吴耀辉
- 作品数：33 被引量：100H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金湖北省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Chk1在K562/A02细胞耐药中的作用机制
- 2008年
- 目的研究检测点激酶1(Chk1)对K562/A02细胞周期及凋亡的影响,探讨Chk1在肿瘤细胞耐药中的作用机制。方法以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞株K562/A02为研究对象,与阿霉素共同孵育后,RT-PCR检测Chk1mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白质的表达及磷酸化水平,MTT法检测药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡。结果Chk1 mRNA及蛋白表达水平在两种细胞间无显著差异(均P>0.05);Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为(0.79±0.56),K562细胞为(0.27±1.47),其差异有显著性意义(P<0.05)。阿霉素作用6h后,致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞的(36.99±1.28)%(P<0.05),K562/A02细胞凋亡率为(6.25±0.81)%,显著低于K562细胞的(66.47±1.26)%(P<0.05)。阿霉素对K562/A02和K562细胞的IC50值分别为(109.65±0.26)mg/L、(1.08±0.74)mg/L,耐药倍数为102倍。结论由于G2/M期阻滞是导致白血病细胞耐药的机制之一,Chk1磷酸化水平与G2/M期阻滞和细胞凋亡密切相关,提示Chk1的活化状态可能参与K562/A02细胞的耐药机制。
- 张敏吴耀辉陈智超游泳邹萍
- 关键词：K562/A02细胞耐药CHK1
- pEGFP—survivin对GBC—SD细胞生长的抑制及对化疗敏感性的影响被引量：1
- 2010年
- 目的观察pEGFP—survivin对GBC—SD细胞化疗敏感性的影响。方法以MTT法检测GBC-SD、GBC—SD／EGFP和GBC—SD／survivin三种细胞的增殖活性；用RT—PCR和Western印迹、检测各组细胞中survivin mRNA和蛋白质水平的表达；以合适浓度的DDP作用相同的时间后，用MTT法检测3种细胞存活率，流式细胞仪测细胞凋亡，并用MTT法筛选IC50值，TUNEL法观察细胞核改变；另外检测DDP作用后各组细胞的caspase-3蛋白酶活性的变化。结果GBC—SD和GBC—SD／EGFP细胞的增殖活性大致相同，而GBC-SD／survivin细胞的增殖活性则明显下降；RT—PCR和Western印迹均发现GBC—SD／survivin细胞中的survivin表达水平较其余两种细胞明显下降；在给与DDP作用后，GBC-SD／survivin细胞存活率和IC50明显较低，细胞凋亡率较高，而3种细胞用TUNEL法染色后均可见棕色凋亡细胞核。给与DDP作用后，各组细胞caspase-3活性均呈现先升高后下降的趋势，但GBC-SD／survivin细胞中caspase-3的活性明显高于另外两种细胞。结论pEGFP-survivin表达的survivin shRNA能明显降低GBC—SD细胞中survivin的表达，提高对化疗药物的敏感性。
- 沈汉斌吴耀辉龙浩成郑启昌龚建平
- 关键词：SURVIVIN短发夹环RNA
- 抗转化生长因子β1的U1 snRNA嵌合型核酶体外剪切作用
- 2007年
