王建荣
- 作品数：20 被引量：126H指数：7
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- DNA序列测定质粒模板法的改良被引量：1
- 1994年
- 研究了以质粒为模板Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定ＤＮＡ序列的操作条件。用本实验改良的制备质粒模板方法和测序反应程序，使以３２Ｐ为ＤＮＡ合成标记、双链质粒为模板的测序结果基本达到以３５Ｓ以３３Ｐ为标记、Ｍ１３单链ＤＮＡ为模板的测序效果，实验操作简便、成本低。
- 王建荣张曼夫杨颐龚晓磊张平沈建英顾朝旭赵洪兴
- 关键词：质粒DNA
- 禽类的基因转移
- 1991年
- 动物基因转移技术用得最早最多的是微注射法,鱼类因是体外受精受精卵易于获取,哺乳动物则因受精卵原核较大易于进行遗传操作,所以,这两类动物的转基因研究起步较早,进展也很快。禽类因难于用微注射法直接对受精卵进行操作,故其转基因研究的进展较慢。最早进行禽转基因途径的尝试,是Pandey和Patehell(1982)用辐射处理精子,因此法转入的DNA是完全随机的,故难于实现目标基因的转移。Souza(1984)用反转录病毒作为载体,通过感染幼鸡而导入,使外源鸡生长激素(cGH)基因得到了表达,血浆cGH水平增高,但转基因鸡并无促生长效应。后来,Scanes和Leung(1986)给鸡注射外源cGH,发现试验鸡仅早期有增重效果,1月龄之后与对照组则无体重差异。
- 王建荣
- 关键词：禽类基因转移
- 浅谈转基因实验小鼠的饲养管理及如何提高其繁殖率
- 1996年
- 在哺乳类实验动物中用途最广、用量最大,被研究最多、最细,质量控制最严格的动物当属小鼠.小鼠作为实验动物有其独特的优越性:性成熟早、产仔多、繁殖快、体型小、便于管理、价格低.在转基因动物实验中,在小鼠上施行转基因的难度比大家畜低,能提供较多的受精卵,同时能把握住早期胚胎的发育时序,原核可见度高.因此,它广泛地应用于转基因技术实验中.一般来说,BALB/C、C57、ICR等几种品系均可应用于转基因实验,但因ICR鼠价格便宜、母性好,且是国际标准型,故多用ICR鼠.
- 王英陈丽君王建荣
- 关键词：繁殖率小鼠饲养管理
- 转基因小鼠的制备
- 1996年
- 近二十年来,分子生物学研究获得了长足的发展,而其核心部分基因工程技术的发展尤为突出,特别是转基因动物技术的出现,它不仅为人们研究外源基因在整体动物中的表达调控规律提供了最为有效的手段,而且还可通过改变动物的基因型,使其表现型更符合人类的需要,以培育优良品种及生产人类所需的有生物活性的蛋白质.因此,动物的基因转移这一生物技术已经广泛地应用于生命科学研究的众多领域.所谓转基因动物是指用实验手段将特定外源基因导入动物早期胚胎细胞,由此整合到染色体上,并通过生殖细胞系传递给后代的一类新动物.常见的转基因方法有DNA显微注射法、胚胎干细胞介导法、逆转录病毒转染法、精子载体法、电转移法等,其中以DNA显微注射法最为成熟,使用最广泛、最可靠,该法常用的哺乳动物是实验小鼠.本文所要介绍的就是显微注射法制备转基因鼠所涉及的关键技术和原理(一般程序如图1所示).
