张帆
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
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- Mus81基因在乳腺癌中的表达及其意义被引量：3
- 2013年
- Mus81基因是1个功能强大的抑癌基因。Mus81在肝癌中表达下调，其表达降低会导致肝癌的恶性程度增加、侵润性增强、预后不良。我们采用逆转录-聚合酶链反应（1iT-PCR）检测乳腺癌病灶组织及其对应的癌旁组织、乳腺良性病变组织中Mus81mRNA表达，探讨Mus81表达与乳腺癌临床病理特征的关系。
- 钱颖张帆倪晓妍卢韬董学君
- 关键词：乳腺癌逆转录-聚合酶链反应MRNA表达抑癌基因表达下调恶性程度
- 小鼠甲基转移酶EZH2基因慢病毒表达载体的构建及验证
- 2013年
- 目的构建小鼠组蛋白H3K27三甲基转移酶EZH2基因慢病毒载体及鉴定。方法以携带EZH2 cDNA的PCMV-SPORT6载体为模板,自行设计携带有Kpnl和Xmal酶切位点的引物PCR扩增出目的基因编码序列,扩增产物用内切酶酶切后定向克隆到慢病毒载体PLenti-eGFP-NEO中,通过PCR、酶切及测序验证载体;将重组慢病毒载体和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE及pMD2G组成的四质粒系统,共转染293T细胞包装成慢病毒,收集含病毒颗粒的细胞上清液,浓缩和纯化后得到高效价的病毒液,转染293T细胞进行效价测定。结果 PCR扩增出约2241bp的序列,构建的慢病毒载体测序结果与Gene-bank报道的目的基因序列一致;四质粒系统成功共转染入293T细胞中,在细胞中能够稳定表达,包装出了2.1×108TU/ml的病毒液。结论成功构建了小鼠EZH2基因慢病毒载体,并得到2.1×108TU/ml高效价的病毒液。
- 卢韬张帆孙荷吕娟杨明峰董学君
- 关键词：组蛋白甲基转移酶慢病毒载体293T细胞
- 小鼠BrglshRNA慢病毒载体构建及其在骨髓间充质干细胞中的沉默效应被引量：2
- 2013年
- 本研究拟构建慢病毒干扰载体高效下调BM—MSCs中Brgl蛋白水平，为进一步研究其在肝细胞分化中的功能奠定基础。
- 董学君孙荷张帆吕娟钱颖吴云路
- 关键词：骨髓间充质干细胞慢病毒小鼠肝细胞分化MSCS
- Brg1在肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子4诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用
- 2013年
- 小鼠胎肝细胞持续表达Brg1蛋白，且干扰Brg1可引起白蛋白（ALB）表达下降，提示其可能是调节肝细胞分化的重要因子。我们通过慢病毒载体干扰小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）中Brg1表达，探讨其在肝细胞生长因子（HGF）、成纤维细胞生长因子4（FGF4）启动BM-SCs定向分化肝细胞中的作用及其机制。
- 董学君孙荷张帆吕娟卢韬钱颖吴云路
- 关键词：成纤维细胞生长因子肝细胞生长因子骨髓间充质干细胞肝细胞分化胎肝细胞定向分化
- 甲基化转移酶Suv39h1基因慢病毒表达载体构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建小鼠H3K9甲基转移酶Suv39h1基因慢病表达毒载体。方法设计并合成带有Kpnl和Xmal酶切位点的引物,以携带Suv39h1 cDNA的PCMV-SPORT6载体为模板扩增目的基因,将其与Lenti-eGFP-Neo载体双酶切,T4连接酶连接,构建成PLenti-eGFP-Suv39h1重组载体,转化感受态细胞DH5α,PCR筛选阳性克隆质粒,酶切与测序鉴定正确后,将慢病毒四质粒系统共转染293T细胞,包装及效价测定。以感染复数(MOI值)为10和30的慢病毒颗粒感染293T细胞,RT-PCR检测Suv39h1 mRNA表达。结果 PCR、酶切及测序结果均显示目的片段插入正确,四质粒共转染293T细胞后,镜下可见95%的细胞表达绿色荧光;效价测定为2.11×108TU/ml;RT-PCR检测显示,MOI值为30的Suv39h1表达量是MOI值为10的3倍,两者均可在293T细胞中均匀稳定表达。结论成功构建Suv39h1基因慢病毒表达载体,为后续Suv39h1基因功能研究奠定了基础。
- 张帆卢韬孙荷吕娟杨明峰董学君
- 关键词：组蛋白甲基转移酶慢病毒载体
- 组蛋白H3K27三甲基化抑制FGF4、HGF诱导BM-MSCs分化肝细胞及其分子机制
- 卢韬吕娟孙荷张帆杨超董学君邵健忠项黎新
- 简要技术说明及主要技术性能指标:1.采用化学抑制剂分别阻断ERK1/2、P38和MSK1信号通路后，添加FGF4、HGF诱导BM-MSCs分化肝细胞，Westernblot检测p-ERK1/2、p-P38和p-MSK1的...
- 关键词：
- 关键词：肝脏疾病治疗肝细胞移植治疗
- Jmjd3基因慢病毒干扰载体的构建及其去H3K27三甲基化作用研究
- 2013年
- 目的构建针对小鼠Jmjd3基因的RNAi慢病毒载体,感染小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cells,mBM-MSCs)后观察其对Jmjd3基因表达的影响及对组蛋白H3K27me3的去甲基化作用。方法根据Jmjd3mRNA序列设计并合成3对shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入PLL3.7慢病毒干扰载体,双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,重组质粒与其他3种辅助包装质粒(pRsv-REV,pMDlg-pRRE,pMD2G)共转染293T细胞生产病毒液,病毒液感染mBM-MSCs,荧光定量PCR和Western blot检测目的基因Jmjd3的表达,筛选出最有效的干扰序列。Western blot检测组蛋白H3K27me3的表达量,分析Jmjd3的生物学功能。结果双酶切和测序结果证实Jmjd3基因shRNA序列正确插入慢病毒载体。荧光定量PCR和Western blot结果显示,感染后Jmjd3表达显著下调,与空载体对照组相比,Jmjd3-shRNA1组、Jmjd3-shRNA2组和Jmjd3-shRNA3组分别下调88.9%(P<0.001)、67.9%(P<0.001)和72.4%(P<0.001),Jmjd3-shRNA1组为最佳干扰组。Western blot结果显示干扰Jmjd3之后,H3K27me3的表达较空载体对照组升高。结论成功构建了针对小鼠Jmjd3基因的慢病毒干扰载体,并能有效抑制mBM-MSCs中Jmjd3基因的表达,Jmjd3具有组蛋白H3K27me3的去甲基化作用。
- 吕娟孙荷张帆董学君
- 关键词：慢病毒载体组蛋白去甲基化酶间充质干细胞