- 目的:研究抗转化生长因子β1U1snRNA嵌合型锤头状核酶的细胞外切割活性。方法:通过计算机设计针对TGFβ1的锤头状核酶,然后把合成的核酶片段克隆入含有U1 snRNA启动子/增强子和终止子的U1snRNA核酶载体中。通过RT-PCR扩增获得TGFβ1的部分基因片段,将其克隆入T载体中T7启动子的下游,体外转录获得核酶和靶RNA,转录过程中掺入同位素,通过变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化回收。[32P]标记的核酶与靶RNA在不同条件下进行切割反应,变性PAGE电泳,放射自显影,分析反应结果。结果:活性的U1 snRNA嵌合型核酶(U1Rz803)在生理温度下具有良好特异的切割活性;而点突变型核酶U1Rz803m没有切割活性,因此这些结果显示U1Rz803设计是正确的。结论:本研究中制备的U1Rz803具有良好的特异催化切割活性。U1 snRNA嵌合型核酶U1Rz803有望在胞内抑制TGFβ1的表达,为研究转化生长因子(TGF)β1在造血调控中的作用机制提供有效工具。
- 刘芳邹萍吴耀辉张敏
- 关键词：转化生长因子Β
- Caspase-12短发夹状RNA在内质网应激性凋亡中的作用被引量：13
- 2005年
- 目的构建凋亡因子Caspase-12的短发夹状RNA(siRNA),观察其在体外对鼠粒单系白血病细胞WEHI-3细胞对凋亡的抵抗作用。方法设计并合成一对针对Caspase-12编码基因的siRNA,构建表达此siRNA的重组质粒psiRNA-Caspase-12,转染入WEHI-3细胞。检测胞内Cas- pase-12的mRNA和蛋白的表达。并检测转染后WEHI-3细胞的抗凋亡能力。结果酶切分析和测序证实构建成功,siRNA对Caspase-12的表达均有明显的抑制作用。染后WEHI-3细胞的抗凋亡能力增加。结论构建的重组质粒能有效抑制Caspase-12基因在白血病细胞株WEHI-3中的表达。并对内质网应激性凋亡具有抵抗能力。
- 刘芳邹萍陈敏张敏吴耀辉肖娟
- 关键词：RNA干扰CASPASE-12益康唑内质网白血病
- 血液病患者真菌感染二级预防现状被引量：2
- 2011年
- 侵袭性真菌感染（IFI）在恶性血液病患者中发病率和死亡率均较高。近年来，对侵袭性真菌感染早期诊断的进步和新的有效药物的应用提高了恶性血液病患者首次抗真菌治疗的疗效，使更多患者获得再次化疗和造血干细胞移植的机会。但既往确诊或临床确诊侵袭性真菌感染的血液病患者再次接受免疫抑制剂治疗或细胞移植时真菌感染复发的危险性增加，死亡率极高。因此，采取措施预防真菌感染的再发，即真菌感染的二级预防成为必然要求。真菌感染的二级预防已成为广大医务工作者的共识。
- 夏效升吴耀辉
- 关键词：血液病侵袭性真菌感染
- 供者型CIK细胞输注治疗异基因造血干细胞移植后白血病复发被引量：1
- 2013年
- 目的采用受者体内供者型或供者来源的细胞因子诱导杀伤细胞（CIK细胞）过继性免疫治疗异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后白血病复发的效果。方法回顾性分析2例allo—HSCT后白血病复发患者输注供者型CIK细胞成功开展过继性免疫治疗的临床资料。例1在移植后986d出现白血病复发，经化疗取得短暂部分缓解，采集受者外周血完全供者型单个核细胞扩增CIK细胞，先后给予受者5个周期的CIK细胞治疗。例2在亲缘allo—HSCT后158d出现白血病复发，采集亲缘供者外周血单个核细胞扩增CIK细胞，于移植后204d和294d给予2个周期的CIK细胞输注治疗。结果例1经化疗降低白血病细胞负荷后，经过1个周期的CIK细胞输注治疗，获得完全缓解，之后再次给予4个周期CIK细胞治疗，随访7个月取得持续完全缓解。例2复发后停用免疫抑制剂，并行化疗及输注供者干细胞采集物，于移植后187d出现急性移植物抗宿主病及髓外浸润情况，移植后204d输注1个周期的CIK细胞后，症状明显减轻。移植后294d给予第2个周期的CIK细胞治疗，骨痛缓解，现骨髓细胞学持续完全缓解，髓外病灶消失。结论受者体内供者型或供者来源的CIK细胞可用于allo-HSCT后白血病复发的治疗，效果良好，耐受性好。
- 李青吴耀辉仲照东游泳邹萍
- 关键词：白血病复发供者CIK细胞
- 多种化疗药对凋亡抑制蛋白Survivin在HL-60细胞中表达影响的研究(英文)
- 2006年
