王生育
- 作品数：54 被引量：77H指数：5
- 供职机构：厦门大学生命科学学院抗癌研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法
- 一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法，涉及树突状细胞。胃癌细胞MGC-803总RNA的提取、鉴定；SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽的合成；外周血单个核细胞的分离；单核细胞的获取；未成熟树突状细胞...
- 陈玉强王勇军颜江华王生育
- 文献传递
- 肺癌靶向血栓蛋白hu3D3V_H-tTF的表达及活性鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的制备一种用于肺癌血管靶向栓塞治疗的融合蛋白hu3D3VH-tTF,并鉴定其生物学活性。方法利用重叠PCR技术构建tTF与hu3D3VH的融合基因,克隆至表达载体pET22 b(+),在E.coliBL21(DE3)中表达,镍亲和色谱柱纯化目的蛋白。ELISA检测融合蛋白hu3D3VH组分与肺腺癌细胞A549选择性结合活性,凝血实验和FⅩ活化实验鉴定融合蛋白tTF组分的促凝血活性。结果获得序列正确的hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重组子,融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达。纯化后的融合蛋白与肺腺癌细胞A549具有选择性结合活性,并能活化FⅩ、有效促发血液凝固。结论成功构建hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重组子,hu3D3VH/tTF融合蛋白具有hu3D3VH的选择性结合能力同时具有TF的促凝血活性,为开展选择性肺肿瘤血管血栓性栓塞研究奠定了基础。
- 颜江华王生育王阶平王勇军黄志平王臻
- 关键词：TTF血栓肺癌
- 蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B催化活性区的原核表达及活性分析被引量：2
- 2008年
- 从GenBank获得人PTP1B催化活性区(PTP1Bc)氨基酸序列(1～301aa),通过重叠PCR获得PTP1Bc基因。构建pET-22b(+)/PTP1Bc原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),阳性重组子IPTG诱导表达,Ni柱纯化蛋白。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。Western blotting结果表明所得的蛋白可与抗PTP1B抗体发生特异性结合;酶活实验证实复性的蛋白具有一定的磷酸酶活性。PTP1Bc基因的构建、表达纯化及活性分析,为进一步的功能研究奠定了基础。
- 王生育颜江华潘阳霖李学军陈忠
- 关键词：基因表达蛋白纯化活性分析
- 右旋糖酐定量检测试剂盒的研制及其初步应用
- 右旋糖酐(Dextran)，又名葡聚糖，由Leuconostoc mesenteroides等微生物产生的酶聚合葡萄糖而成或葡萄糖通过化学聚合而成。右旋糖酐广泛应用于医药、食品、化工等领域。在医学领域的应用主要包括:作为...
- 王生育
- 关键词：右旋糖酐试剂盒
- 双特异抗体CD3xAFP介导CIK细胞对AFP阳性肝癌细胞的杀伤应用被引量：1
- 2010年
- 目的建立双特异抗体anti-CD3xanti-AFP介导CIK细胞对AFP阳性肝癌细胞的特异杀伤。方法利用anti-CD3抗体联合细胞因子IL-2活化人外周血淋巴细胞扩增CIK细胞,流式细胞仪分析细胞表型。柠檬酸三钠还原法制备金溶胶,物理吸附制备载荷anti-CD3和anti-AFP两种单抗的胶体金制剂,光镜检测抗体活性。AlarmaBlue法检测双特异抗体介导CIK细胞对肝癌细胞HepG-2和宫颈癌细胞Hela的杀伤活性。结果 14 d活化后的人外周血淋巴细胞鉴定为CIK细胞。抗体活性检测证实纳米金制剂保持了anti-CD3xanti-AFP的双特异抗体活性,在其介导下,CIK对特异靶细胞HepG-2杀伤效率为42%,提高11.4%(P<0.05),而对非特异靶细胞Hela杀伤无明显变化。结论金标双特异抗体anti-CD3xanti-AFP可以加强CIK细胞对AFP阳性肝癌细胞的杀伤作用。
- 支黎明车莹颜江华张顺浪王生育马飞剑张琼许健
- 关键词：CIK细胞肝癌细胞双特异抗体AFP
- 抗人NRP-1单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞株的促凋亡作用
- 2014年
