罗学来
- 作品数：38 被引量：168H指数：9
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
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- 高表达蛋白hSav1对人胚肾HEK293增殖能力的影响
- 2010年
- 目的 观察高表达人Salvadorl（hSav1）蛋白对人胚肾293（HEK293）细胞增殖的影响.方法 构建含有绿色荧光蛋白（GFP）的hSav1质粒GFP-N1-hSav1;将构建好的GFP-N1-hSav1质粒在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察质粒转染效率;分别在转染后12、24、36、48 h通过噻唑蓝（MTT）比色法计算细胞增殖抑制率,抑制率=[（对照-空白）-（给药-空白）]/（对照-空白）×100%;转染后36 h加入5-溴-2＇-脱氧尿苷（BrdU）,通过其掺入比率来显示hSav1对细胞增殖的影响.结果 质粒GFP-N1-hSav1构建成功,转染效率为70%-80%左右,蛋白hSav1明显高表达;MTT结果显示转染质粒后12、24、36、48 h,高表达蛋白hSav1组的细胞增殖抑制率分别为2%、5%、15%、23%,而阴性对照分别为2%、3%、2%、2%;BrdU结果显示,在HEK293细胞中高表达蛋白hSav1后细胞增殖抑制率为（27.3±3.8）%,阴性对照组的细胞增殖抑制率为（12.9±5.3）%,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 在人胚肾HEK293中高表达蛋白hSav1可明显抑制细胞增殖能力.
- 李兆明董硕刘韦成蔡少鑫罗学来李小兰陶德定严群龚建平胡俊波
- 关键词：细胞增殖人胚肾细胞
- 胃肠间质瘤治疗的疾病进展和治疗策略（附385例分析）被引量：1
- 2015年
- 目的了解胃肠间质瘤治疗的疾病进展特点及相应治疗结果。方法回顾性分析于2004年9月至2013年12月之间纳入胃肠间质瘤援助项目数据库的病人共385例，重点收集肿瘤基本情况、初始治疗、疾病进展、再次治疗策略、基因突变、疗效评估等信息，进行统计比较分析疾病进展的影响因素及治疗效果差异。结果胃肠间质瘤有较高的疾病进展率，疾病进展率受危险度、肿瘤部位、是否破裂、基因突变类型影响较大（P均〈0.05）。不同治疗策略临床获益率不同。结论个体化、精细化的治疗策略对于胃肠间质瘤疾病进展后的治疗十分重要，应积极推荐所有胃肠问质瘤病人进行基因突变检测。
- 吴剑宏江旭林来森艳徐丰刘鹭童宜欣罗学来高纯胡俊波
- 关键词：胃肠间质瘤疾病进展基因突变
- 痔手术严重并发症19例被引量：3
- 2017年
- 目的痔手术后的严重并发症预防及治疗。方法对2010年6月至2016年6月华中科技大学同济医学院附属同济医院收治及院外会诊19例痔手术后的严重并发症病人进行回顾性分析。结果 19例痔手术后严重并发症病人,包括5例吻合口裂开,4例直肠穿孔,6例术后大出血(其中2例合并血友病),4例肛门狭窄,均获治愈。结论痔手术虽然相对简单,但术后并发症并不少见,增加对疾病的理解,及时和恰当的处理可以避免病症的加剧甚至生命危险。
- 黄丹魏欣吴剑宏罗学来邹游杨传永曹志新
- 关键词：痔上黏膜环形切除术吻合口瘘直肠穿孔
- HAX1和EGFP共表达重组腺病毒载体的构建、鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的构建和鉴定HAX1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体。方法采用DNA重组技术，将目的基因HAX1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒pAdTrack—CMV中，并转化于大肠埃希菌DH5a；筛选出重组质粒pAdTrack—CMV—HAX1，并在BJ5183细菌中与pAdEasy-1质粒进行同源重组，产生重组腺病毒载体；用lipofectamine将其转染HEK293细胞，包装携带全长HAX1的重组复制缺陷型腺病毒pad—HAX1-EGFP，酶切和序列测定鉴定；用制备好的Ad—HAX1-EGFP感染HEK293细胞，流式细胞术检测其感染效率，RT—PCR、Western印迹鉴定外源基因HAX1的表达。BrdU检测感染了Ad—HAX1-EGFP的HEK293细胞增殖情况。结果pAdTrack—CMV—HAX1重组质粒构建成功。pAdTrack—CMV—HAX1质粒与pAdEasy-1质粒同源重组后与预期结果相符。构建好的Ad—HAX1-EGFP能有效感染HEK293细胞；外源基因能在239细胞中有效表达。HAX1高表达的HEK293细胞其增殖率得以提高。结论成功构建了表达HAX1和EGFP共表达的重组腺病毒载体，HAX1能够促进结肠癌细胞HEK293细胞的增殖。
