黄鹏
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室更多>>
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- 出芽酵母蛋白激酶TOS3的过量表达及其在热胁迫应答中的作用
- 2009年
- 出芽酵母SNF1蛋白激酶参与葡萄糖阻遏和细胞胁迫应答.TOS3可通过磷酸化激活SNF1,参与SNF1调控的信号途径.本研究利用PCR方法扩增tos3基因的蛋白质编码序列,克隆到多拷贝表达载体pYES2/NTA上构建真核表达载体,转化酵母细胞并诱导TOS3过量表达.带HIS6标签的重组TOS3蛋白通过免疫印迹得以鉴定.进一步研究了过量表达TOS3对细胞热胁迫耐受性的影响,发现在热胁迫处理条件下,TOS3过量表达可恢复△_(sn)f1突变体细胞的生长缺陷,表明TOS3可能通过不依赖SNF1的其他信号途径参与细胞对热胁迫应答的调控.
- 钟彦黄鹏郄蓓蓓刘立永刘科Bei-BeiLi-Yong
- 关键词：出芽蛋白激酶SACCHAROMYCESSTRESSSTRESSPROTEINPROTEINGROWTHGROWTH
- 酵母蛋白激酶Sch9激活环磷酸化状态参与热胁迫应答调控被引量：2
- 2012年
- 在酵母(Saccharomyces cerevisiae)中,蛋白激酶Sch9已经被证明与细胞大小、胁迫应答、自噬以及寿命的调控有关.通过不同基因型酵母在固体培养基上的热敏感性研究,发现Sch9的激酶功能与热胁迫相关,进一步通过Sch9特异磷酸化位点抗体的免疫印迹,检测了细胞内Sch9关键的激活环T570位点(PDK1位点)在热胁迫条下的磷酸化状态,发现半乳糖诱导表达的Sch9在热胁迫条件下T570位点去磷酸化,首次证明了Sch9通过调控激酶活性参与细胞热胁迫应答.研究结果揭示了Sch9在胁迫应答中的部分功能,并为生理条件下Sch9调控功能的研究提供了生物化学证据.
- 闾磊郄蓓蓓黄鹏刘科杜林方
- 关键词：热胁迫磷酸化酵母
- Sch9蛋白激酶调控酵母细胞全蛋白的泛素化
- 2012年
- 为探讨蛋白激酶Sch9是否影响细胞蛋白质稳态水平及其在热胁迫时的响应,以野生型、SCH9基因缺失突变体、转sch9基因ΔSch9(SCH9-3HA)酵母为材料,利用特异的泛素抗体,检测长期培养时全蛋白泛素化水平变化.结果表明,Sch9缺失引起细胞全蛋白泛素化水平降低,转sch9基因可以使细胞全蛋白泛素化水平恢复.55℃热胁迫30 min处理,突变体Δsch9全蛋白泛素化水平降低,转sch9基因Δsch9(SCH9-3HA)全蛋白泛素化水平不变,回到正常生长温度时,蛋白泛素化水平也没有改变.外加蛋白酶体抑制剂MG132时,突变体ΔSch9蛋白泛素化水平不受影响,而转sch9基因△sch9(SCH9-3HA)全蛋白泛素化水平显著增加,表明前者是自噬途径降解,而增加部分是通过蛋白酶体途径降解.蛋白激酶Sch9调控细胞全蛋白泛素化水平,以及2个不同的降解途径.
- 郄蓓蓓闾磊黄鹏刘科杜林方
- 关键词：酵母泛素化蛋白酶体自噬热胁迫
- 过量表达的出芽酵母蛋白激酶Ypk1磷酸化调控
- 2013年
- 出芽酵母(Saccharomyces cerevisiae)中的Ypk1与人体蛋白激酶SGK(Human serum-and glucocorticoid-induciblekinase)同源.Ypk1的504位苏氨酸残基是其激活环内的磷酸化位点,也称之为PDK1位点,而662位苏氨酸残基是位于其疏水区的PDK2位点,这两个位点的磷酸化对其激酶活性非常重要.对Ypk1过量表达后其PDK1和PDK2位点的磷酸化调控研究结果显示,Ypk1过量表达后其PDK1和PDK2位点磷酸化水平在对数生长期呈现递增趋势,至平台期趋于稳定并在7 d的时序衰老过程中始终维持较高的磷酸化水平.在野生型细胞中分别过量表达Ypk1T504A和Ypk1T662A两个突变体会导致细胞对渗透压胁迫敏感性增加.而短暂渗透压胁迫处理会导致过量表达的Ypk1的PDK1和PDK2位点部分去磷酸化.研究结果表明过量表达的Ypk1的PDK1和PDK2位点磷酸化在出芽酵母时序衰老及胁迫应答过程中发挥着重要作用.
- 黄鹏郄蓓蓓闾磊刘军杜林方刘科
- 关键词：磷酸化胁迫应答
