姜国忠
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
- 供职机构：河南医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：河南省科技发展计划项目河南省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 地高辛标记探针原位杂交法检测人脑胶质瘤组织猴病毒40的表达
- 2001年
- 目的 :检测猴病毒 40 (SV40 )DNA在人脑胶质瘤中的定位表达 ,探讨其在脑胶质瘤发生发展中的生物学意义。方法 :采用地高辛标记探针原位杂交技术 ,检测 2 5 6例人脑胶质瘤和 11例正常脑组织标本。结果 :SV40DNA定位于胶质瘤细胞核 ,阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布 ;SV40DNA阳性率 40 .6 % (10 4/2 5 6 ) ,正常脑组织均未检测出SV40DNA ;SV40DNA阳性率与病理分级无关 (P >0 .0 5 )。结论 :SV40感染与人脑胶质瘤病因学密切相关 ;地高辛标记探针原位杂交技术 ,是探讨SV40病毒核酸在组织中定位、分布和感染机制的一种新的特异性方法。
- 陈东步星耀高冬玲姜国忠张云汉
- 关键词：脑胶质瘤猴病毒40地高辛原位杂交
- PCR在消减文库构建中的应用
- 2001年
- 目的 :消减文库构建过程中 ,用PCR技术快速筛选重组阳性克隆。方法 :将白色单菌落加入氨苄抗性LB培养液中 ,37℃摇振培养过夜 ,取细菌悬液作PCR模板。结果和结论 :以PCR方法筛查重组阳性克隆 ,可以简便快速鉴定重组阳性克隆 ,不需提取质粒。筛选重组阳性克隆可直接用细菌悬液作PCR模板 ,在消减文库构建时 ,能大大提高工作效率。
- 殷智榕高冬玲陈奎生姜国忠张云汉
- 关键词：PCR重组阳性克隆消减文库
- 食管癌消减cDNA文库的构建
- 2001年
- 目的 :采用消减抑制杂交技术 ,研究正常食管粘膜和食管癌组织之间的基因表达差异状况 ,分离食管癌相关基因片段 ,构建食管癌的消减cDNA文库。方法 :以食管癌癌组织为测试子 (tester) ,以正常食管粘膜组织为驱赶子 (driver) ,用消减抑制杂交方法分离食管癌差异表达片段。将该差异表达片段克隆至T载体 ,经蓝白斑筛选后 ,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒 ,构建食管癌消减cDNA文库。结果 :用消减抑制杂交技术分离食管癌差异表达片段 ,经蓝白斑筛选 ,得到 2 2 0个白色克隆 ;再用PCR方法快速筛选出 10 0个两端分别含连接子Adaptor1及Adaptor2R的阳性重组质粒 10 0个 ,从而成功地构建了中国人食管癌特异的消减cDNA文库。结论 :构建了中国人食管癌特异的消减cDNA文库。消减抑制杂交技术能快速有效地分离差异表达基因 ,方法简便、灵敏度高。使用PCR法快速筛选阳性克隆 。
- 殷智榕张云汉陈东高冬玲姜国忠郝志芳
- 关键词：食管癌CDNA文库
- 食管癌相关基因片段的筛选与鉴定被引量：7
- 2001年
- 目的 :从已构建的中国人食管癌特异的消减cDNA文库中 ,初步筛选与鉴定食管癌相关基因片段。方法 :随机挑选 48个片段作反Northern印迹杂交分析 ,将杂交信号有差别的 15个片段送测序公司进行测序 ,用Gen BankBlast程序检索 ,以同源性很小的cDNA片段作为新基因的候选基因 ,观察其在食管癌组织和正常食管粘膜组织中的表达情况。结果 :所获得的 7个序列中 :3y5 9与已知基因同源性很小 ,且 3y5 9在 30例食管癌及其配对正常食管粘膜组织中 ,19例 (6 3.3 % )表达有差别 ,11例 (36 .7% )表达无差别 (P <0 .0 5 )。 3y88与已知基因geminin基因部分同源。另外 5个片段 3y2 0 ,3y14,3y90 ,3y91和 3y92分别与核糖体蛋白RpL7a,TLH2 9蛋白驱动子 ,Hsp70 /Hsp90 organizingprotein ,Keratin6 (KRT6C)和内膜蛋白等已知基因序列高度同源。结论 :3y5 9可能是与食管癌的发生、发展有关的新的候选基因。首次发现 ,geminin基因 ,核糖体蛋白RpL7a,TLH2 9蛋白驱动子 ,Hsp70 /Hsp90 organizingpro tein ,Keratin6 (KRT6C) 。
- 张云汉殷智榕温洪涛陈东高冬玲姜国忠
- 关键词：食管癌反转录PCRCDNA文库
- 荧光标记mRNA差异显示技术在分离食管癌相关基因片段中的应用被引量：2
- 2001年
