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用精原干细胞移植技术制作转基因动物的研究前景被引量：10: 2005年; 在生物科学、生物医学、畜牧业科学和生物反应器的研究中,转基因动物是非常有用的工具.然而,最常用的制作转基因动物的方法,如原核显微注射和核移植效率都非常低.在最近10年中,研究人员利用精原干细胞移植技术发明了一系列新方法.其中的一些方法一旦与遗传修饰方法相结合,就会形成一套制备转基因动物的新方法.本文综述了与转基因动物制作相关的精原干细胞移植研究成果,如精原干细胞移植技术、精原干细胞的冷冻保存方法、精原干细胞移植受体的准备、精原干细胞的长期增殖和传代培养、精原干细胞的遗传修饰及外源基因的遗传特性等,描述了用精原干细胞移植技术制作转基因动物的一整套方法.根据所用供体和受体的不同,将这种新的转基因动物制作方法分为两类:同种移植法和同体移植法.这一研究领域的进展虽然迅速,但是每一种方法仍然有潜在的困难有待于克服.本文对这些新方法的优点和目前存在的问题进行了探讨.; 吴应积罗奋华旭日干; 关键词：精原干细胞睾丸转基因动物哺乳类干细胞移植生物科学

绒山羊GDNF基因的克隆及其对精原干细胞增殖分化调控的研究: GDNF(glial cell live-derived neurotrophic factor)对精原干细胞自我更新和分化有着重要的调控作用.在睾丸组织中,Sertoli 细胞分泌产生 GDNF,作用于精原干细胞表面的...; 苏慧敏罗奋华张岩张学明侯越吴应积; 关键词：绒山羊精原干细胞增殖分化; 文献传递

大鼠发育第6天与第8天睾丸组织基因表达差异的分析: 2011年; 目的检测大鼠精原干细胞早期发育过程中第6天与第8天睾丸组织的差异表达基因。方法通过基因芯片技术，利用Roche．Nimble Gen公司大鼠12×135K全基因组表达谱芯片分别与第6天和第8天睾丸组织的cDNA进行杂交。比较两个样品差异表达的基因。结果差异表达基因700个，表达上调的基因共295个，表达下调的基因共405个。参与了1407个基因功能分析条目；参与了46个生物学通路。结论大鼠精原干细胞早期发育过程中，精原干细胞的发生与增殖是一个多基因参与、多因素作用和多阶段进展的过程。; 刘陶迪罗奋华于泊洋萨初拉吴应积; 关键词：精原细胞寡核苷酸序列分析干细胞

6天龄与10天龄大鼠的睾丸组织的基因差异表达被引量：1: 2012年; 通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12×135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因组表达差异分析。结果显示:具有2倍以上的差异表达基因有4298个,其中表达上调的基因共1878个,表达下调的基因共2420个。这些差异表达的基因中有3154个基因具有基因本体注释,参与了154个生物学通路。进一步分析表明具有8倍以上差异表达的基因有13个,这些基因参与了生物学过程、细胞组分和分子功能等基因本体分类,进一步选择3个差异表达的基因,LOC686076、Cxcl6和Trib3,做了实时定量RT-PCR检测。其结果趋势与芯片数据一致。因此,我们初步认为精原干细胞的发生与增殖在大鼠早期的发育过程中已经有大量的基因参与,是一个多基因协调表达的过程。; 刘陶迪罗奋华于泊洋吴应积; 关键词：睾丸组织精原干细胞基因芯片

用体外培养的牛乳腺上皮细胞检测乳腺生物反应器表达载体的方法: 乳腺生物反应器的制备是生物工程领域研究的热点。然而乳腺生物反应器研究和开发的周期长,成本大,风险高。因此,在生产转基因动物之前对所构建的乳腺特异表达载体的合理性和有效性进行检测是非常必要的。目前,国内外普遍采用制作转基因...; 多曙光吴应积罗奋华旭日干; 文献传递

抗体分离纯化技术的研究进展被引量：6: 2008年; 制备高特异性、高效价的抗体是实验免疫学技术的基础,抗体质量的高低,将直接影响试验的成败。抗体的制备有两个途径:一是一般通用的方法,以纯化的抗原免疫动物,获得多克隆抗体;二是应用杂交瘤技术制备单克隆抗体。但不论用何种技术制备的抗体都需要进行纯化。重要的是根据抗体的性质和来源选择一个合适的分离纯化方法。对当前的纯化方法进行了一个简要的综述。; 侯越罗奋华吴应积; 关键词：抗体纯化

绵羊tnp2基因的克隆及其在体外共培养系统中圆形精子细胞的转录分析被引量：2: 2009年; 过渡蛋白2基因(tnp2)是圆形精子细胞特异表达的基因。为了开展绵羊圆形精子细胞标记基因的研究,根据GenBank上已公布的牛的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR和分子克隆方法,克隆了蒙古绵羊tnp2基因cDNA部分编码区序列。DNA序列测定结果与牛的核苷酸序列比对,同源性为95.3%。根据绵羊tnp2基因的cDNA序列设计引物,对共培养的四月龄绵羊睾丸生殖细胞进行RT-PCR鉴定。结果显示体外共培养的绵羊睾丸生殖细胞一直到第十周后仍有圆形精子细胞产生。绵羊tnp2基因的cDNA克隆和序列测定为进一步研究绵羊精子发生过程奠定了基础。; 白音巴图罗奋华胡甜园侯越吴应积; 关键词：绵羊克隆

绵羊精原细胞Gfrα1基因的克隆与原核表达载体的构建: 本文研究结果表明，克隆的绵羊Gfral的序列与牛、人、小鼠、大鼠Gfral序列有很高的同源性。克隆绵羊Gfral基因编码区的全序列，制备Gfral基因的抗原蛋白并诱导产生多克隆抗体，从而对体培养体系中的绵羊精原干细胞进行...; 刘燕罗奋华吴应积; 关键词：绵羊精原细胞基因克隆原核表达载体; 文献传递

大鼠曲细精管生殖细胞体外共培养和精子发生过程的观察被引量：9: 2007年; 目的建立体外长期共培养体系和观察方法,为精子发生过程的研究提供细胞模型。方法采用大鼠曲细精管生殖细胞及支持细胞共培养的方法,对睾丸生精细胞作显微镜观察。结果共培养的支持细胞和生精细胞在体外存活超过6个月。在共培养期间,观察到精母细胞、圆形精子细胞和长形精子细胞。结论在不添加任何细胞因子和生长因子的情况下,大鼠曲细精管生殖细胞长期增生分化,不断产生精子细胞。这一结果暗示组织块和共生的支持细胞可为生殖细胞的增生和分化提供必需的细胞因子。该方法为体外研究精子发生过程提供了实验依据。; 张岩罗奋华吴应积; 关键词：生殖细胞共同培养技术精子发生

精原干细胞移植法制作乳腺特异表达NT-3转基因羊: 吴应积罗奋华旭日干张学明苏慧敏张岩侯越白音巴图萨初拉于泊洋; 一、项目主要内容及技术、经济指标　　1、构建人神经生长因子-3（NT-3）的羊乳腺细胞特异表达载体。　　其技术指标为：用分子克隆方法构建人NT-3基因羊乳腺细胞表达质粒载体，DNA重组质粒载体用PCR法、限制性内切酶分析...; 关键词：; 关键词：分子克隆精原干细胞乳腺细胞质粒载体 NT-3

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罗奋华