公共文化服务平台

孟麟: 作品数：32 被引量：63H指数：4; 供职机构：北京大学临床肿瘤学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

THBS2特异性单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4: 2020年; 目的:制备THBS2特异性单克隆抗体并鉴定其特性,为临床应用奠定基础。方法:表达并纯化THBS2不同截断体片段的GST融合蛋白,经小鼠免疫、细胞融合及筛选,制备THBS2特异性单克隆抗体,然后对获得的单抗亲和力和特异性及在不同免疫学实验中的应用进行鉴定,最后采用免疫沉淀法对36例胰腺癌患者及20例正常人血清THBS2进行检测。结果:获得了10株杂交瘤细胞株,均能稳定分泌抗体;10株单抗经ELISA、Western blot和免疫沉淀证实均能特异性识别人THBS2,且发现THBS2在胰腺癌患者血清中的表达水平显著高于正常人(P<0.0001)。结论:成功制备获得了亲和力高、特异性好的抗人THBS2单克隆抗体,为血清THBS2的检测奠定了基础。; 王冰肖克源孟麟寿成超; 关键词：胰腺癌单克隆抗体

抗猪鼻支原体单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2: 2003年; 目的 :制备抗猪鼻支原体 (M .hyorhinis,M .hy)的单抗隆抗体 (monoclonalantibody ,McAb) ,为相关研究提供工具。方法 :用灭活的猪鼻支原体免疫BALB/c小鼠 ,运用传统的细胞融合技术制备抗猪鼻支原体单克隆抗体。单抗鉴定采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)和免疫组织化学 (immunohistochemistry ,IHC)方法。结果 :经ELISA筛选获得了一株抗猪鼻支原体的单克隆抗体 ,该抗体亚类为IgG2b。ELISA结果表明该单抗仅与猪鼻支原体反应而与肺炎支原体和发酵支原体不反应。用经PCR检测支原体阳性的胃癌切片做免疫组化 ,结果显示 ,该抗体能与PCR阳性的胃癌组织切片产生特异性反应。结论 :获得一株抗猪鼻支原体特异性单克隆抗体 ,可为相关研究提供工具。; 张艳丽孟麟李燕寿成超; 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附实验免疫组织化学

短肽库中血管内皮细胞生长因子受体Flt-1拮抗剂筛选条件的改进被引量：2: 2001年; 目的 :改进噬菌体肽库的筛选条件 ,提高筛选阳性率及阳性克隆重复性。使血管内皮细胞生长因子受体Flt 1拮抗剂的筛选更为有效。方法 :通过对血管内皮细胞生长因子受体Flt 1的原核表达产物的变性复性处理 ,获得相对纯化的可溶性Flt 1受体。将该可溶性受体固相化 ,对噬菌体表达 12肽库进行 4～ 5轮Bio panning后 ,挑取单个噬菌斑制备高滴度噬菌体上清。用ELISA法初步鉴定各噬菌体克隆与sFlt 1的特异性结合并测定阳性克隆的DNA顺序。在Bio panning过程中增加非特异性蛋白的预吸附 ,并减少输入噬菌体数量 ,再次筛选短肽库。结果 :经过第一次筛选 ,获得了一系列具有一定重复性与同源性的噬菌体克隆。改进筛选条件后 ,筛选阳性率由2 %提高到 8.3% ,阳性克隆的重复性也得到显著提高。该高重复阳性克隆的氨基酸顺序与前一次筛选获得的阳性克隆有较高同源性。结论 :Bio panning条件的改进提高了筛选效率 ,为不纯蛋白筛选短肽库积累了经验 ,并为血管内皮细胞生长因子受体拮抗剂的研制奠定了基础。; 安平寿成超孟麟董志伟; 关键词：血管内皮细胞生长因子受体拮抗剂噬菌体 VEGF受体