- 李小兰徐向上李兆明王桂华魏欣罗学来刘慎沛肖徽陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：重组腺病毒增殖
- 直肠癌近期局部复发的因素分析被引量：1
- 2004年
- 罗学来杨传永严群龚建平
- 关键词：直肠癌复发淋巴结转移
- GRIM-19基因在结直肠癌中的表达变化及其意义被引量：2
- 2008年
- 目的探讨GRIM-19 mRNA与蛋白的表达在结直肠癌发生、发展中的意义。方法采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法检测40例结直肠癌患者癌组织，正常组织中的GRIM-19 mRNA及蛋白表达情况及测序分析。结果结直肠癌组织中的GRIM-19 mRNA和蛋白水平明显低于正常组织，GRIM-19蛋白表达在癌组织中明显低于正常组织，且GRIM-19蛋白表达水平与结直肠癌分化程度和临床分期有关（P均〈0．05）。结论GRIM-19作为一种抑癌基因和分子标志物，其表达降低及失活可能与结直肠肿瘤的发生、发展有关。
- 龚龙波罗学来王晶刘双又龚建平胡俊波
- 关键词：结直肠肿瘤基因表达免疫组织化学
- 磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3在非小细胞肺癌上皮-间充质转化及迁移中的作用被引量：9
- 2015年
- 目的 观察磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基3（PIK3R3）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达,及PIK3R3对NSCLC细胞株A549和PC-9上皮-间充质转化（EMT）及迁移的影响.方法 分别提取22对NSCLC患者的肿瘤组织和癌旁组织中的总RNA及和7对标本中总蛋白,分别检测PIK3R3mRNA水平和蛋白表达;在A549和PC-9中通过感染慢病毒高表达或抑制PIK3R3后,通过Transwell迁移实验检测其对细胞迁移的影响,通过Western blot法检测上皮细胞钙黏蛋白（CDH1）、波形蛋白（VIM）、蜗牛族锌指1（SNAI1）及蜗牛族锌指2（SNAI2）等EMT相关蛋白的变化,并通过染色质免疫共沉淀法检测SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力,通过双荧光素酶报告系统检测CDH1的转录活性变化.结果 在NSCLC临床标本中,PIK3R3在肿瘤组织中的表达水平高于癌旁组织;在A549和PC-9中高表达PIK3R3后,穿膜细胞数增加[A549 Control：（46 ±3）个,PIK3R3：（92±5）个;PC-9 Control：（25±2）个,PIK3R3：（53±3）个],细胞的迁移能力增强,同时EMT相关的上皮标志蛋白CDH1表达降低,而间质标志蛋白VIM、SNAI1及SNAI2的表达升高,SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力分别增强9.0倍及3.8倍,同时CDH1的转录活性降低70％;而抑制HK3R3的表达后,穿膜细胞数[A549 sh-Control：（58±5）个,sh-HK3R3：（13±3）个;PC-9 sh-Control：（28±5）个,sh-PIK3R3：（10±3）个],细胞的迁移能力减弱,伴随CDH1表达增高,而VIM、SNAI1及SNAI2的表达降低,同时SNAI1及SNAI2结合于CDH1启动子的能力分别降低70％,相应CDH1的转录活性增高3.6倍.结论 在NSCLC标本中PIK3R3的表达增高,在NSCLC细胞株中高表达PIK3R3可诱使其发生EMT,并促进其迁移能力,而抑制PIK3R3的表达可逆转上述过程.