- 目的 :以荧光标记的mRNA差异显示技术分离食管癌及其正常食管粘膜组织相关的差异基因片段。方法 :结合GenomyxLRTM DNA测序 /差异显示系统及GenomyxSCTM 荧光图象扫描系统 ,以及配套的FluoroDD和HI EROGLYPHmRNAProfileKit,采用荧光标记的mRNA差异显示技术进行检测。结果 :从人食管癌及正常食管粘膜组织间 ,同时直接分离出了相关的癌基因或抑癌基因片段 74条。结论 :该技术方便、快捷 。
- 张云汉陈东高冬玲殷智榕姜国忠李靖若贺建业
- 关键词：MRNA差异显示技术荧光标记食管癌
- 人食管癌相关基因cDNA片段的克隆、筛选与初步鉴定被引量：3
- 2001年
- 目的 :筛选和鉴定人原发性食管癌组织的相关基因 ,揭示食管癌的癌变机理。方法 :用高效、灵敏的荧光mRNA差异显示技术 ,以食管癌及相应的正常食管粘膜组织为对照 ,通过对其基因表达的比较 ,找出差异条带 ,利用ReverseNorthernDotBlot、DNA序列分析和NorthernBlot,并结合mRNA原位杂交技术对被筛片段进行鉴定。结果 :①在实验中分离、鉴定了 74条差异片段 ,其中包括正常组织表达而癌组织中不表达的差异片段 5 4个 ,癌组织中表达而正常组织不表达的差异片段 2 0个。②其中 1个片段C5 7(337bp)在GenBank数据库中没有发现同源的已知基因或片段 ,推测其可能为食管癌相关基因。③经NorthernBlot检测C5 7在癌组织中有表达信号。④原位杂交技术检测C5 7在癌组织中具有较高的阳性表达率 (74% )。结论 :食管癌组织中C5 7可能是新的食管癌相关的候选癌基因 。
- 陈东张云汉殷智榕高冬玲姜国忠贺建业王尧河寿思明
- 关键词：食管癌MRNA差异显示技术杂交CDNA
- 脑星形胶质细胞瘤组织P21^(WAF1/CIP1)mRNA的表达与p53基因突变的关系
- 2000年
- 目的：探讨脑星形胶质细胞瘤组织Ｐ２１^(WAF1/CIP1) ｍＢＮＡ的表达与p^(53)基因突变的关系及其意义。方法：应用 ＲＴ－ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３８ 例新鲜脑星形胶质细胞瘤组织中上述两种基因进行研究。结果：p^(53)基因在脑星形胶质细胞瘤组织中的突变率为２８．９％（１１／３８），且在Ⅲ、Ⅳ级肿瘤突变率显著高于Ⅰ～Ⅱ级者（Ｐ＜０.０５）；Ｐ２１^(WAF1/CIP1)ｍＲＮＡ在Ⅲ，Ⅳ级中的表达显著低于Ⅰ～Ⅱ级肿瘤组织（Ｐ＜０．０１）；１１例p^(53)基因突变组中，Ｐ２１^(WAF1/CIP1)ｍＲＮＡ表达阳性率明显低于２７例p^(53)基因未突变组（Ｐ＜０．０５）。结论：脑星形胶质细胞瘤组织中Ｐ２１^(WAF1/CIP1)ｍＲＮＡ的低表达可能与p^(53)基因突变有关。
- 姜国忠陈奎生殷智蓉陈东高冬玲黄孝立张云汉
- 关键词：脑星形胶质细胞瘤P53基因
- 改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的比较被引量：2
- 2000年
- 目的 :比较改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的差别。方法 :应用两种方法分别提取 2 0例兔肝脏的总RNA ,对所提RNA的产率、纯度及完整性进行鉴定。结果 :对比两种方法所提的RNA的产率、纯度及完整性 ,均无显著性差异 ,且RT_PCR产生均扩增出了 β_actin的目的条带。 结论 :采用改良一步热酚法较之Trizol试剂盒更具有简便经济的特点 。
- 高冬玲陈东殷智榕姜国忠张红新张云汉
- 关键词：RNA
- 大肠腺瘤及癌中细胞凋亡和bcl-2、bax基因的表达被引量：13
- 1998年
- 目的：探讨细胞凋亡及其调控基因ｂｃｌ－２和ｂａｘ与大肠癌发生发展之间的关系。方法：采用Ｆｅｕｌｇｅｎ染色、ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术和免疫组织化学Ｓ－Ｐ法，分别检测大肠正常粘膜、腺瘤、癌及癌旁非腺瘤性不典型增生中细胞凋亡率和ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因的表达。结果：大肠腺瘤及癌细胞凋亡率显著高于正常粘膜（Ｐ＜０．０１）。高分化癌凋亡率显著高于低分化癌（Ｐ＜０．０５）。ｂｃｌ－２在正常粘膜腺窝底部、７８．９％（１５／１９）的腺瘤、７５％（３０／４０）的癌及８９．５％（１７／１９）的癌旁不典型增生中有表达。高分化癌与低分化癌阳性率差异显著（Ｐ＜０．０５）。癌的ｂｃｌ－２表达与凋亡率显著负相关（Ｐ＜０．０５）。ｂｃｌ－２／ｂａｘ与大肠癌细胞凋亡率有关（Ｐ＜０．０５）。结论：大肠癌发生过程中细胞凋亡受到抑制，表现为凋亡的相对不足。ｂｃｌ－２／ｂａｘ是影响细胞凋亡的重要因素。
- 徐晓丽殷智榕黄颖姜国忠
- 关键词：大肠肿瘤细胞凋亡BCL-2基因BAX基因