抗人p185^(erbB2)人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定被引量：3: 2004年; 目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体的免疫原性 ,为进一步的应用研究奠定基础。方法 :RT -PCR扩增p185 erbB2 单抗 1 2的轻、重链可变区基因 ,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中 ,脂质体转染CHO dhfr-细胞。经RT -PCR、间接ELISA、Westernblot检测人 -鼠嵌合抗体的表达水平 ,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定。此外 ,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用。结果 :用RT -PCR、间接ELISA、Westernblot方法证明人 -鼠嵌合抗体在CHO dhfr-细胞中表达 ;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185 erbB2的细胞反应阳性 ,与低表达p185 erbB2 的细胞反应阴性 ;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用。结论 :CHO dhfr-细胞表达的人 -鼠嵌合抗体可与p185 erbB2 特异性结合 ,并可抑制高表达p185 erbB2 的肿瘤细胞生长 ,表明抗人p185 erbB2 人; 姜北海刘文斌孟麟吴健寿成超; 关键词：人-鼠嵌合抗体 CHO HER2/NEU 重链可变区

PRL-3基因C104S位点突变体和CAAX缺失体的构建及表达被引量：1: 2009年; 目的:分别构建肝再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)基因C104S位点突变和C端CAAX缺失的myc标签和GFP荧光标签重组质粒pcDNA3-myc-PRL-3(C104S)、pEGFP-PRL-3(C104S)、pcDNA3-myc-PRL-3(△CAAX)和pEGFP-PRL-3(△CAAX),并进行真核表达,为PRL-3的后续功能研究提供有效的工具。方法:设计PRL-3基因C104S点突变、C端CAAX缺失的特异性引物,以pcDNA3-myc-PRL-3质粒为模板,通过基因克隆、一步法点突变的方法构建各重组质粒,通过酶切和测序鉴定后转染真核细胞,检测其在细胞中的表达并观察定位情况。结果:成功构建了4种重组质粒,并能在结肠癌细胞LoVo中表达。用激光共聚焦扫描显微镜对细胞中绿色荧光融合蛋白的定位观察发现,当PRL-3的CAAX位点缺失后,PRL-3由内膜系统大量入核,与理论预期相符。结论:获得了PRL-3基因C104S位点突变体和CAAX缺失体重组真核表达质粒并能在细胞中表达,为进一步研究PRL-3的功能提供了条件。; 李伟军邢晓芳曲立科孟麟寿成超; 关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶点突变基因缺失

IDH1单克隆抗体的制备及表位鉴定和双抗体夹心ELISA的建立被引量：3: 2019年; 目的:制备抗异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)单克隆抗体,并确定其识别IDH1的表位区域,在此基础上建立双抗体夹心ELISA法,为检测人外周血IDH1蛋白奠定基础。方法:用原核表达的IDH1-GST蛋白免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合技术和ELISA筛选获得抗IDH1的单抗克隆。构建并表达IDH1的不同截短体融合蛋白,用Western blot和ELISA检测不同单抗与不同截短体蛋白的反应。通过双抗体夹心ELISA进行两两配对,获得有较好检测效果的配对抗体。结果:通过GSTIDH1和GST蛋白的ELISA双筛和Western blot的进一步鉴定,获得了8株抗IDH1的单克隆抗体,分别命名为1H8、4H7、5C8、7C3、7E12、13F6、16B11和16H7;5C8和7C3抗体识别的抗原表位位于IDH1 119~197位氨基酸;4H7的识别表位位于197~211位氨基酸,7E12和16B11的识别表位位于211~314位氨基酸,1H8和16H7的识别表位位于314~329位氨基酸,13F6的识别表位位于314~415位氨基酸。在双抗体夹心配对实验中,1H8包被抗体,4H7作为检测抗体,可获得相对较高的检测敏感性。结论:制备获得了8株抗IDH1特异性单克隆并鉴定了各自的抗原表位识别区域,初步建立了ELISA双抗体夹心检测法,为后续外周血中IDH1的检测奠定了基础。; 杜晓娟孟麟孙天一寿成超; 关键词：IDH1 单克隆抗体抗原表位双抗体夹心ELISA