- 目的:研究抗人神经菌毛素1(neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞的促凋亡作用。方法:小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 MAb)并用rProtein A亲和柱纯化,间接ELISA检测抗体的滴度水平。细胞免疫荧光检测NRP-1蛋白在结肠癌细胞株LOVO上的表达,MTT法检测NRP-1 MAb对LOVO的生长抑制作用,DAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态,ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测NRP-1 MAb诱导LOVO细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 MAb纯度为95%、效价为2.56×10-5;细胞免疫荧光染色显示NRP-1定位于LOVO细胞膜;MTT法检测和ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,NRP-1 MAb对LOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;DAPI染色·荧光显微镜观察发现,NRP-1MAb可以诱导LOVO细胞核浓缩与碎裂;Western blotting检测到在NRP-1 MAb作用下,LOVO细胞裂解液cleaved caspase-3条带信号增强、caspase-3条带信号减弱。结论:纯化的NRP1 MAb能抑制LOVO细胞的生长并诱导其凋亡。
- 曹畅吕莎李哲王显江杨云罗芳洪王生育颜江华史涛
- 关键词：单克隆抗体LOVO细胞株促凋亡作用
- (RGD)3-SA:tTF-B复合体系的构建及其活性鉴定
- 目的：构建一种新型的复合物,以RGD和tTF分别与Streptavidin(SA)和Biotin(B)构成高效的结合体系,B与SA强大的结合力具有放大效应,实现在靶位上的快速富集、高效促发外源性凝血通路,导致局部肿瘤血管...
- 陈小丽王生育曹畅吕莎罗芳洪颜江华
- 关键词：融合蛋白靶向治疗
- 文献传递
- RGD-FasL基因的构建、表达、纯化及其活性分析被引量：4
- 2008年
- 目的构建适于原核表达的重组蛋白RGD-FasL表达载体,并进行重组蛋白的表达纯化及抗肿瘤活性分析。方法通过重叠PCR将RGD序列插入到FasL基因的N端,获得RGD-FasL基因,构建pGEX-5X-1/RGD-FasL表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST柱纯化。采用体外黏附实验、MTT比色法、流式细胞法检测融合蛋白的功能。结果通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因。目的蛋白以分泌的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。体外黏附实验表明所纯化的融合蛋白可与宫颈癌Hela细胞发生特异结合。MTT比色法与流式细胞技术均表明纯化的融合蛋白能特异性地诱导肿瘤细胞发生凋亡。结论重组蛋白RGD-FasL表达载体的成功构建、表达、纯化及活性分析,为进一步的功能研究奠定了基础。
- 苏金华李文珠王生育黎之静陈彩霞庄国洪
- 关键词：靶向治疗凋亡
- H5亚型禽流感病毒DAS-ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2020年
- 目的制备特异性和灵敏度较高的抗H5亚型禽流感病毒单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA方法,为进一步研究检测试剂盒提供基础。方法以H5亚型禽流感病毒为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合及杂交瘤细胞筛选,获取抗H5亚型禽流感病毒单克隆抗体,用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效价及特异性。HRP标记单抗并建立双抗夹心ELISA检测方法,经方阵试验优化ELISA反应体系。结果获得配对的2株可分泌特异性单抗的阳性细胞株3C9、6F5,腹水抗体效价在1∶105以上,IgG亚类均为IgG2a,轻链为κ链。优化的双抗夹心检测体系能检测多种H5亚型禽流感病毒,与H9亚型和H7亚型均无交叉反应。结论成功获得高效价的抗H5亚型禽流感病毒单克隆抗体,建立抗H5亚型禽流感病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA检测方法。
- 黄璐林一王厚照王生育陈美玉
- 关键词：禽流感病毒单克隆抗体
- 一种葡聚糖的夹心酶联免疫吸附测定方法
- 一种葡聚糖的夹心酶联免疫吸附测定方法，涉及葡聚糖。1)酶标反应板的包被；2)酶标反应板的封闭；3)加检测样品；4)加酶标二抗；5)加底物显色；6)终止反应；7)OD值的测定。杂交瘤细胞株D9保藏编号为CCTCC？NO：C...
- 颜江华王生育罗芳洪吴婷王勇军
- 文献传递
