
- 盐藻hsp70a cDNA片段的克隆与分析被引量：10
- 2003年
- 根据衣藻、矮牵牛花、Pisumsativum等真核生物hsp70a氨基酸高度保守序列设计两对简并引物,以热休克盐藻cDNA为模板进行巢式PCR扩增,产物经T A克隆转化至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序,将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析,获得了盐藻热休克蛋白70acDNA片段。在盐藻中所获得的cDNA片段,核苷酸长度为372bp,编码126个氨基酸。推导的氨基酸序列与与下列物种的hsp70a比较:衣藻为96%,矮牵牛花为94%,Pisumsativum为86%,番茄为86%,人为85%,果蝇和酵母分别为84%和83%。所克隆的序列为盐藻hsp70acDNA片段。
- 姜国忠牛向丽吕玉民谢华王建民袁保梅徐培荣薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻CDNA克隆
- 转基因微藻作为新型生物反应器的研究进展被引量：1
- 2006年
- 转基因微藻作为生物反应器生产生物活性物质已成为基因工程研究的热点之一。目前以转基因微藻作为生物反应器的技术并不十分成熟,然而许多科研人员及生物医药公司将微藻作为新型生物反应器生产有用的外源蛋白。本文对微藻生物反应器构建中的有效核转化方法的建立、转基因微藻中所用的启动子、筛选标记、稳定表达等问题进行了综述,同时介绍了目前转化成功的以及未来可能转化成功的有潜在应用价值的微藻。
- 刘红涛鲁照明侯桂琴李慎柯王建民薛乐勋
- 关键词：生物反应器启动子
