王思涵
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- CD147慢病毒表达载体的构建及稳定转染A549细胞系的建立被引量：1
- 2012年
- 背景与目的 CD147是一类位于肿瘤细胞膜表面的跨膜糖蛋白,可促进肿瘤的浸润和转移。本研究拟构建CD147慢病毒表达载体,建立稳定过表达CD147的人肺腺癌A549细胞系,观察过表达CD147后对MMP-9及细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 RT-PCR扩增CD147基因全长序列,将序列插入pEGFP载体,构建pEGFP-CD147慢病毒表达载体,随后转入293FT细胞中进行慢病毒包装,用获得的慢病毒毒液感染人肺腺癌细胞系A549,建立稳定过表达CD147的A549细胞系。Real-timePCR检测MMP-9的变化情况,CCK-8及Transwell法检测人肺腺癌细胞增殖、侵袭能力的变化。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pEGFP-CD147慢病毒表达载体质粒。Real-timePCR和Westernblot检测显示,与对照组相比,转染pEGFP-CD147慢病毒表达载体组的细胞,CD147的表达在mRNA和蛋白两个水平均增高,成功建立了A549-CD147细胞系。上调CD147的表达后,MMP-9的mRNA表达水平明显升高。同时,A549-CD147细胞增殖和侵袭能力明显增加(P<0.05)。结论成功构建CD147慢病毒表达载体和A549-CD147细胞系,过表达CD147可上调MMP-9的表达,增强人肺腺癌细胞的增殖和侵袭能力。
- 杨绍兴汤传昊王思涵宋三泰刘晓晴
- 关键词：CD147慢病毒载体转染
- 稳定低表达CD147的人肺腺癌细胞系的建立及对细胞增殖的影响
- 2012年
- 目的构建CD147慢病毒干涉载体,建立稳定下调CD147表达的人肺腺癌A549细胞系,观察下调CD147表达后人肺腺癌细胞增殖能力的变化。方法将携带不同特异性干涉序列的3个DNA片段分别插入干涉质粒pSicoR中,构建pSicoR-siCD147慢病毒干涉载体(pSicoR-siCD147-1,pSicoR-siCD147-2,pSicoR-siCD147-3)。分别将构建好的载体转染入293FT细胞中,进行慢病毒包装。建立稳定下调CD147表达的细胞系。利用CCK-8法检测细胞增殖能力的变化。结果与结论构建了pSicoR-siCD147慢病毒干涉载体,RT-PCR和实时PCR结果显示pSicoR-siCD147-2的干涉效率最高。建立了稳定下调CD147表达的人肺腺癌A549细胞系(A549-siCD147)。CCK-8法检测发现A549-siCD147细胞的增殖能力显著性下降(P<0.05),下调CD147的表达可以使人肺腺癌细胞的增殖能力受到明显抑制。
- 杨绍兴汤传昊王思涵宋三泰刘晓晴
- 关键词：CD147慢病毒属RNA干涉细胞增殖
