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Fonsecaea monophora多聚酮合酶基因的扩增及敲除载体的构建被引量：1: 2016年; 目的扩增Fonsecaea monophora中控制黑素合成的多聚酮合酶(polyketide synthases,PKS)基因并测序,构建PKS基因敲除载体。方法扩增PKS基因,根据测序结果设计引物,从Fonsecaea monophora基因组DNA扩增PKS基因5’-同源臂和3’-同源臂,从质粒pBHt1中扩增潮霉素B抗性标记基因(hyg),最后将各片段插入载体PDHt/sk中。结果测序得到5 389bp大小的PKS基因序列,构建了PKS基因的敲除载体,用酶切及测序等方法鉴定载体构建成功。结论成功构建Fonsecaea monophora PKS基因敲除载体,为研究PKS基因及黑素的生物学功能奠定了良好的基础。; 肖星张军民冯姣陈志文陈春梅何娅贺丹孙九峰席丽艳; 关键词：根癌农杆菌

构建以eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体: 2016年; 目的:构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体,为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法:利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP,氯化锂转化毕赤酵母X33,通过含Zeocin(100μg/mL)抗性的YPD培养基筛选,将得到的菌落X33-eGFP以引物3'-AOX/5'-AOX及eGFP-F/eGFP-R进行PCR,产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入,最后甲醛诱导表达。结果:以X33-eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中,测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33-eGFP在蓝色荧光激发下,可观察到发出绿色荧光。结论:成功建立了毕赤酵母X33-eGFP,且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。; 陈志文冯姣蒋敏敏陈春梅肖星何娅易修文陈庭金席丽艳; 关键词：绿色荧光蛋白毕赤酵母克隆

1%卢立康唑乳膏治疗足癣的疗效和安全性评价被引量：5: 2016年; 目的评价1%卢立康唑乳膏治疗足癣的疗效及安全性,并与1%盐酸特比萘芬乳膏对照。方法采用单中心随机单盲对照试验。试验组外用1%卢立康唑乳膏,1次/d,疗程2周;对照组外用1%盐酸特比萘芬乳膏,2次/d,疗程2周。在治疗开始及治疗2周、停药2周时进行观察。结果试验组30例、对照组30例患者完成了观察。在治疗2周时,试验组临床有效率为63.33%,对照组为76.67%,停药2周时试验组和对照组临床有效率分别为93.33%和90.00%;治疗2周和停药2周时真菌学清除率试验组为46.67%和86.67%,对照组为53.33%和80.00%;治疗2周时试验组总有效率为43.33%,对照组为60.00%,停药2周时分别为86.67%和80.00%。试验组和对照组药物不良反应表现为局部刺激,发生率均为3.33%。结果显示1%卢立康唑乳膏治疗足癣的疗效及安全性与1%盐酸特比萘芬乳膏相似(P>0.05)。结论 1%卢立康唑乳膏治疗足癣有效、安全。; 张静蔡文莹肖星马坚池席丽艳; 关键词：特比萘芬足癣

Fonsecaea monophora对巨噬细胞TLR2、TLR4、Dectin-1和TNF-α表达的影响被引量：5: 2014年; 目的探讨F.monophora对巨噬细胞模式识别受体TLR2、TLR4及Dectin-1的表达及介导炎症因子TNF-α分泌的影响。方法 F.monophora分生孢子突变株(色素株,CBS122845)及白化突变株(CBS125149)菌液分别与小鼠巨噬细胞(RAW264.7)共培养,RAW264.7巨噬细胞作为阴性对照。采用Real Time PCR检测各组TLR2、TLR4、Dectin-1和下游信号分子MyD88、NF-κB mRNA的表达情况,流式细胞术检测TLR2、TLR4、Dectin-1蛋白的表达水平,ELISA法检测培养上清中TNF-α因子的分泌情况。结果与对照组比较,CBS122845和CBS125149组中巨噬细胞TLR2、TLR4、Dectin-1和MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达量均升高;与CBS125149比较,CBS122845组中TLR2的mRNA和蛋白的表达量无明显变化,而TLR4、Dectin-1和MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白的表达量升高更明显;与对照组比较,CBS122845组培养上清TNF-α因子的分泌量明显减低,CBS125149组TNF-α因子的分泌量明显升高。结论 TLR2、TLR4、Dectin-1这三个模式识别受体可能共同参与巨噬细胞对F.monophora的识别过程,并可激活下游信号分子MyD88和NF-κB;且CBS122845可以通过抑制TNF-α分泌来抑制炎症反应,维持菌体在巨噬细胞中的长期生存和繁殖。; 蒋丽张军民孙九峰席丽艳蔡文莹肖星; 关键词：TOLL样受体2 TOLL样受体4

5-氨基酮戊酸光动力疗法治疗难治愈重度痤疮1例: 2014年; 报告1例5-氨基酮戊酸光动力疗法(5-ALA-PDT)治疗难治愈重度痤疮。患者男,17岁,因"反复面部丘疹3年,加重3月"就诊。患者皮疹特点:双侧面颊部大片红斑、丘疹、结节、脓疱、囊肿伴糜烂、溢脓及结痂等,在外院经多次传统药物治疗均无明显效果。符合难治愈重度痤疮诊断。5%浓度5-ALA光动力疗法治疗6次后获得理想效果。; 蒋丽张军民曹翠香肖星; 关键词：5-氨基酮戊酸光动力疗法

原生质体介导马尔尼菲青霉基因转化体系的优化: 2016年; 目的优化原生质体介导的马尔尼菲青霉转化体系,为其基因功能研究提供良好的平台。方法通过原生质体介导将构巢曲霉（Aspergillus nidulans）pyrG基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株ligD（pyrG-,ligD-）中,在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子,运用PCR验证重组子,通过改变影响转化效率的酶解时间、培养基浓度、质粒浓度、不同配方的原生质体洗涤液STC和不同配方的原生质体助融剂PTC 5个条件对体系进行优化。结果 PCR验证A.nidulans pyrG基因成功的插入ligD中,转化子可稳定传代。最适合ligD原生质体转化效率的条件为：酶解时间6h,PTC（60%PEG-4000,100mmol/L Tris-HCl pH8.0,100mmol/L CaCl2）,每100μL原生质体（106-107/mL）加入2.5μg质粒,0.6 mol/L蔗糖SD/SDU筛选/再生培养基,每1μg质粒转化子可达68个左右。结论成功优化了原生质体介导马尔尼菲青霉转化体系的条件,优化后该方法转化效率高,为基因功能研究提供良好平台。; 陈春梅冯姣陈志文肖星蒋敏敏史茗岚贺莉雅蔡文莹席丽艳李希清; 关键词：马尔尼菲青霉原生质体

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肖星