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杆状病毒双表达系统在H5N1禽流感病毒疫苗研究中的应用: 目的高致病性禽流感严重制约着我国禽类产业链的健康发展,以H5N1为代表的高致病性禽流感病毒能够跨越种问障碍感染人,对公共卫生安全造成极大危害.而预防禽流感的传统疫苗主要是全病毒灭活苗,该类疫苗使用量大,灭活不全易造成散...; 樊惠英林文耀佟铁铸张杰叶昱靳立明张春雷章震廖明; 关键词：禽流感疫苗 H5N1 HA 杆状病毒表达系统

应用猪圆环病毒2型缺失NLS的Cap蛋白建立一种ELISA检测方法被引量：1: 2014年; 本试验通过诱导重组质粒pCold-SUMO-dCap在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性表达的SUMO-dCap融合蛋白,以SUMO-dCap融合蛋白作为包被抗原,建立了一种检测猪圆环病毒2型抗体的ELISA方法.用该方法与商品化试剂盒对267份猪血清进行平行检测,两种方法的符合率为90.26％,该方法的特异性和灵敏性分别为93.33％、97.16％;与猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪口蹄疫病毒和猪瘟病毒阳性参考血清无交叉反应;批内和批间变异系数分别为1.25％～6.37％和6.68％～13.58％.研究结果表明,本试验建立的ELISA方法特异性强、敏感性好、重复性高,为临床上PCV2血清抗体检测和PCV2流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法,为商品化试剂盒开发奠定了良好的基础.; 张春雷陈春丽王强叶昱张杰谢康尚靳立明廖明樊惠英; 关键词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白间接ELISA

表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定被引量：3: 2013年; 通过PCR方法扩增猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)核定位序列部分缺失的ORF2基因(pdCap),将其克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的pBACsurf-1质粒中,得到重组质粒pBACsurf-1-pdCap。再将含有pdCap和gp64的融合基因克隆到杆状病毒并转移到质粒pFastBacTM Dual中,得到重组质粒pFastBac-pdCap。然后将该重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到重组穿梭质粒Bacmid-pdCap。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-pdCap。间接免疫荧光和Western blotting试验结果表明,该重组杆状病毒成功表达了具有良好反应原性的pdCap蛋白。; 靳立明张春雷廖明樊惠英; 关键词：猪圆环病毒2型杆状病毒表达系统

介导分泌表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组杆状病毒的构建被引量：2: 2013年; 应用杆状病毒表达系统,将猪圆环病毒2型ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMDual pH启动子控制下的多克隆位点,引入EGT信号肽取代ORF2原有核定位信号肽以实现在昆虫细胞中分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以便于后期的纯化.将构建质粒转化DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭载体,提取重组Bacmid质粒.将阳性重组Bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞,72 h收集培养上清液获得重组杆状病毒.间接免疫荧光试验和Westernblot表明,该重组杆状病毒可以在昆虫细胞实现猪圆环病毒2型Cap蛋白的分泌表达.; 张春雷靳立明叶昱张杰朱俊高又文廖明樊惠英; 关键词：ORF2基因 CAP蛋白重组杆状病毒

H5N1亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒双表达系统的构建及其在小鼠的免疫原性分析被引量：2: 2013年; 高致病性禽流感严重制约着禽类产业链的健康发展,以H5N1为代表的高致病性禽流感病毒能够跨越种间障碍感染人,对公共卫生安全造成极大危害。而预防禽流感的传统疫苗主要是全病毒灭活苗,该类疫苗使用量大,灭活不全时易造成散毒,并给流行病学监测带来困难。研发更加安全、高效的新型疫苗势在必行。本研究选取H5N1亚型流感病毒的HA蛋白作为靶抗原,构建重组杆状病毒BV-G-H5N1-HA。重组病毒本身可刺激机体天然免疫反应,通过基因改造一方面能在真核细胞内大量表达靶抗原,同时可以将靶抗原展示在重组杆状病毒囊膜表面,兼具DNA疫苗和亚单位疫苗的安全性和有效性。小鼠试验结果表明,BV-G-H5N1-HA免疫组能产生较高水平的中和抗体、HI抗体,BV-G-H5N1-HA免疫组攻毒保护率达91.7%。以上数据表明,BV-G-H5N1-HA可以作为一种新型候选疫苗,为H5N1亚型高致病性禽流感的防控贡献力量,为其他亚型疫苗的研究提供参考。; 樊惠英林文耀佟铁铸张杰叶昱靳立明张春雷廖明; 关键词：禽流感 H5N1 HA 杆状病毒表达系统

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靳立明