吕扬勇
- 作品数：42 被引量：100H指数：6
- 供职机构：河南工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程农业科学化学工程生物学更多>>
- 黑曲霉葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达及其高效发酵研究
- 2021年
- 葡萄糖氧化酶是一类能催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸-δ-内酯的酶类,在食品、药品以及生物传感器等领域具有广泛的应用前景。从黑曲霉中克隆出葡萄糖氧化酶编码序列,在毕赤酵母中实现了组成型和诱导型表达并分析了其酶学性质和发酵条件。结果表明:黑曲霉葡萄糖氧化酶的编码基因长度为1 818 bp,编码605个氨基酸,具有21个氨基酸组成的信号肽。毕赤酵母组成型表达葡萄糖氧化酶的发酵上清液中葡萄糖氧化酶的酶活可达1.2 U/m L,利用镍离子亲和层析纯化后得到了分子质量约为100 kDa的葡萄糖氧化酶。利用糖苷内切酶H(Endo H)对葡萄糖氧化酶去糖基化后,其分子质量约为70 kDa,与推测的分子质量相近。对黑曲霉葡萄糖氧化酶的酶学性质研究表明,该酶的最适反应pH 6.0,最适反应温度35℃,比活力60.9 U/mg。为了进一步提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量,构建了诱导型表达的毕赤酵母菌株并通过G418抗生素筛选获得了高效表达菌株。对该菌株进行高密度发酵(湿菌体200 g/L),甲醇添加量为2.5%,发酵至第7天时葡萄糖氧化酶发酵量可达133 U/m L,蛋白表达量约1.9 g/L。
- 卢洋张帅兵翟焕趁李娜吕扬勇胡元森蔡静平
- 关键词：葡萄糖氧化酶黑曲霉毕赤酵母
- 一株土壤来源的贝莱斯芽孢杆菌抑制黄曲霉生长机理研究被引量：5
- 2023年
- 为了更加安全有效地防治黄曲霉及其毒素污染,从花生田地土壤中分离获得了一株对黄曲霉生长具有良好抑制作用的菌株,通过平板对峙试验,验证其拮抗黄曲霉的效果;通过16S rDNA序列分析、构建进化树以及生理生化指标明确菌株种属信息;通过发酵优化、孢子萌发试验,发现该菌株在葡萄糖培养基、蔗糖培养基、牛肉膏培养基中的发酵液均能抑制黄曲霉孢子萌发,其中在葡萄糖培养基中的发酵液抑制效果最强,并考察了其对黄曲霉菌丝生长及孢子产生的抑制作用;采用PI和DAPI染色探讨了发酵液抑制黄曲霉菌丝生长的机理。结果表明:分离获得的菌株在平板对峙试验中能够显著抑制黄曲霉菌落生长,该菌株为革兰氏阳性菌株贝莱斯芽孢杆菌;在葡萄糖培养基中发酵48 h获得的发酵液对黄曲霉孢子萌发抑制率最佳,达到79.35%;在固体PDA培养基上对黄曲霉菌落生长抑制率为29%,对孢子生成的抑制率为54%;染色结果显示,发酵液中的抑菌物质能够通过破坏黄曲霉细胞膜的通透性以及损伤DNA的方式抑制菌丝生长。该菌株及其发酵液对黄曲霉具有较好的防治作用,具有进一步开发为农产品防霉剂的潜力。
- 王静张威樊磊谢澳文杨浩杰魏闪翟焕趁胡元森吕扬勇
- 关键词：黄曲霉拮抗作用菌丝生长
- 小麦赤霉病菌FgVPS26与FgRab7的相互作用及对DON毒素合成的影响被引量：4
- 2019年
- 小麦赤霉病菌合成DON毒素是多基因控制的次级代谢过程,阐明各种基因的调控作用有利于进行科学防控。以赤霉病菌为研究对象,通过酵母双杂交、实时定量PCR及ELISA等技术研究FgVPS26与FgRab7的相互作用及对DON毒素生物合成的影响。结果表明:FgVPS26和激活态FgRab7可以相互作用,但与原始态FgRab7不能相互合作。FgVPS26和FgRab7基因可相互影响其表达,与野生型菌株PH-1相比,当FgVPS26和FgRab7其中一个基因缺失时另一个基因的表达量将显著下降。另外,FgVPS26或FgRab7基因缺失也显著降低与DON毒素合成相关的Tri基因表达,从而导致同一生长时期突变菌株的DON毒素合成量比野生型菌株PH-1明显减少。因此,小麦赤霉病菌中FgVPS26和FgRab7可以相互作用并调控DON毒素的生物合成。