- 王英陈丽君王建荣
- 关键词：动物基因转移小鼠
- 初情期前枫泾小母猪超数排卵及其胚胎发育研究(英文)被引量：4
- 2000年
- 24头初情期前的枫泾小母猪以 PMSG、HCG进行超排处理 ,平均获得 2 3.4枚卵子 ,人工授精后 2 8～ 5 0 h超排的卵母细胞的受精率为 98.1% ( 472 /4 81) ,受精卵发育至桑椹胚和囊胚的比例为 89.7% ( 5 2 /5 8)。采用外科手术将 180枚受精卵移植至 8头同期发情的枫泾母猪子宫 ,其中有 5头妊娠 ,产仔 44头 ,胚胎移植妊娠率为 62 .5 %。
- 张德福王凯王英陈茵张平鲍世民王建荣
- 关键词：初情期前小母猪超数排卵胚胎移植胚胎发育
- 猪垂体Poly（A）~＋RNA的制备及其体外翻译
- 1994年
- 本文用ＬｉＣｌ沉淀法提取了猪垂体总ＲＮＡ，经。ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ柱亲和层析，分离纯化了猪垂体Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ．用自制的兔网织红细胞体外翻译体系鉴定，表明该Ｐｏｌｙ／（Ａ）＋ＲＮＡ具有较高的翻译活性．ＳＤＳ－ＰＡＯＥ，放射自显影分析翻译产物提示，在制各的猪垂体Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中，编码猪生长激素前体的ｍＲＮＡ占有较高的比例．
- 王建荣杨颐张平龚晓磊顾朝旭赵洪兴张德福顾雪耿
- 真菌高分子量核DNA的提纯被引量：11
- 1992年
- 目前,提取真菌核DNA的方法常用的有两种。一种是先制备原生质体,再从中提取核DNA;另一种是先用密度梯度超离心法提取粗核,再从粗核中提DNA。用这些方法虽能获得高分子量的核DNA,但操作均太繁琐,且对所用试剂和仪器要求较高。schwartz等建立了一种采用脉冲电泳技术分离巨大DNA分子的方法。
- 王建荣张曼夫
- 关键词：真菌DNA提纯
- 绿色木霉纤维素酶CBHⅡ基因的结构研究被引量：49
- 1995年
- 实验经限制性酶切和双向Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交将重组质粒ｐＣＢＨＩＩ－１４的１４ｋｂ外源片段上的绿色木霉纤维素酶ＣＢＨＩＩ基因定位于４．４ｋｂ的ＥｃｏＲＩ片段上，将该片段克隆于质粒ｐＵＣ１９，获得重组质粒ｐＣＢＨＩＩ。通过限制性分析构建了ｐＣＢＨＩＩ上４．４ｋｂＥｃｏＲＩ片段的物理图谱。在此基础上用质粒制作该片段的亚克隆，采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定了含绿色木霉纤维素酶ＣＢＨＩＩ基因的４０７４ｂｐ的ＤＮＡ序列，由ＧＴ－ＡＧ规则和ｃＤＮＡ序列推知该结构基因由４个外显子和３个内含子组成，总长１６１３ｂｐ，５′端存在与一般真核基因类似的两个特征性调控序列，但３′端不存在真核基因通常具有的特征序列而存在功能未明的短重复序列和嘧啶富集区。并对纤维素酶基因间的同源性和可能的功能作了初步的探讨。
- 王建荣张曼夫黄涛
- 关键词：纤维素酶木霉基因
- 奶山羊β-乳球蛋白cDNA的克隆
- 1997年
- 从奶山羊乳腺中快速抽提总ＲＮＡ，根据已发表的绵羊β乳球蛋白（ｏＢＬＧ）基因的序列，设计并合成与ｏＢＬＧ基因第一个外显子和最后一个外显子的部分序列相对应并能与特定载体末端互补的一对引物，经反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法扩增获得了特异性片段。将扩增片段与线性化质粒ｐＤＩＲＥＣＴ退火，获得重组质粒ｐＤＢＬＧ。ＰＣＲ鉴定、限制性分析和分子杂交均表明已克隆到奶山羊ＢＬＧ的ｃＤＮＡ。
- 王建荣张平李伯良杨新颖
- 关键词：奶山羊Β-乳球蛋白CDNA克隆
- 枫泾猪发情周期子宫性腺激素受体含量的变化被引量：1
- 2000年
- 以长白猪为对照 ,测定了枫泾猪发情周期血浆中雌二醇和孕酮及其子宫受体含量。发情期血浆雌二醇的峰值 ,枫泾猪为 ( 57.0 4± 3 .60 ) ng/ L,长白猪为 ( 55.85± 3 .0 4 ) ng/ L,两者无显著差异 ( P >0 .0 5)。孕酮最高水平和间情期平均水平 ,均为枫泾猪高 ( P <0 .0 1 )。孕酮最高水平 ,枫泾猪为 ( 2 4 .1 1± 1 .2 4 ) μg/ L,长白猪为 ( 1 6.67± 0 .2 1 ) μg/ L;孕酮间情期平均水平 ,枫泾猪为 ( 1 8.1 1± 1 .2 4 ) μg/ L,长白猪为 ( 1 1 .0 7± 0 .61 )μg/ L。枫泾猪发情期和间情期的细胞质雌二醇受体 ( CER)分别为每毫克 DNA( 3 87± 2 1 .2 )、( 3 52± 1 8.2 )fmol,其离解常数 ( kd)值分别为 ( 4.8± 0 .4 )、( 3 .8± 1 .0 ) nmol;细胞核雌二醇受体 ( NER)分别为每毫克DNA( 1 2 69.58± 1 56.4 2 )、( 578± 2 1 .4 ) fmol,其 kd值分别为 ( 5.8± 1 .4 )、( 3 .4 8± 1 .0 ) nmol;细胞质孕酮受体 ( CPR)分别为每毫克 DNA( 3 4 3 .0± 51 .4 )、( 1 48± 4 1 .0 ) fmol;细胞核孕酮受体 ( NPR)分别为 ( 3 2 4± 6.9)、( 1 1 5± 2 .4 ) fmol。发情期和间情期子宫 NER含量较长白猪高 ( P <0 .0 5) 。
- 张德福王凯王英陈茵张平王建荣
- 关键词：枫泾猪发情周期子宫受体繁殖生理
