陈福广
- 作品数：8 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 旋毛虫感染小鼠肠道菌群的变化被引量：3
- 2014年
- 选取18只BALB/c小鼠进行旋毛虫灌胃,以灌胃前1d作为时间起点,于第0、1、7、14、28天分别收集小鼠粪便,同期选取12只同种小鼠作为对照。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对小鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、梭菌、拟杆菌、直肠真杆菌、柔嫩梭菌以及脱硫弧杆菌进行定量检测。结果显示,双歧杆菌数量在第7、14、28天均显著低于对照组(P<0.01),第1天无变化;乳杆菌第7、14、28天低于对照组(P<0.05),第1天无变化;肠球菌与梭菌在第7、14、28天均高于对照组(P<0.05),第1天无变化;拟杆菌、直肠真杆菌、柔内梭菌以及脱硫弧杆菌均无明显变化(P>0.05)。结果表明,旋毛虫感染可引起小鼠肠道菌群变化,从而引起小鼠肠道菌群失调。
- 王莹苟强李静姜海燕陈福广申凤鸽陈伟李欣然冯嘉轩王新辉曲海娥江倩张巧灵刘波赵颖
- 关键词：旋毛虫肠道菌群RRNA
- 利用信息肽诱导和Cre/LoxP系统构建猪链球菌基因缺失株被引量：4
- 2019年
- 为建立一种高效的猪链球菌(Streptococcus suis)基因缺失方法,本研究利用信息肽诱导DNA片段转化和Cre/LoxP系统去除抗性基因这两种技术,通过在S.suis 05ZYH33的ssu05_1921基因上、下游片段和壮观霉素抗性基因(spc)片段之间引入LoxP位点,采用信息肽GE9诱导构建的DNA片段转化S.suis并发生重组,经抗性筛选快速获得spc替代ssu05_1921基因的缺失株;进一步引入pSET6s/P_(tufA-cre)质粒表达Cre重组酶作用于LoxP位点,去除spc基因,产生无痕ssu05_1921基因缺失株,经测序和RT-PCR验证缺失正确。本研究建立的该方法简单、快捷、阳性率高,为构建S.suis基因缺失株、研究S.suis致病机制提供了新的选择。
- 刘冉陈福广陈平黄萌萌朱金鲁谢芳孟庆文刘思国刘建华张跃灵
- 关键词：猪链球菌CRE/LOXP系统基因缺失
- Toll样受体2(TLR2)参与猪链球菌诱导的自噬作用被引量：3
- 2013年
- 为证实Toll样受体2(TLR2)是否参与2型猪链球菌诱导的细胞自噬作用,通过阻断TLR2,并建立2型猪链球菌感染J774A.1细胞模型,分别应用荧光定量PCR分析不同处理组细胞TLR2和NF-κB mRNA水平、ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-6含量变化以及Western blot检测细胞内LC3蛋白的表达量。结果显示,TLR2和NF-κBmRNA水平在感染后3h明显高于对照组;与对照组相比,感染组TNF-α含量及LC3Ⅱ表达均明显升高(P<0.01);与感染组相比,阻断TLR2后TNF-α含量及LC3Ⅱ表达均明显降低(P<0.05)。结果表明,2型猪链球菌可激活TLR2及其信号通路,并且该通路的活性影响细胞自噬作用。
- 李文华王莹陈伟黄清花陈福广张巧灵刘波杨振国
- 关键词：TOLL样受体22型猪链球菌巨噬细胞自噬
- 2型猪链球菌SsU05-0474的表达纯化及单克隆抗体制备被引量：3
- 2016年
- 为了鉴定2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,Ss2)菌毛骨架蛋白Ss U05-0474(本文中简称SsMps)在菌体中的位置和存在形式,本研究以2型猪链球菌05ZYH33菌株基因组作为模板,PCR扩增菌毛骨架蛋白基因Ss U05-0474,将其克隆至表达载体pET22b,构建重组质粒pET22b/SsMps,转化至E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达SsMps蛋白,并通过亲和层析纯化。