陈实
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 日本血吸虫新基因Sjnanos的克隆、表达及免疫保护效果评估被引量：2
- 2010年
- 目的扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果。方法从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析。将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清特异性抗体效价,蛋白印迹分析检测其抗原性,以看家基因NADH为内参,应用荧光定量PCR技术分析该基因在血吸虫各个阶段的表达状况。结果同源性分析表明,该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的开放阅读框(ORF)为525bp,编码174个氨基酸,理论相对分子量为19.9,PI为8.2。荧光定量PCR技术分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d、42d虫体均有表达,但在18d和13d虫体的表达量明显高于其他天数的虫体,在雄虫的表达量高于雌虫。成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-Sjnanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western-blot分析表明重组蛋白具有较好的免疫原性,动物免疫保护试验获得了31.4%的减虫率和53.8%的肝脏减卵率。结论获得日本血吸虫新的抗原基因Sjnanos,该基因的重组蛋白在小鼠中诱导了部分免疫保护作用。
- 王艳郭凡吉彭金彪李晔洪炀陈实傅志强石耀军林矫矫
- 关键词：日本血吸虫抗原性免疫保护
- 日本血吸虫重组抗原SjPGAM-SjEnol的保护性免疫效果评价被引量：7
- 2010年
- 目的构建日本血吸虫重组表达质粒pET32a-SjPGAM-SjEnol并在大肠埃希菌（E.coli BL21）中表达,观察重组抗原在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法利用生物信息学技术筛选SjPGAM和SjEnol富含人源（HLA）Ⅱ类、鼠源（H2-d）Ⅱ细胞结合表位且与宿主同源性较小的肽段,将对应编码的核苷酸序列进行拼接,构建重组质粒pET32a（＋）-SjPGAM-SjEnol,并在E.coli BL21中表达。用蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组抗原的抗原性。用小鼠实验评估重组抗原的免疫保护效果,即将55只雄性BALB/c小鼠均分成5组,其中3个试验组分别用重组抗原pET32a-SjPGAM-SjEnol（A组）、pET28a-SjPGAM（B组）、pET28a-SjEnol（C组）（各27μg）与206佐剂混合后免疫小鼠,每次间隔2周,共免疫3次。同时设佐剂对照组（D组）和空白对照组（E组）。末次免疫后2周,每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴40±2条,感染后6周,经肝门静脉灌注法收集成虫和检测每克肝虫卵数（EPG）,计算减虫率和肝脏减卵率。各组小鼠分别于免疫前、各次免疫后1周尾部取血和剖杀时收集血清,应用ELISA检测血清特异性IgG抗体水平。结果确定SjPGAM的96~147、SjEnol的233~312肽段为重组片段。PCR扩增出一条含编码这两个肽段的核苷酸序列的重组DNA序列,大小447bp。获得的重组蛋白pET32a-SjPGAM-SjEnol相对分子质量（Mr）为33000。Westernblotting结果显示,该重组蛋白可被日本血吸虫成虫抗原免疫兔血清识别,具有良好的抗原性。小鼠免疫实验结果显示,与空白组相比,A组获得39.7%的减虫率和64.9%的肝减卵率,其减虫率与B组（18.5%）、C组（14.7%）比较,差异有统计学意义（均P〈0.05）;肝减卵率与B组（47.5%）、C组（30.5%）比较,差异也有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。ELISA结果显示,第3次免疫后A组的特异性IgG抗体达到较高水平（2.372±0.268）,与D组（0.490±0.138）�
- 郭凡吉王艳李晔彭金彪洪炀邱春辉陈实傅志强石耀军林矫矫
- 关键词：日本血吸虫烯醇酶多表位疫苗免疫保护
- 牛日本血吸虫重组二价表位抗原间接ELISA检测方法的建立及应用被引量：1
- 2012年
- 为了建立一种更为敏感、特异的牛血吸虫病诊断方法,表达和纯化了日本血吸虫二价表位抗原(pGEX-BSjGCP-BSj23),将重组蛋白以10mg/L浓度包被酶标板,以1∶40 000稀释酶标兔抗牛IgG,建立了检测牛血吸虫病的间接ELISA方法。以SEA抗原作为对照,进行敏感性试验和特异性试验。结果显示,以重组抗原pGEX-BSjGCP-BSj23作为诊断抗原,建立的间接ELISA的特异性明显高于SEA,敏感性与SEA相当。检测现场水牛血清样品,结果阴性符合率为100%,阳性符合率为90.97%。结果表明,建立的ELISA检测方法对牛血吸虫病的诊断具有良好的特异性和敏感性。
- 陆珂李浩石耀军周伟芳陈实朱传刚傅志强杨健美洪炀苑纯秀林矫矫
- 关键词：日本血吸虫间接酶联免疫吸附试验