- 孟瑶翟焕趁张帅兵吕扬勇朱丽红王亚君蔡静平
- 关键词：呕吐毒素赤霉病菌相互作用基因表达
- 谷氨酸棒杆菌S9114在不同溶氧条件下发酵生产谷氨酸的代谢流分析被引量：11
- 2010年
- 建立了谷氨酸棒杆菌S9114合成L-谷氨酸(L-Glu)的代谢流平衡模型,应用该模型并结合S9114在10%和30%溶氧条件下发酵至中后期时胞外相关产物的分泌情况计算出其代谢流分布;通过MATLAB线性规划得到了谷氨酸合成的理想代谢流分布。代谢流分析结果表明,减少HMP和TCA循环的代谢流量,增加CO2固定的代谢流将有利于谷氨酸的合成;在谷氨酸发酵工艺控制中,溶氧是关键因素,发酵中后期提高溶氧有利于谷氨酸的生成,同时可抑制副产氨基酸的产生;主要副产物乳酸在理想代谢流分布中仍占有一定比例,说明乳酸在整个代谢过程中起到一定的作用。
- 李智涛卢志洪吕扬勇郑穗平
- 关键词：谷氨酸棒杆菌谷氨酸代谢流分析溶氧
- 黄曲霉野生型及LaeA缺陷型菌株胞外差异蛋白鉴定被引量：2
- 2016年
- 【目的】分析黄曲霉野生型产毒株及LaeA缺陷型无毒株在以小麦、玉米为培养基质中生长时的胞外差异蛋白,为进一步明确LaeA因子在黄曲霉产毒调控中的作用提供基础数据。【方法】将小麦及玉米籽粒粉碎后灭菌并加水配制成培养黄曲霉菌的基质,在产毒株(黄曲霉CA14野生型)及无毒株(LaeA缺陷型)培养0、48和72 h时取样,采用SDS-PAGE分别分析黄曲霉毒素B1(AFB1)及胞外差异蛋白,并采用液质联用四极杆飞行时间质谱技术[LC-MS-MS(Q-TOF)]对获得的胞外差异蛋白进行鉴定。【结果】黄曲霉野生型及LaeA缺陷型菌株均能将小麦和玉米基质中的小分子蛋白迅速转化,随着培养时间延长,LaeA缺陷型菌株的胞外蛋白较野生型菌株略少,不产生黄曲霉毒素。产毒株及无毒株胞外差异蛋白条带共有7个,主要为淀粉酶A、碱性蛋白酶、木聚糖酶F3和亮氨酸氨基肽酶A等生理酶类。【结论】黄曲霉产毒株与无毒株的胞外差异蛋白为生理酶类蛋白,该类酶蛋白主要与营养摄入有关,且影响黄曲霉菌丝的生长。
- 雷阳吕扬勇张帅兵陈菲吕昂胡元森
- 关键词：黄曲霉胞外蛋白
- 重组谷氨酸棒杆菌产苏氨酸发酵培养基的优化被引量：1
- 2010年
- 通过基因敲除构建了蛋氨酸合成途径关键酶基因metX缺失的重组谷氨酸棒杆菌R102ΔmetX。采用部分因子实验设计考察发酵培养基中各组分对重组菌产苏氨酸的影响。结果表明,葡萄糖、酵母粉和酶解酪素对产苏氨酸影响显著。继而采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,并结合中心组合实验和响应面对3个显著性因素进行分析,得到优化的发酵培养基组成:葡萄糖50.78 g/L,酵母粉6 g/L,酶解酪素0.99g/L,生物素80μg/L,VB1 2mg/L,CaCO3 20 g/L,(NH4)2SO4 15.15 g/L,MgSO4.7H2O 0.5 g/L,KH2PO4 0.5g/L,K2HPO4 0.5g/L,Fe-SO4.7H2O 0.02g/L,MnSO4.7H2O 0.02g/L,接种量8%。采用该优化培养基,供试菌株的胞外苏氨酸浓度为3.35g/L,较优化前提高了30%。
- 吕扬勇伍展红郑穗平
- 关键词：谷氨酸棒杆菌L-苏氨酸响应面培养基优化
- 储运粮食霉变状况的现场检测技术被引量：3
- 2020年
