倪毓辉
- 作品数：61 被引量：165H指数：9
- 供职机构：南京医科大学第四临床医学院儿科医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省教委自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- resistin基因过表达影响3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢被引量：2
- 2007年
- 目的观察resistin基因过表达对3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢、糖代谢的影响。方法构建大鼠resistin真核表达载体并转染3T3-L1前体脂肪细胞,获得稳定表达resistin基因的细胞株;采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用逆转录PCR技术,检测脂肪细胞分化标志基因及葡萄糖转运体4（glucose transporter4,GLUT4）基因表达变化;采用全自动生化仪比色法,检测脂肪细胞内甘油三酯（triglyceride,TG）、游离脂肪酸（free fatty acids,FFAs）的含量变化。结果（1）resistin基因过表达脂肪细胞中,脂滴出现时间提前,且细胞内布满了小而多的圆形脂滴;（2）resistin基因过表达脂肪细胞中,分化中、晚期标志基因C/EBPα、FAS的mRNA表达水平明显上调,分化早期标志基因Pref-1的表达则明显下调;（3）re-sistin基因过表达脂肪细胞中,胞质内TG、FFAs含量均显著增加;（4）resistin基因过表达脂肪细胞中,分化第2、4、8d的GLUT4基因mRNA表达水平间无显著变化,与正常脂肪细胞中的表达水平差异也无统计学意义。结论resistin基因过表达能够显著干扰3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢,有助于肥胖和胰岛素抵抗的发生,而并不影响GLUT4基因的表达。
- 辜楠郭锡熔倪毓辉刘峰费莉陈荣华
- 关键词：3T3-L1脂肪细胞过表达脂质代谢葡萄糖转运体4
- 人miR-1908在制备促进脂肪细胞增殖药物中的应用
- 本发明基于基因工程领域，公开了人miR-1908在制备促进脂肪细胞增殖药物中的应用。本发明的技术方案为人miR-1908在制备促进脂肪细胞增殖药物中的应用。本发明的研究结果表明在人脂肪细胞中过表达miR-1908可以明显...
- 沈嵘倪毓辉郭锡熔季晨博杨蕾史春梅崔县伟付子毅苗苗
- 文献传递
- 游离脂肪酸对人成熟脂肪细胞中miR-335表达的调控被引量：1
- 2013年
- 目的观察游离脂肪酸（FFA）对人成熟脂肪细胞中miR-335表达的调节作用。方法体外培养人前体脂肪细胞，待生长融合后，采用1一甲基-3异丁基黄嘌呤（MIX）、胰岛素、地塞米松、罗格列酮方案诱导人前体脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞，使用含1mmol／L混合FFA的前脂肪细胞培养基（PAM）进行干预，分别培养4、8、24h后收集细胞，同时设未干预的人成熟脂肪细胞为对照组，采用实时荧光定量PCR技术检测成熟脂肪细胞中miR-335的相对表达量。结果对照组细胞中4、8、24hmiR-335的相对表达量与0h相比差异均无统计学意义（P均〉0．05）。使用snRU6作为内参时，FFA干预人成熟脂肪细胞4、8、24h后miR-335的相对表达量分别为9．03-t-O．31、9．85±2．41和11．23±0．62，与对照组0h相比，差异均有统计学意义（P均〈0．05）；使用miR-103作为内参时，同等时间点miR-335的相对表达量分别为4．73±0．60、5．38±1．25和4．57±0．52，与对照组0h相比，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论FFA可明显上调人成熟脂肪细胞中miR-335的表达，为进一步探索miR-335在脂肪细胞中的功能提供了一定的理论依据。
- 朱璐崔焱倪毓辉徐广峰史春梅郭锡熔季晨博
- 关键词：游离脂肪酸脂肪细胞
- 人miR-1908慢病毒载体构建及在人脂肪前体细胞中的表达验证被引量：1
- 2014年