纯化的SsMps蛋白免疫BALB/c雌鼠,利用细胞融合筛选制备该重组蛋白的单克隆抗体。结果显示,SsMps蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,分子质量大小为45 k Da。每升大肠杆菌培养物可获得SsMps重组蛋白约30 mg,纯度大于95%。获得了1株该重组蛋白的单克隆抗体1D9,抗体亚型为IgG1/κ。通过单抗1D9与05ZYH33菌体蛋白组分Western blot,发现该抗体能够特异识别SsMps,并定位出SsMps大部分存在于细胞壁蛋白成分中,呈不同聚体存在。本研究制备的SsMps纯化蛋白及其单克隆抗体为研究SsMps蛋白的功能提供了工具。
- 杨宝玲陈福广谢芳刘思国沈国顺张跃灵
- 关键词：2型猪链球菌蛋白纯化单克隆抗体
- 大肠杆菌侵入肠道肌纤维母细胞
- 2011年
- 将携带绿色荧光蛋白基因的质粒转化E.coli K12中,体外分离培养肠肌纤维母细胞,将E.coli K12与肠肌纤维母细胞体外共培养,观察大肠杆菌是否侵入肌纤维母细胞并在细胞内存活。结果表明:在感染后2 h,大肠杆菌可粘附并侵入肌纤维母细胞,有大量成簇状和散状的大肠杆菌侵入细胞,感染后24 h细胞内仍有少量细菌存活。2h感染率和24 h感染率分别为20.3%和3.25%。本试验首次证实大肠杆菌透过细胞膜进入肌纤维母细胞细胞质,为研究肠道肌纤维母细胞在免疫防御中的作用奠定了一定的基础。
- 刘丽丽吴腾飞魏静元高江明张佳莹黄清花陈伟李静陈福广李文华张巧玲刘波
- 关键词：肌纤维母细胞大肠杆菌存活
- 中性粒细胞杀灭病原体的新途径:胞外诱捕网被引量：8
- 2013年
- 中性粒细胞是天然免疫系统中到达感染部位并清除微生物的第一道免疫防线的主要成员之一。已证实中性粒细胞存在3种杀灭微生物的途径:吞噬清除病原体、分泌抗微生物蛋白颗粒和新近发现的中性粒细胞诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)。NETs由解聚的染色体网状结构和镶嵌其中的抗微生物颗粒蛋白组成,绑定并杀灭多种微生物,包括细菌、真菌、寄生虫和病毒。中性粒细胞通过释放DNA网状结构,形成抗微生物感染的物理屏障和支架结构,限制病原的活动范围,增强抗微生物蛋白的协同作用,并减少对宿主的组织损伤。
- 吴腾飞陈福广黄清华陈伟邓旭明张巧灵刘波
- 关键词：中性粒细胞病原微生物
- 猪链球菌2型SSU05-1311蛋白的表达纯化和多克隆抗体的制备
- 2016年
- 以猪链球菌2型菌株05ZYH 33的基因组作为模板,PCR扩增SSU 05-1311(简称ssFbp)基因,克隆到表达载体pET22b中,构建重组质粒pET22b-ssFbp。该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达SsFbp蛋白,并通过亲和层析纯化。纯化的SsFbp蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备多克隆抗体。结果显示,Ss Fbp蛋白以可溶形式表达,分子质量大小为112ku。每升培养物获得SsFbp重组蛋白20 mg,纯度大于95%。免疫筛选后获得了ss Fbp蛋白的多克隆抗体。Western-blot结果显示,多克隆抗体能特异识别05ZYH33细胞壁蛋白组分中的SsFbp蛋白。本研究为进一步研究SsFbp蛋白的功能及其在致病性中的作用奠定了基础。
- 杨宝玲陈福广谢芳刘思国沈国顺张跃灵
- 关键词：猪链球菌2型多克隆抗体
- 分选酶A在金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎、菌血症和肺炎致病过程中的作用
- 转肽酶分选酶A(SrtA)能够将携带LPXTG基序分选信号的表面蛋白锚定到细胞壁被膜上。这些表面蛋白具有黏附和侵入宿主细胞和组织、逃避机体免疫反应和参与生物被膜形成等生物学功能。为了深入研究分选酶A在金黄色葡萄球菌（St...
- 陈福广
- 关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎菌血症肺炎
- 文献传递
