王楷宬
- 作品数：98 被引量：286H指数：9
- 供职机构：中国动物卫生与流行病学中心更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项重大动物疫病防治关键技术引进项目国家科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生政治法律生物学更多>>
- 等温扩增技术概述及其在动物病原检测中的应用被引量：13
- 2022年
- 等温扩增技术是一种可以在恒定温度下进行体外核酸扩增的技术,近几年其研究热度很高。本文从技术原理、优缺点及在动物病原检测应用等方面,对环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶等温扩增技术、依赖核酸序列扩增技术(NASBA)、交叉引物等温扩增技术(CPA)和赖解旋酶等温扩增技术(HDA)等5种常见等温扩增技术进行了综述。LAMP技术操作简单,不依赖特殊设备,但引物设计较为复杂,研发多重LAMP检测方法有很大困难。重组酶等温扩增技术不受场地条件约束,扩增时间短,但容易造成气溶胶污染,因此一般用于实验研究。NASBA技术扩增效率高,不易产生污染,但成本偏高,操作相对复杂,在目前疫病检测研究中的应用逐渐减少。CPA技术操作相对简单,灵敏度高,特异性好,但结果判断受主观因素影响易造成假阳性或假阴性。HDA技术引物设计相对简单,但反应体系较为复杂,因此不适合扩增长序列。不同的等温扩增技术需要根据实际需求和场景条件来选择。等温扩增技术作为一种新兴技术具备许多优点,但仍需要不断改进,未来与微流体芯片、纳米金、CRISPR等技术联合应用,将会实现更加快捷、准确、简便的检测,从而为动物疫病检测提供更好的服务。
- 禹兰平王楷宬潘俊慧张富友杨文静周凯钰太崔成都崔成都孙福亮
- H9亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2019年
- 为建立一种快速准确检测H9亚型禽流感病毒基因的检测方法,根据GenBank中H9亚型禽流感病毒血凝素编码基因进行荧光检测引物和探针设计,建立了一种针对H9亚型禽流感病毒的荧光RT-PCR检测方法。利用该方法进行灵敏度和特异性检测,并用本方法和国家标准中的荧光RT-PCR检测方法,同时对临床样本进行检测。结果显示,仅H9亚型禽流感病毒出现了正常荧光检测曲线,而其他病毒及阴性对照均未出现;检测灵敏度为RNA终浓度10-4 ng/μL(1.30×104 copies/μL);临床样本检测结果与国标方法一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异性强、灵敏度高,可用于H9亚型禽流感病毒检测。
- 王楷宬王素春樊擎莹孙亚伟康京丽汪洋刘华雷黄保续
- 关键词：H9亚型禽流感病毒
- 链球菌猪主要致病种和型多重PCR检测方法的建立被引量：16
- 2011年
- 根据GenBank中登录的链球菌属保守基因(EF-TU)、猪链球菌种保守基因(GDH)、C群马链球菌兽疫亚种保守基因(M-like)、猪链球菌型特异性基因(SS1型CPS1I、SS2型CPS2J、SS7型CPS7H和SS9型CPS9H)的序列设计合成7对引物,建立了一次性在属、种、型3个水平上检测链球菌猪主要致病种和型(C群马链球菌兽疫亚种和猪链球菌1、2、7、9型)的多重PCR方法。结果显示,该多重PCR在退火温度为61℃时可一次性扩增出7条符合预期大小、序列正确的基因条带;特异性试验和准确性试验结果均符合预期,无非特异性、交叉反应、假阳性、假阴性条带出现;对16株临床分离鉴定链球菌的检测结果与细菌学鉴定及单纯PCR鉴定的符合率均为100%;敏感性为0.08ng/μL;5次重复试验的结果也完全一致。结果表明,建立的多重PCR方法具有高度特异性、准确性、敏感性和稳定性,适用于猪场链球菌病的监控和流行病学快速诊断。
- 邹君王楷宬田莉莉王旭远曾巧英范伟兴
- 关键词：链球菌猪链球菌马链球菌兽疫亚种多重PCR
- 高通量测序分析1株H7N9流感病毒的全基因被引量：3
- 2016年
- 为探索利用高通量测序开展H7N9亚型流感的监测、全基因分析和溯源研究的方法,使用Ion Torrent PGM测序仪对1株H7N9流感病毒进行了全基因测序,分析了此毒株的基因组特性和进化特征。结果显示,该毒株与2013年引起我国华东地区疫情的H7N9流感毒株的亲缘关系较近;纵观在不同年代和地点分离的H7N9流感病毒的6个内部基因,2013年疫情之前和之后的H7N9流感病毒存在明显差异。
- 王楷宬邱源庄青叶张笑春王通陈继明
- 关键词：高通量测序基因组
- 冠状病毒通用核酸检测方法
- 本发明属于生物技术领域，它确立了甲冠状病毒属、乙冠状病毒属、丙冠状病毒属、丁冠状病毒属等冠状病毒的通用核酸检测方法，含有三个技术要点：①确立了核酸检测所需要的引物序列；②确立了检测反应种类；③确立了检测反应体系和反应条件...