- 杨熹胡福清李海杰兰静芩罗学来龚建平胡俊波
- 关键词：非小细胞肺癌迁移上皮-间充质转化
- RANTES-受体轴在消化道肿瘤及淋巴结中的表达与肿瘤转移的关系被引量：3
- 2008年
- 目的检测RANTES及其受体在消化道肿瘤中的表达并探讨其与消化道肿瘤转移的关系。方法免疫组织化学方法检测35例有淋巴结转移的消化道肿瘤中RANTES及其受体CCR3、CCR5的表达以及RANTES在转移的淋巴结中的表达水平，显微镜下观察阳性率并且用图像分析系统测得吸光度进行分析。琼脂糖平板法检测RANTES对于消化道肿瘤细胞的趋化作用。结果淋巴结转移的消化道肿瘤中RANTES及其受体CCR3、CCR5以及转移的淋巴结中RANTES的阳性表达率分别为80．0％、77．1％、68．6％、74．3％，吸光度值分别为0．1839±0．0442、0．1999±0．0444、0．1825±0．0598、0．1871±0，0371；而对照的无转移组阳性率分别为6．7％、20．0％、13．3％、20．0％，吸光度值分别为0．0502±0．0043、0．0693±0．0243、0．0648±0．0145、0．0913±0．0111。有转移组和元转移组在阳性率和吸光度方面的差异均有统计学意义（P〈0．05）。琼脂糖平板法检测：RANTES对原代肿瘤细胞以及胃癌细胞系AGS的趋化指数分别为1．97和1．79。结论RANTES及其受体在有淋巴结转移的消化道肿瘤中高表达以及RANTES在有转移的淋巴结中高表达可能与肿瘤的侵袭转移相关，其机制可能为淋巴结中高表达RANTES对肿瘤细胞的趋化定向迁移有关。
- 徐向上罗学来曹志新杨传永龚建平吴在德
- 关键词：消化道肿瘤趋化
- 组蛋白赖氨酸残基去甲基化酶4B过表达对乳腺癌细胞MCF-7侵袭迁移能力的影响
- 2014年
- 目的 构建组蛋白赖氨酸残基去甲基化酶4B（KDM4B）过表达乳腺癌细胞株MCF-7,观察KDM4B对MCF-7侵袭迁移能力的影响,并探索其机制.方法 利用KDM4B慢病毒感染乳腺癌细胞株MCF-7,筛选KDM4B过表达稳定细胞株,Western blot法检测MCF-7细胞中KDM4B基因蛋白表达;迁移实验、侵袭实验观察过表达KDM4B对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测细胞上皮-间充质转化相关蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达.结果 Western blot法验证过表达KDM4B的乳腺癌细胞株MCF-7构建成功;迁移实验中过表达KDM4B细胞穿膜数目[（94±8）个]较对照组[（36±6）个]明显增多,侵袭实验中过表达KDM4B细胞穿膜数目[（18±2）个]较对照组[（5±1）个]明显增多,差异均有统计学意义（P＜0.01）;过表达KDM4B细胞中E-cadherin表达量较对照组明显降低,Vimentin表达量较对照组明显增高.结论 过表达KDM4B基因可促进乳腺癌细胞株MCF-7上皮-间充质转化过程,并提高细胞迁移、侵袭能力.
- 李海杰杨熹葛宗庆兰静芩李国东付寅佳穆磊江旭林胡俊波罗学来
- 关键词：乳腺癌上皮-间充质转化迁移
- hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响
- 2009年
- 目的观察hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响，探讨hSav1在Mst1介导的细胞凋亡中的作用。方法构建蛋白hSav1的载体pCMV—HA—hSav1与蛋白Mst1的载体pcDNA／4TO—Flag-Mst1，共转染HeLa细胞。采用相应抗体做二者的免疫共沉淀，以证实蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用；应用细胞免疫荧光共定位，进一步证实二者之间的相互作用。在HeLa细胞中，分别单独或同时转染质粒pcDNA／4TO-Flag—Mst1和pCMV—HA—hSav1，转染36h后，加入凋亡诱导剂顺铂（50μmol／L）作用14h。应用磷脂结合蛋白碘化丙啶（Annexin V／PI）法检测细胞凋亡，观察蛋白hSav1高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响。结果载体pCMV-HA—hSav1与pcDNA／4TO—Flag-Mst1构建成功，测序结果表明无突变或缺失。免疫共沉淀结果显示，蛋白hSav1可以在Mst1抗体的免疫沉淀物中检测出来，蛋白Mst1可以在hSav1抗体的免疫沉淀物中检测出来。细胞免疫荧光的结果显示，二者的荧光在细胞内存在共定位，并可充分融合。HeLa细胞中，单独Mst1蛋白高表达组的细胞凋亡率为24．5％±2．4％，单独hSav1蛋白高表达组与对照组比较，无明显细胞凋亡。蛋白Mst1和hSav1高表达组的细胞凋亡率为39．3％±4．0％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论蛋白hSav1与Mst1在HeLa细胞内存在相互作用，蛋白hSav1高表达可明显促进由蛋白Mst1介导的细胞凋亡。
- 李兆明刘韦成董硕罗学来李小兰陶德定龚建平胡俊波
- 关键词：蛋白相互作用细胞凋亡HELA细胞