HER-2模拟表位mut串联肽载体的构建及表达: 2010年; 应用HER-2 B细胞表位模拟小肽mut,构建含有该小肽的原核串联肽表达载体,使表达蛋白产生多个小肽抗原表位。将mut小肽DNA序列定向插入pET28a(+)载体中,构建原核表达载体pET28a-mut1,在此基础上将mut基因序列进行同向串联,获得一系列串联肽表达载体pET28a-mut2、pET28a-mut4、pET28a-mut8及pET28a-mut16,将串联肽表达载体转化大肠杆菌BL21,经常规IPTG诱导后,正确表达目的蛋白。Western blot结果提示,mut小肽经串联后,可增强与Heceptin的结合能力。小肽串联表达可产生多个抗原表位,从而为进一步小肽疫苗的功能研究及HER-2疫苗的研制奠定了一定基础。; 赵丽丽孟麟姜北海; 关键词：HER-2 疫苗

酪氨酸磷酸酶PRL-3增加人胃癌细胞BGC823的SP细胞比例并提高其对化疗药物的耐受性被引量：4: 2013年; 蛋白酪氨酸磷酸酶PRL-3是近年发现的蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员,能促进肿瘤细胞的侵袭、转移及上皮细胞间质转型,提示PRL-3可能在肿瘤发生发展及诱导肿瘤干细胞生成中发挥重要作用.由于侧群(SP)细胞具有许多干细胞的性质,SP细胞分选是目前筛选和分离获得干细胞或前体细胞常用的有效方法.为探讨PRL-3在诱导干细胞生成中的潜在作用,本文在建立过表达PRL-3的人胃癌细胞BGC823的基础上,通过SP分选和CCK-8的方法分析PRL-3对BGC823细胞中SP细胞的比例以及对化疗药物耐受性的影响.结果提示,高表达PRL-3提高BGC823中SP细胞的比例(2.5%vs 9.4%),同时增加BGC823对化疗药物紫杉醇和顺铂的耐受性(相对于对照细胞,其耐药指数分别为1.75和1.29).由于SP细胞的产生和细胞耐药性的提高与ABC家族基因表达水平上调密切相关,通过定量RT-PCR和Western印迹检测发现,PRL-3能上调ABCB1和ABCG2的表达.上述研究结果表明,PRL-3有可能通过上调ABCB1和ABCG2的表达,增加胃癌细胞BGC823的SP细胞比例并增加其对化疗药物的耐受性.; 宋倩孟麟曲立科廉沈沂寿成超; 关键词：PRL-3 侧群细胞

短发夹RNA载体稳定抑制端粒相关蛋白TERF2IP1表达的HCT116细胞的构建: 2015年; 目的:构建针对TERF2IP1基因的短发夹RNA(sh RNA)表达载体,在HCT116细胞中鉴定该载体对TERF2IP1基因的干扰效果。方法:设计针对TERF2IP1基因的sh RNA序列,将其克隆至p GPHI/Hygro载体中,瞬时转染HCT116细胞48 h后,用400 mg/m L的潮霉素筛选抗性克隆,获得阳性单克隆细胞株;分别提取细胞总RNA和蛋白,进行RT-PCR和Western印迹,检测TERF2IP1的表达水平。结果:构建了4对针对TERF2IP1基因的sh RNA表达载体,通过潮霉素筛选获得稳定干扰TERF2IP1基因的HCT116细胞系,实时定量PCR和Western印迹实验均证实潮霉素筛选后,HCT116细胞中TERF2IP1的表达水平明显降低。结论:构建了4对人TERF2IP1基因的sh RNA表达载体,获得4株分别针对TERF2IP1基因不同位点的稳定干扰HCT116细胞株。; 廉沈沂孟麟杨永勇寿成超; 关键词：HCT116细胞短发夹RNA

分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用: 2014年; 目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。; 曹燕飞吕娟孟麟曲立科寿成超

孟麟

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

孟麟

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