- 目的构建人miR-1908慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪前体细胞中过表达效果。方法以人脂肪细胞基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-1908区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36h开始观察荧光标记,72h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-1908的相应表达量。结果成功构建人miR-1908慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪前体细胞的效率可达到70%以上,miR-1908过表达水平可接近2倍。结论本研究成功构建了人miR-1908慢病毒过表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪前体细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础。
- 杨蕾季晨博史春梅陈玲庞玲霞夏黎郭锡熔倪毓辉
- 关键词：慢病毒
- miR-1908过表达的人脂源性多能干细胞基因表达谱分析被引量：1
- 2016年
- 目的研究miR-1908对脂源性多能干细胞基因表达谱的影响，并探讨其在肥胖发生过程中的可能作用。方法构建miR-1908过表达的脂源性多能干细胞，利用基因表达谱芯片技术筛选得到与阴性对照组差异表达的基因。挑选3个差异表达基因，利用Real—timePCR技术验证miRNA芯片检测结果。结果基因表达谱芯片结果显示，差异表达的123个基因中，2倍以上上调的基因有69个，下调的有54个，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。将这些基因按照功能分类，分为15组：高分子配合物亚基基因（18／123，14．63％），RNA结合相关基因（16／123，13．01％），凋亡相关基因（14／123，11．38％），细胞程序性死亡相关基因（14／123，11．38％），磷酸酶活性相关基因（9／123，7．32％），蛋白结构域结合相关基因（10／123，8．13％），蛋白磷酸酶活性相关基因（8／123，6．50％），分子成分分解相关基因（5／123，4．07％），肾脏发育相关基因（6／123，4．88％），RNA聚合酶Ⅱ转录启动子基因（9／123，7．32％），泌尿生殖系统发育相关基因（6／123，4．88％），依赖DNA的转录基因（9／123，7．32％），RNA合成相关基因（9／123，7．32％），I型干扰素合成过程相关基因（2／123，1．63％）及I型干扰素合成产物相关基因（2／123，1．63％）。结论miR-1908可能在肥胖发生的过程中发挥调控作用。在下调表达的基因中验证了miR-1908可能直接作用的靶基因，为研究miR-1908在肥胖发生中的作用奠定了基础，同时也为miRNA的生物学功能及其作用机制的研究提供了参考。
- 黄芳延杨蕾尤梁慧季晨博史春梅陈玲庞玲霞倪毓辉郭锡熔
- 关键词：基因芯片
- 抗STEAP4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的制备兔抗人STEAP4多克隆抗体及其特性鉴定。方法应用DNAStar软件对STEAP4的蛋白序列进行分析,选择STEAP4基因编码蛋白的近N端序列合成多肽并与牛血清白蛋白(BSA)交联。以纯化的STEAP4免疫新西兰白兔,制备抗STEAP4蛋白多抗,间接ELISA检测兔血清效价,Westernblot和免疫组织化学法鉴定多抗的特异性。结果得到兔抗人STEAP4多肽抗体,效价达16000。ELISA及蛋白印迹证实兔抗人STEAP4抗体可特异性识别STEAP4多肽。Westernblot结果显示该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为52000。以一抗采用STEAP4多克隆抗体的脂肪组织石蜡切片为检测标本,进行STEAP4组织定位研究,发现STEAP4蛋白表达于脂肪细胞膜;以上结果皆与STEAP4的生物信息学分析一致。结论成功制备了抗STEAP4多克隆抗体,制备的兔抗人STEAP4合成肽抗体可应用于Westernblot和免疫组织化学试验,为后续深入研究STEAP4蛋白的功能奠定了基础。
- 朱春季晨博邱洁张春梅倪毓辉刘峰陈晓慧朱金改费莉郭锡熔
- 关键词：多克隆抗体蛋白印迹
- 肥胖者脂肪组织基因表达谱特征及人类肥胖相关新基因C10orf116的功能研究
- 肥胖是一种常见的能量代谢性疾病，是多种疾病(如：糖尿病、心脑血管疾病)的始发因素，在全球范围内已呈流行态势。近年来，肥胖低龄化的趋势日趋突出，儿童与青少年肥胖及并发症问题也引起广泛关注，因此积极探讨肥胖及其并发症的病因与...
- 倪毓辉
- 关键词：肥胖抑制性差减杂交代谢性疾病
- hC10orfl16基因克隆、鉴定及与3T3-L1脂肪前体细胞功能研究
- hC10 orfl16基因是本研究应用抑制性差减杂交筛选到肥胖者脂肪组织特异高表达的新基因。Northern Blot检测发现8位肥胖者腹膜后脂肪组织中hC10 orfl16基因mRNA的表达均显著高于正常对照。Nort...