- 庄青叶王素春王楷宬刘朔陈继明
- 文献传递
- 甲型流感病毒快速分型与分析软件的开发与试用
- 2016年
- 甲型流感病毒危害动物和人类健康,其亚型多、突变率高、易发生重配,因此对其进行检测及流行毒株基因分析尤为重要。为解决传统方法进行大量甲型流感病毒序列分型和分析时存在的费工耗时、人为错误多等问题,结合实际工作需要,使用Perl语言建立了一套lunix系统下的甲型流感病毒快速分型与分析软件,并试用其对Gen Bank中所有宿主为鸭的甲型流感病毒进行了分析。结果显示,该软件可在较短的时间内完成大量序列的分析、分型和遗传进化研究,可用于甲型流感病毒的大规模流行病学调查分析。
- 王楷宬王通庄青叶邱源彭程王素春陈继明
- 关键词：甲型流感病毒基因分析遗传进化
- 一种H7亚型禽流感病毒检测方法
- 本发明提供一种基于分子生物学的快速检测H7亚型禽流感病毒的方法，以实现对H7亚型禽流感病毒进行安全、特异、快速、灵敏、简单的快速检测，从而弥补现有传统检测技术的不足。与普通的RT‑PCR法相比，RT‑RAA法是在恒温条件...
- 王楷宬王素春黄保续
- 文献传递
- 禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：9
- 2019年
- 为满足禽流感病毒高通量快速检测的需要,建立了一种能够检测各亚型禽流感病毒的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性和灵敏度进行评估,使用该方法与农业行业标准NY/T772—2013中的禽流感病毒RT-PCR方法同时进行临床样品检测。结果显示,该方法检测耗时短、特异性好,检测下限达10-4 ng/μL,与传统的RT-PCR方法阳性符合率为100%。结果表明,本方法能实现对禽流感病毒的安全、特异、快速、灵敏、简单、高通量检测,从而弥补了现有传统检测技术的不足。
- 王楷宬王素春朱琳仲焕香黄保续
- 关键词：禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR
- 猪链球菌精氨酸脱亚氨酸酶序列分析及其PCR检测被引量：1
- 2007年
- 对9株猪链球菌2型重庆分离株的精氨酸脱亚氨酸酶基因进行克隆测序,结果表明该基因长度为1231bp,与Genbank发表的该基因序列相比,核苷酸同源性高于99%,推导的氨基酸同源性高于96%。根据精氨酸脱亚氨酸酶基因的测序结果建立扩增片段长度为237bp的PCR检测方法,35株猪链球菌致病株中,30株精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阳性,有5株精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阴性;14株正常猪扁桃体分离株中,11株为精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阳性,3株为精氨酸脱亚氨酸酶基因的PCR检测阴性;猪链球菌1型、7型、9型、13型、1/2型各一株,均能扩增出精氨酸脱亚氨酸酶基因的片段。
- 张东王楷宬汤明黄保续范伟兴
- 关键词：猪链球菌2型PCR检测
- 一种甲型流感病毒快速分型与分析流程
- 本发明属于生物技术领域，它确立了一种甲型流感病毒快速分型与分析流程，可以快速、准确对甲型流感病毒进行分型、分析和遗传进化研究，其包含3个技术要点：（1）筛选了适合进行甲型流感病毒分型的参考序列；（2）构建了甲型流感病毒分...
- 王楷宬王通陈继明庄青叶王素春彭程
