吴剑
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选
- 2009年
- 目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3X中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07进行超感染,构建抗EHEC O157∶H7 Stx2的Fab噬菌体抗体库。以纯化的Stx2为抗原进行筛选,获得抗EHECO157∶H7Stx2的特异性Fab抗体,Western blot法检测噬菌体抗体与毒素抗原的结合活性,并对所得阳性克隆进行基因序列分析。结果构建了一个库容为1.56×107的Fab抗体库,筛选出3株特异性较强的阳性克隆,其中2个可与Stx2A1亚单位抗原反应,1个可与Stx2B亚单位抗原反应。基因序列分析显示,轻、重链可变区氨基酸序列与GenBank中已注册的鼠免疫球蛋白可变区氨基酸序列同源性分别为98.5%和99.6%。结论已成功构建了鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,为进一步制备抗EHECO157∶H7Stx2的治疗性人源化抗体奠定了基础。
- 刘璐曾浩罗萍吴剑张卫军毛旭虎邹全明
- 关键词：EHECO157:H7噬菌体
- 抗EHEC O157：H7 Stx2a1的人鼠杂合Fab噬菌体抗体库的构建及导向筛选
- 目的：建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库，筛选抗EHEC O157：H7Stx2a1人源性抗体轻链。
方法：PCR扩增正常人外周血淋巴细胞人抗体全套轻链基因，克隆人含鼠源抗EHEC O157：H7 Stx2a1抗...
- 刘璐吴剑曾浩罗萍毛旭虎邹全明
- 关键词：医学免疫抗体鉴定基因文库
- 文献传递