- 郭锡熔陈荣华倪毓辉王玢张敏费莉潘晓琴郭梅
- 文献传递
- TSG-6基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中表达水平的变化及TNF-α对其调节作用的研究被引量：4
- 2004年
- 目的 观察 3T3 L1脂肪细胞诱导分化过程中TSG 6基因mRNA表达水平的变化 ,探讨TNF α对成熟脂肪细胞中TSG 6基因表达水平的调节作用。方法 体外培养 3T3 L1脂肪细胞 ,在诱导 3T3 L1脂肪细胞分化成熟的基础上 ,应用重组TNF α干预分化成熟的脂肪细胞 ,采用RT PCR技术检测诱导分化不同时段及TNF α干预后不同时间脂肪细胞中TSG 6基因的表达水平。结果 (1)随脂肪细胞逐渐分化成熟 ,TSG 6基因mRNA表达水平逐渐升高。TSG 6基因表达水平除在细胞分化第0～ 2天、第 3～ 5天、第 4～ 6天和第 7～ 10天各时段内差异无显著意义 (P >0 0 5 )外 ,其余各时段之间表达水平 ,差异均有显著意义 (P <0 0 5 ) ;(2 )不同浓度重组TNF α(0 1～ 10 0ng/ml)均能显著抑制成熟脂肪细胞中TSG 6基因mRNA的表达 ,除外TNF α浓度 1 0ng/ml时 6～ 2 4h时段 ,其抑制作用呈现随TNF α浓度增加和刺激时间延长而明显增强的总体趋势。TNF α浓度为 0 1ng/ml时 ,TSG 6基因表达水平 6h内下降 33 73% ,12h内下降 97 39% ;TNF α浓度为 1 0ng/ml时 ,TSG 6基因表达水平 6h内下降 78 6 8% ,并持续至 2 4h ;TNF α浓度达 10 0ng/ml时 ,TSG 6基因表达水平 2h内即下降96 2 7% ,TSG 6基因的表达几乎被完全抑制。结论 (1)TSG 6基因可能参?
- 郭锡熔丁胜利潘晓勤龚海霞费莉倪毓辉陈荣华
- 关键词：细胞黏附分子脂肪细胞细胞分化TNF-Α诱导分化
- TNF-α对未分化及成熟3T3-L1脂肪细胞中TSG-6基因表达的调节作用
- 2005年
- 目的:探讨TNF鄄α对未分化及成熟3T3鄄L1脂肪细胞中TSG鄄6基因(tumornecrosisfactoralpha鄄stimulatedgene鄄6)表达水平的调节作用。方法:体外培养3T3鄄L1脂肪细胞,在3T3鄄L1细胞生长至完全融合后2天(第0天)或细胞诱导分化的第10天,应用重组TNF鄄α(0.1、1.0、10.0ng/ml)干预未分化(第0天)或已分化成熟(第10天)的脂肪细胞,采用RT鄄PCR技术检测干预后不同时间(0、0.5、2.0、6.0、12.0、24.0h)脂肪细胞中TSG鄄6基因的表达水平。结果:①不同浓度TNF鄄α对未分化脂肪细胞中TSG鄄6基因的表达水平均具抑制作用。TNF鄄α浓度0.1ng/ml时,TSG鄄6基因表达水平2h内下降67.30%,24h时下降76.05%;TNF鄄α浓度1.0ng/ml时,TSG鄄6基因表达水平0.5h内下降52.79%,24h时下降99.20%;TNF鄄α浓度10.0ng/ml时,TSG鄄6基因表达水平0.5h内下降96.14%,其表达几乎被完全抑制;②不同浓度TNF鄄α均能显著抑制成熟脂肪细胞中TSG鄄6基因的表达。TNF鄄α浓度0.1ng/ml时,TSG鄄6基因表达水平6h内下降33.73%,12h内下降97.39%;TNF鄄α浓度1.0ng/ml时,TSG鄄6基因表达水平6h内下降78.68%,并持续至24h;TNF鄄α浓度10.0ng/ml时,TSG鄄6基因表达水平2h内下降96.27%,TSG鄄6基因的表达几乎被完全抑制。
- 郭锡熔丁胜利潘晓勤龚海霞费莉倪毓辉陈荣华
- 关键词：脂肪细胞分化肿瘤坏死因子-Α
