刘爱芬
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：青岛农业大学农学与植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家葡萄产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 葡萄溃疡病菌限制性内切酶介导整合方法的建立及转化子库的构建被引量：3
- 2013年
- 【目的】摸索葡萄溃疡病菌(Lasiodiplodia theobromae)限制性内切酶介导整合(Restriction enzyme mediated integration,REMI)的转化方法,并构建CSS-01s(L.theobro-mae)的REMI转化子库。【方法】利用REMI转化方法,将线性化的含有潮霉素抗性基因(Hygromycin phosphotransferase gene,Hyg)的pUCATPH质粒转化CSS-01s菌株的原生质体;测定其对潮霉素B的敏感浓度,摸索不同酶解液和酶解时间对原生质体制备的影响,统计不同限制性内切酶酶量对转化效率的影响,以摸索出的最优条件构建CSS-01s菌株的REMI转化子库,采用Southern blot的方法验证转化子。【结果】首次建立了一套L.theobromae的REMI转化方法,经转化得到包含6 000余个转化子的L.theobromae CSS-01s转化子库,随机挑选的5个转化子经Southern blot分析,质粒均插入到了HindⅢ相应的酶切位点处。【结论】浓度为2%崩溃酶+2%蜗牛酶酶混合液、酶解4 h为原生质体获得的最优条件,每管转化体系中加入30 U HindⅢ时转化效率最高,该方法可以用来获得大量不同表型的REMI转化子。
- 张鑫刘爱芬刘爱芬张玮严红乔广行燕继晔
- 关键词：原生质体制备
- 葡萄溃疡病菌转化子致病力快速评价体系的建立被引量：2
- 2013年
- 为探索快速、稳定、高效的葡萄溃疡病菌转化子致病力评价方法,分别采用无伤接种、昆虫针针刺接种、打孔器打孔接种等3种接种方法,将随机选取的来自葡萄溃疡病菌REMI转化子库的50株转化子分别接种''‘富士’苹果果实和‘夏黑’葡萄一年生绿枝条,测量病斑大小。结果表明,用葡萄绿枝条接种能区分不同转化子的致病力,而苹果果实则仅能将致病力减弱的转化子筛选出来。在葡萄绿枝条上致病力减弱的转化子有96.15%在‘富士’苹果果实上的致病力也是减弱的,而用苹果果实接种未筛选到致病力增强转化子。上述结果为获得致病力突变体奠定了基础。
- 刘爱芬张鑫张玮燕继晔刘瑞琪庞倩茹李兴红黄金光
- 关键词：转化子致病力