- 目的通过研究HL-60细胞在多种化疗药物作用后mRNA和蛋白的改变,初步探讨Survivin基因和耐药性之间的关系。方法用合适浓度的柔红霉素(DNR)、米托蒽醌(MIT)和三氧化二砷(As2O3)作用于HL-60细胞,随后用RT-PCR检测给与药物作用的第1天和第3天HL-60细胞中Survivin mRNA的表达情况,用Western blot检测Survivin蛋白的表达情况。结果在给予化疗药的第1天,3组HL-60细胞中Survivin mRNA表达水平全部降低:其中DNR下降了10％,MIT下降40％(P< 0．01),As2O3下降了25％(P<0．01)。在第3天,给予DNR和MIT组的HL-60细胞中Survivin mRNA表达较第1天有明显的升高, 分别上升20％(P<0．05)和65％(P<0．01);但给予As2O3组的Survivin mRNA表达仍持续降低,仅为第1天的68％(P<0．01)。 Western blot检测发现给予DNR和MIT作用3天后的HL-60细胞中Survivin蛋白含量分别升高了14％和11％,而给予As2O3组则下降了82％。结论白血病细胞给予化疗药后Survivin表达降低然后升高的现象可能与化疗中耐药性的发生有关;而三氧化二砷因有着不同的作用机制,可能会在逆转耐药性上发挥重要的作用。
- 吴耀辉邹萍张敏刘芳陈建华
- 关键词：白血病化学治疗米托蒽醌
- 凋亡抑制蛋白survivin在白血病细胞中的表达及其意义被引量：8
- 2005年
- 目的探讨白血病原代细胞中凋亡抑制蛋白survivin基因的表达情况,及其与疗效的关系。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测45例白血病患者和10例健康人骨髓中survivin的表达水平,并给与合适的方式化疗,评判疗效。结果白血病细胞中survivin mRNA阳性率为68.9%(31/45)。急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞中survivin mRNA表达阳性率为73.3%,较急性髓系白血病(AML)的63.6%稍高;慢性粒细胞白血病(CML)患者中survivin mRNA表达率很高,可达80.0%,慢性淋巴细胞白血病(CLL)中则为66.7%,但均高于正常对照组的20.0%(P<0.05)。在22例AML患者中,survivin mRNA表达阴性者接受2个疗程化疗后缓解率(CR)87.5%,明显高于表达阳性患者的64.3%。在15例ALL患者中也有类似的结果,CR分别为100%和81.8%。CML患者中,survivin mRNA阳性的4例中有2例两年内发生急变;CLL患者病情均较稳定。结论survivin基因在白血病细胞中有较高的表达,并与疗效及预后有密切的关系。
- 吴耀辉邹萍刘芳沈汉斌
- 关键词：聚合酶链反应白血病
- 氯氧甲苯咪唑诱导白血病细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2005年
- 为了研究氯氧甲苯咪唑(econazole)诱导鼠粒单核白血病细胞WEHI3凋亡的机制,利用AnnexinⅤ/PI双染实验测定细胞凋亡,Fura2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i),并抽取WEHI3细胞内质网部分蛋白,利用Westernblot测定caspase7、caspase12的蛋白表达。结果显示:econazole作用后WEHI3出现典型的凋亡改变,细胞内游离[Ca2+]i较对照明显升高,caspase12和caspase7表达随着细胞内钙离子浓度的提高而逐渐增加。结论:econazole能诱导WEHI3细胞凋亡,caspase12在此过程中起重要作用。
- 刘芳邹萍张敏吴耀辉肖娟
- 关键词：细胞凋亡CASPASE-12
- 用Fura-2/AM测定益康唑诱导鼠白血病WEHI-3细胞凋亡后细胞质游离钙浓度
- 2004年
- 目的 通过体外实验 ,研究益康唑 (Econazole)是否可触发鼠白血病细胞株WEHI 3细胞胞质 [Ca2 + ]i浓度的改变。方法 用Ca2 + 荧光探针 (Fura 2 /AM )负载WEHI 3细胞后测定Econazole作用WEHI 3细胞 12、 18、2 4h的胞内 [Ca2 + ]i浓度。结果 Econazole作用WEHI 3细胞 12、 18、 2 4h后的胞内 [Ca2 + ]i均高于对照组(80 6± 15 3)nmol/L ,分别为 (131 2± 11 2 ) ,(15 6 5± 2 0 1) ,(182 1± 13 6 )nmol/L。结论 提示Econazole作用WEHI 3细胞可增加细胞质内 [Ca2 + ]i浓度。
- 刘芳邹萍张敏吴耀辉
- 关键词：FURA-2益康唑白血病细胞凋亡细胞质