- 以过氧化氢酶活性为指标,研究适用现场快速检测粮食霉变状况的方法,结果表明:用高速搅拌法制备检测菌悬液的检测值变异系数最小,耗时是振荡洗涤法等常规方法的1/20~1/10;检测液制备条件对检测结果有显著影响,选用粮食样品加水后不浸泡、转速2300 r/min、搅拌时间40 s制备检测液,可减少粮食表皮破损率,获得稳定的检测结果。将建立的方法用于不同种类粮食及多个品种的霉变状况检测,结果表明,酶活性快速检测值与常规的带菌量检测结果相关性系数达到或超过0.99。当小麦霉变粒为2%时,酶活性检测与带菌量检测的结果分别为527 U/100 g和1.6×10^5cfu/g;酶活性检测、霉菌带菌量检测对不同比例霉变粒小麦检测值的相关性系数分别为0.99与0.97。因此,新建立的酶活性快速检测方法可较好地反映粮食的霉变状况,满足现场粮食快速检测的需求。
- 朱冰洁翟焕趁张帅兵吕扬勇李娜胡元森蔡静平
- 关键词：霉变带菌量
- 一株产蛋白酶菌株的鉴定及酶学特性研究被引量：2
- 2018年
- 蛋白酶是一类在食品、洗涤、医药等行业中广泛应用的酶制剂。利用酪素培养基从环境样品中筛选出一株产蛋白酶的菌株,对该菌进行鉴定,并对其酶学性质进行了分析。结果表明,分离获得的菌株CF-02具有较好的产蛋白酶能力,经生理生化及16S rDNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。菌株CF-02最佳产酶时间为发酵36 h,在生长稳定期的后期开始产酶。该菌株所产蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH值为8.0,属中温、中性蛋白酶。温度高于70℃,pH≤5.0或pH≥9.0时,该蛋白酶活性急剧下降,显示该酶对高温、酸、碱的耐受性均较差。浓度为2.5mmol/L的Ca^(2+)、Mn^(2+)和Cu^(2+)均可使酶活性升高约10%,对该酶有激活作用;同浓度的Fe^(2+)和Zn^(2+)均使酶活性下降约7%,对酶活性有抑制作用;Mg^(2+)、K^+和Na^+对酶活力无明显影响。将酶蛋白分离纯化后进行质谱鉴定,结果显示:该酶蛋白的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌YtoP蛋白序列相近,可从蛋白质和多肽N端选择性切除氨基酸残基的外切蛋白酶,是一种氨肽酶。SDS-PAGE电泳显示,菌株CF-02所产蛋白酶分子质量约为34 kDa。研究表明菌株CF-02有适用于工业生产的潜力。
- 陈菲张颐骏吕扬勇王龙飞吕昂胡元森
- 关键词：蛋白酶酶学特性芽孢杆菌
- 小麦病程相关蛋白wheatwin 1的表达及其对黄曲霉生长及产毒的影响
- 2018年
- 黄曲霉在储粮中的大量生长可严重危害粮食的储藏品质甚至产生真菌毒素。研究表明,小麦籽粒中含有多种病程相关蛋白,具有较强储藏霉变抗性的小麦品种胚部含有较多的病程相关蛋白,但其对储粮霉菌的生长和产毒的影响尚不清楚。通过PCR手段扩增从小麦基因组DNA中扩增出了病程相关蛋白wheatwin 1基因并将其在大肠杆菌中进行了表达,对wheatwin 1蛋白进行复性和纯化后分析其对黄曲霉生长及产生毒素的影响。结果表明编码成熟wheatwin 1蛋白的DNA序列长度为378 bp,将其在大肠杆菌中与谷胱甘肽转移酶融合表达可获得包涵体蛋白。将包涵体蛋白复性并利用Thrombin酶切后获得了具有核酸酶活性的wheatwin 1,其可降解黄曲霉RNA;进一步研究表明100 g/m L wheatwin蛋白可显著抑制黄曲霉孢子的萌发和黄曲霉毒素的积累。为进一步揭示wheatwin蛋白对黄曲霉生长和产毒的机理研究奠定了基础。
- 王岩张帅兵吕扬勇翟焕趁蔡静平胡元森
- 关键词：小麦病程相关蛋白黄曲霉真菌毒素
- 工科院校生物工程专业英语教学实践探索被引量：1
- 2016年
- 根据所在学校的工科背景及专业特色，本文分析了生物工程专业英语学习、教学过程中普遍存在的问题，包括学生英语素养参差不齐、教材内容缺乏更新及教学方式陈旧等问题，探索了自主性的学习方法及互动式教学方法，以期进一步提升工科院校生物工程专业英语教学的质量。
- 吕扬勇张帅兵胡元森
- 关键词：工科院校
